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1.
人血红细胞胞浆部分经(NH_4)_2SO_4沉淀,DEAE-纤维素(DE52)柱层析,磷酸纤维素柱层析(P11)得到部分纯化的PTPP,产率:5.7%,提纯1075倍。以(32) ̄P-Tyr-Poly(G_4:T)作底物,测得其表征Km约为0.5-0.8μmol/L,该酶的最适pH和最适温度分别为7.0-7.8及37-40℃。Zn ̄(2+)等二价金属离子及Na_3VO_4等酸根基团对其活性有明显的抑制作用;EDTA、甘油及DTT、巯基乙醇等则对其有强烈激活作用;而氟化物、酒石酸等对PTPP活性基本无影响。此外,某些蛋白质、氨基酸、核苷酸及抗肿瘤药物等对PTPP活性也都有不同程度的影响。特别是一些PKs及PPs在体外对PTPP活性也具有不同的作用。  相似文献   
2.
通过测定红细胞胞浆及膜中的PTPP活性,发现人正常血红细胞中胞浆PTPP活性约占红细胞PTPP总活性的70-80%,膜中只有约20-30%的PTPP活性。很多因素诸如:病变、PH值、温度、离子强度、细胞贮存时间以及药物等,对PTPP在胞浆与膜中的分布有影响。可以推测:膜上的PTPP能通过某种机制解离下来,进入胞浆;相反的过程,胞浆中的PTPP也能通过某种机制与膜结合。这种偶联与去偶联的具体机制及其生理功能还有待进一步探索。  相似文献   
3.
目的:从单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗DNA-PKcs的人源抗体,用于肿瘤治疗或诊断目的。方法:经抗原性分析及BLAST比对,选定人DNA-PKcs蛋白中抗原性高且与其他蛋白没有同源性的片段,进行原核表达及纯化后将其固定在抗原管上,通过4轮“吸附-洗脱-扩增”过程从大容量抗体库中筛选特异性抗体,转化HB2151菌,制备抗DNA-PKcs的可溶性单链抗体;ELISA检测抗原-抗体结合活性。结果:经生物信息学分析,确定抗原性高且与其他蛋白没有同源性的DNA-PKcs片段DPK3(250个AA)、DPK4(257个AA)。经过4轮筛选,获得26个特异性结合DPK3及31个特异结合DPK4的克隆,指纹分析分别有5种和21种不同的可变区片段;成功制备了可溶性抗体。并做了抗原结合活性鉴定。结论:利用单链大容量抗体库获得抗DNA-PKcs的噬菌体抗体基因并且成功制备成可溶性抗体,为今后的研究和应用奠定了基础。  相似文献   
4.
用部分纯化的胞浆PTPP分别与去PTPP活性的红细胞血影(dPTPP-Ghost)和内向外翻红细胞膜(dPTPP-IOV)结合,结果发现:胞浆PTPP不仅能与红细胞膜结合,而且与dPTPP-IOV的结合能力强于与dPTPP-Ghost的结合。很多因素,诸如:温度,pH,离子强度,结合时间及某些试剂等不仅对PTPP与膜的结合有影响,且对PTPP与dPTPP-10V结合的影响比与dPTPP-Ghost结合的影响更为显著。当胞浆PTPP与红细胞膜结合后,其性质发生变化,这主要表现在稳定性增强;Km减小;Zn ̄(2+)、VO等的抑制作用及EDTA、甘油等的激活作用都明显减弱,甚至向相反的作用转化。此外,红细胞膜的磷酸化/脱磷酸化对PTPP的结合有影响,这暗示磷醚化作用对此可能具有调节意义。  相似文献   
5.
NNK诱发BEP2D细胞产生活性氧及其对DNA的损伤   总被引:4,自引:0,他引:4  
通过测定细胞内和细胞上清中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,以及DNA 加合物——8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-hydroxydeoxyguanosine,OH8dG)含量,对烟草特异亚硝胺类化合物4-甲基亚硝胺-1(3-吡啶基)-1-丁酮(4-(m ethylnitrosam ino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone,NNK)诱发人乳头状病毒永生化的人支气管上皮细胞(hum an papillom avirus-im m ortalized hum anbronchialepithelialcellline,BEP2D)产生的ROS及其对DNA 的氧化损伤进行研究,并观察纳米硒的保护作用.结果表明,BEP2D 细胞经不同浓度的NNK 作用后,细胞内和细胞上清中ROS以及OH8dG含量均显著增加,并有较好的剂量效应关系.1 μm ol·L- 1纳米硒(nanoselenuim ,NS)能明显抑制NNK 诱发BEP2D细胞产生的ROS及OH8dG 水平.揭示NNK 能造成细胞的氧化损伤,而NS对NNK 所致细胞的氧化损伤有保护作用.  相似文献   
6.
