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1.
2.
 通过过聚乙二醇6000-磷酸钾缓冲液双相分离、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、羟基磷灰石层析及SephadexG-100凝胶过滤等提纯步骤,从海枣曲霉(Aspergillus phoenicis)麦麸培养物抽提液中提纯得到凝胶电泳均一的β-半乳糖苷酶。该酶的最适pH为3.5—4.0,最适温度为60℃(反应15分钟),在pH5.0—8.5之间及60℃以下稳定。在65℃和70℃保温时失活50%的时间分别为27和2分钟。用SDS凝胶电泳法和梯度凝胶电泳法分别测得该酶的分子量为115,000和118,000。薄层凝胶等电聚焦法测得其等电点为pH4.6。  相似文献   
3.
4.
吴襟  张树政 《生物工程学报》2008,24(10):1740-1746
从巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的全基因组DNA文库中筛选出一个b-淀粉酶基因amyG, 分析测定了其核苷酸序列并进行了诱导表达; 其中amyG编码的蛋白有545个氨基酸、分子量为60.194 kD, 与已报道的巨大芽孢杆菌DSM319的b-淀粉酶序列有着94.5%的同源性。经氨基酸序列比较分析发现, AmyG从N末端到C末端依次由信号肽域、糖基水解酶催化功能域和淀粉结合域3个功能域组成。其中催化功能域里含有第14家族糖基水解酶常见的几个高度保守的酶催化活性区。经多步纯化, 重组酶的比活共提高了7.4倍, 获得凝胶电泳均一的蛋白样品; 经SDS-PAGE电泳测定, 酶AmyG的分子量为57 kD。该酶的最适反应温度为60oC, 最适反应pH为7.0; 在温度不超过60oC时, 酶活较稳定; AmyG能迅速降解淀粉生成麦芽糖, 属于外切b-糖苷酶。  相似文献   
5.
红曲霉葡萄糖淀粉酶能水解淀粉产生葡萄糖。我们已对它进行了提纯、结晶,及电子显微镜观察,并测定了它的一些基本性质。该酶的两个主要分子型E_3和E_4的肽图谱绝大部分是相同的,只有个别肽段不同。我们用胰凝乳蛋白酶水解红曲霉葡萄糖淀粉酶的两个型,两者的产物中都有一个P_A肽段,其凝胶电泳迁移率和纸层析R_f值相同。本文报道我们用垂直板型凝胶制备电泳及凝胶层析法提纯P_A肽段,并对其性质进行的研究结果。  相似文献   
6.
嗜碱性芽孢杆菌碱性α淀粉酶的纯化和性质   总被引:1,自引:0,他引:1  
淀粉是高等植物体内碳水化合物的主要储藏形式,广泛存在于谷物、豆类的种子和果实中.α1,4葡聚糖4葡聚糖水解酶(α1,4glucan4glucanohydrolase,EC3.2.1.1),又简称为α淀粉酶(αamylase),能水解淀粉分子内部α1,4葡萄糖苷键,水解产物有糊精、麦芽寡糖、麦芽糖和葡萄糖.它和β淀粉酶、α葡萄糖苷酶、去分枝酶(普鲁兰酶)和异淀粉酶等都属于糖苷水解酶13家族,即α淀粉酶家族[1].α淀粉酶是目前世界上最早生产、产量最大的工业酶制剂品种之一,在食品、纺织、医药和饲料等工业中都有非常重要的应用;其中碱性α淀粉酶常用于洗涤剂和纺织品工业中,…  相似文献   
7.
用几种蛋白质侧链修饰试剂对β-N-乙酰氢基己糖苷酶进行化学修饰,在一定条件下,当巯基、羟基、酪氨酸残基分别被IAA及NEM、PMSF、NAI修饰后,酶活力不受影响,说明这些基团与活力无关。当羧基、组氨酸及色氨酸残基分别被EDC、DEP、NBS修饰后,酶活力大幅度下降,说明这些基团或者参与了酶催化作用,或者位于酶活性位区附近。  相似文献   
8.
筛选出了红曲霉 AS 3.976(Monascus serorubescens)和 AS 3.978(Monascus sp.)作为液体培养生产葡萄糖淀粉酶的优良菌种,并找出了适合的培养基及培养条件。在含玉米粉3%、豆饼粉1.5%(pH 4.5)的培养基申,于30--35℃培养72小时,每毫升培养液的滤液酶活力可达260单位。酶作用的最适温度为50℃,最适pH为4.5,每克干淀粉用酶量0.5毫升,糖化32%(w/w)的浓淀粉液化液,经40小时,葡萄糖值可达99以上。  相似文献   
9.
多聚唾液酸对L-天冬酰胺酶的修饰及修饰酶特性研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
来源于大肠杆菌 (E .coli)的L 天冬酰胺酶是治疗淋巴性白血病和恶性淋巴肿瘤的有效酶制剂 ,已应用于临床。该酶与其他蛋白质类药物一样 ,在临床应用中存在两个常见问题 :一是酶制剂在体内易被降解 ,导致半衰期短 ;二是免疫原性。为了解决上述问题 ,人们用亲水性的大分子如血清蛋白、右旋糖苷和单甲氧基聚乙二醇 (mPEG)对该酶进行修饰。其中mPEG[1] 修饰后的L 天冬酰胺酶的抗原抗体结合能力完全消失 ,免疫原性下降 ,且体内半衰期延长 ;但酶活力只有天然酶的 8%~ 14% ,且mPEG在人体组织中无法降解 ,目前尚难评估长期使用…  相似文献   
10.
L-天冬酰胺酶工程菌株培养条件及稳定性   总被引:3,自引:0,他引:3  
L-天冬酰胺酶工程菌株的酶活和表达水平受菌体生物量和诱导时间的影响。在生物量A60003×10左右,热诱导4h酶活力和表达水平可达到较高水平。葡萄糖对酶的生成有阻遏作用,当葡萄糖浓度大于025%时,对工程菌酶的合成造成阻遏。确定了工程菌培养的培养基、pH值、接种量等因素。重组质粒pASN在\%E.coli\% JM105,TG1和AS1357等宿主菌中具有很好的稳定性,工程菌培养50代以上重组质粒保留90%以上,在LB和M\|3培养基中也较稳定。  相似文献   
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