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南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究 总被引:13,自引:0,他引:13
用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-纤维素和Sephacryl S-200柱层析,从南方鲇(Silurus meridionalis Chen)肠粘膜中提取出碱性磷酸酶(AKP)。提纯倍数为39.50倍,比活为68.35μ/mg蛋白,提取酶液经PAGE和SDS-PAGE只呈现一条区带。该酶的分子量为132 140,N末端氨基酸为门冬氨酸,最适pH为10.10,7.5>pH>11.5时不稳定,最 相似文献
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陈定福 《中国生物化学与分子生物学报》1994,10(4):420-426
用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-纤维素和SephacrylS-200柱层析,从南方鲇(Silurus meridionalis Chen)肠粘膜中提取出碱性磷酸酶(AKP)。提纯倍数为39.50倍,比活为68.35μ/mg蛋白,提取酶液经PAGE和SDS-PAGE只呈现一条区带。该酶的分子量为132140,N末端氨基酸为门冬氨酸,最适pH为10.10,7.5>pH>11.5时不稳定,最适温度为40℃左右,对热不很稳定,以磷酸苯二钠为底物其K_m值为1.72×10~(-3)mol/L。Mg~(2+)、Mn~(2+)为该酶的激活剂,KH_2PO_4、L-CyS、ME、DFP、EDTA-Na_2为抑制剂。选用KH_2PO_4和DFP作抑制类型的判断,结果表明,KH_2PO_4属竞争性掏剂,其抑制常数为2.3mmol/L;DFP为非竞争性抑制剂,抑制常数为1.05mmol/L。 相似文献
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纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示一条蛋自带,其亚基分子量为39.8kD。用SephacrylS-200凝胶过滤测得全酶的分子量为79.4kD,该酶由两个相同亚基组成。其表观Km为12mmol/L,Vmax为99.5mg还原糖mg-1proteinh-1。 相似文献
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长吻鮠碱性磷酸酶的动力学研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用生化手段,从长吻鮠(Leiocassis longirostris Günther)肝中提取出碱性磷酸酶(AKP).提纯倍数为62.08倍,比活为66.43单位/mg蛋白,提取酶液经PAGE和SDS-PAGE只呈现一条区带.该酶的最适pH为10.05,7.0>pH>11.0时不稳定;最适温度为40℃,;对热不很稳定;以磷酸苯二钠为底物其Km值为1.82×10-3mol/L.Mg2+为该酶的激活剂,L-Cys、KH2PO4、DFP、ME、EDTA-Na2为抑制剂.选用KH2PO4,和DFP作抑制类型的判断,结果表明,KH2PO4,属竞争性抑制剂,其抑制常数为2.41mmol/L,DFP为非竞争性抑制剂,抑制常数为1.01mmol/L.
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