活性氧诱发人类11号染色体基因突变   总被引:1,自引:0,他引:1  
对体外产生的和内源性刺激产生的活性氧 (ROS)诱发人类 11号染色体 (Hchr 11)基因突变规律及其突变谱进行研究 .体外羟自由基 (·OH)用过氧化氢 (H2 O2 )与Fe2 + 反应产生 ,并用化学发光(CL)进行相对定量分析 ;内源性ROS用佛波醇酯 (PMA)刺激人外周血白细胞产生 ,并用CL和特异性抗氧化物检测和鉴定 ;用包含单条Hchr 11的人 中国仓鼠卵巢细胞 (AL)为靶 ,经CD59表面抗原抗体筛选突变细胞克隆 ,研究ROS诱发的Hchr 11基因突变 ;突变克隆细胞DNA用Hchr 11上 5种标志基因引物进行多重PCR分析 ,结合琼脂糖凝胶电泳绘制基因突变谱 .结果表明 ,体外ROS可诱发Hchr 11基因突变 ,且·OH诱发基因突变的能力明显强于H2 O2 ,两者的突变谱也存在明显差异 ;PMA可刺激人外周血白细胞产生大量的多种ROS ,并诱发Hchr 11基因突变 ,突变谱综合了H2 O2 和·OH的所有特征 ;一些抗氧化物对内源性产生的ROS诱发Hchr 11基因突变有明显抑制作用 .提示体外和内源性ROS可诱发Hchr 11基因突变 ,不同的活性氧分子诱发的基因突变可能具有特异性  相似文献   
7.
用部分纯化的胞浆PTPP分别与去PTPP活性的红细胞血影和内向外翻红细胞膜结合,结果发现:胞浆PTPP不仅能与红细胞膜结合,而且与dPTPP-IOVr的结合能力强于与dPTPP-Ghost的结合,很多因素,温度,pH,离子强度,结合时间及某些试剂等不仅对PTPP与膜的结合有影响,且对PTPP与dPTPP-10V结合的影响比与dPTPP-Ghost结合的影响更为显著。当胞浆PTPP与细胞膜结合后,其  相似文献   
8.
蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTPP)能特异地催化蛋白质酪氨酸残基的脱磷酸化反应.它是一个由很多结构相关的酶组成的家族.比较氨基酸的序列发现 PTPP-1B和跨膜蛋白 CD45 的胞内区有结构相似性.现已证明 CD45 确实具有内在 PTPP活性.通过研究 CD45 在淋巴 T 细胞中的功能,揭示了一个新的信号传导机制.蛋白质酪氨酸残基的脱磷酸化在这一信号传导途径中起着关键性作用.  相似文献   
9.
三种波段电磁辐射致大鼠睾丸损伤的比较   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的对比性探讨电磁脉冲(EMP)、S带高功率微波(S-HPM)和X带高功率微波(X-HPM)三种波段电磁辐射致睾丸组织受损的近期和远期效应及其相关敏感指标。方法雄性Wistar大鼠192只,随机分为EMP组、S-HPM组、X-HPM组和对照组,于照后不同时间点采集睾丸组织称重,光镜观察睾丸损伤,并用图像分析技术对曲细精管病变进行定量分析。结果三种波段电磁波辐照后睾丸结构和生精细胞形态损伤基本相似:早期睾丸重及睾丸重/体重比值呈下降趋势;曲细精管生精上皮变薄,生精细胞排列紊乱,精原细胞变性坏死并由管壁脱落,精母细胞和精子数量减少并团聚于管腔中央,支持细胞和间质细胞不同程度变性;曲细精管受损百分率显示EMP组最重,S-HPM最轻,生精细胞受损数量与程度显著增加(P0.05)。结论三种波段电磁辐射对睾丸生精细胞的损伤,具有速发性、时相性、分布不均一性特点;损伤程度呈EMPX-HPMS-HPM;睾丸曲细精管受损百分率可定量反映其损伤程度,可望成为评估电磁辐射致睾丸损伤的敏感指标之一。  相似文献   
10.
体外刺激人外周血多形核白细胞诱发化学发光研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
分别测量酵母多糖、伴刀豆球蛋白及佛波醇酯刺激人外周血多形核白细胞诱发的化学发光,结果表明:只有PMA刺激的效果最好,即能产生持续稳定高水平的CL;进一步探索PMA刺激PMN产生CL的规律发出:不仅PMA的浓度对PMN不生CL的时相、释放速度及效率有影响,测量体系中血含量也影响其PMN受激诱发产生的CL(最适的血浓度在10%左右);此外,文中还对保存不同时间的血受PMA刺激产生CL的情况进行了观察。  相似文献   
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