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抗人胎盘酸性铁蛋白单链抗体的构建、表达与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:制备人胎盘酸性铁蛋白(PAF),构建、表达并鉴定抗人PAF单链可变区抗体片段(scFv)。方法:设计以SfiⅠ、NotⅠ为酶切位点、以(Gly4Ser)3为linker的2对引物,从抗人PAF单克隆抗体可变区基因的克隆载体中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR在VH和VL基因间引入连接短肽,构建VH-linker-VL的scFv基因。经SfiⅠ、NotⅠ酶切后克隆到原核分泌型表达载体pUC19/119上,转化大肠杆菌TG1和筛选后测序验证,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量(Mr)。以人PAF为抗原,scFv为一抗,抗His单克隆抗体为二抗,间接ELISA鉴定其抗体活性。结果:重叠延伸PCR扩增产物经凝胶电泳可见约700bp的条带,DNA序列分析证明2株抗体具有完整的scFv序列,并含有c-myc和His。IPTG诱导阳性菌表达产物经SDS-PAGE鉴定有Mr约27000的显示条带,符合scFv与表达标签融合蛋白的理论值;间接ELISA证明表达产物可与PAF结合。结论:成功构建并表达了抗人PAF单链抗体,为进一步建立检测PAF的间接ELISA奠定了基础。 相似文献
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为了研究微生物防治对水厂摇蚊污染的控制效果,测定了一种苏云金杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis,Bti)制剂对摇蚊的LC50,并利用其对某水厂沉淀池孳生的摇蚊进行了现场控制试验。结果表明,Bti粉剂对摇蚊的LC50为0.318mg/L,使沉淀池中摇蚊幼虫在24h得到了有效控制,成虫在36h后得以完全控制。该制剂对摇蚊的控制时效达10周,且控制成本是采用液氯费用的1/3,采用微生物手段能使供水系统的摇蚊污染得到高效、经济的治理。 相似文献
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基于WGCNA算法的基因共表达网络构建理论及其R软件实现 总被引:2,自引:0,他引:2
WGCNA(weighted geneco-expression network analysis)算法是一种构建基因共表达网络的典型系统生物学算法,该算法基于高通量的基因信使RNA(mRNA)表达芯片数据,被广泛应用于国际生物医学领域。本文旨在介绍WGCNA的基本数理原理,并依托R软件包WGNCA以实例的方式介绍其应用。WGCNA算法首先假定基因网络服从无尺度分布,并定义基因共表达相关矩阵、基因网络形成的邻接函数,然后计算不同节点的相异系数,并据此构建分层聚类树(hierarchical clusteringtree),该聚类树的不同分支代表不同的基因模块(module),模块内基因共表达程度高,而分数不同模块的基因共表达程度低。最后,探索模块与特定表型或疾病的关联关系,最终达到鉴定疾病治疗的靶点基因、基因网络的目的。 相似文献
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苏云金芽孢杆菌以色列亚种对花翅摇蚊作用特性研究* 总被引:7,自引:0,他引:7
为探索对深圳水源红虫污染进行微生物防治的可行性,首次用Bacillus thuringiensis subsp.isroelensis,简称Bti(苏云金芽孢杆菌以色列亚种)对花翅摇蚊(Chironomus kiiensis tokunaga的作用特性进行研究。生物测定表明,Bti IPS82和187对花翅摇蚊3龄幼虫的LC50(24h)分别为24.2和32.6mg/L。对标准菌株IPS82进行的发酵研究表明,发酵过程中的菌体密度、芽孢形成和溶解氧变化、对花翅摇蚊的毒力之间具有密切联系。IPS82发酵液应用的环境因素中,日光照的影响最大,可使其毒力半衰期从21d缩短至10d;环境温度在15℃~30℃内变化,Bti使蚊幼虫的致死率都保持在50%左右。当环境温度35℃时,Bti使蚊幼虫的致死率再提高16%;环境pH偏离7~11时,IPS82的毒力从66.7%下降至40%左右,环境pH3时其毒力下降至16%;在一定的幼虫密度(低于30条/100mL)范围内IPS82发酵液的毒力稳定,但幼虫密度高于30条/100mL时毒力呈下降趋势。本研究结果表明:在一定条件下,Bti对花翅摇蚊防治具有良好的应用潜力。 相似文献
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杨焱 陈晓华 戴玉成 周丽伟 蔡为明 郭良栋 崔宝凯 李宁 雷萍 李长田 李正鹏 施维 陆本坤 秦绍新 王荣祥 李喜范 宋金俤 姚生良 张安强 蒋宁 万和炎 丁法良 张赫男 郑仲桂 张升明 周洪英 范宇光 陈万超 余鑫辉 唐世超 张彦飞 张钦学 王琨 闫景坤 刘迪 王晨光 杨保雨 陈渭春 李婷婷 莫妍 傅俊生 吴德平 宋斌 刘杰 王君 周伟 耿俊菊 赵菁 李青恩 《菌物学报》2023,(4):855-873
桑黄是最早收录于我国中药古籍中的一类大型珍稀药用真菌的总称,具有抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗氧化和降尿酸等多种功效作用。现代分类学研究结果表明,桑黄具有丰富的物种多样性,广泛分布于我国及北半球不同地区,并生长在桑树、杨树、丁香、忍冬、栎树、锦带花、水曲柳、枣树和核桃楸等多种阔叶树上。自20世纪90年代以来,我国开始了桑黄人工驯化,目前主要用于桑黄产业的种类有桑树桑黄Sanghuangporus sanghuang、瓦尼桑黄(又称杨树桑黄)Sanghuangporus vaninii、鲍姆桑黄Sanghuangporus baumii和粗毛纤孔菌Inonotus hispidus等,产业规模正在逐年扩大,形成具有广阔发展潜力的健康产业,产生了较高的经济价值和社会效益。本文从桑黄的历史记载、分类地位的演变、功效研究、产业发展进程及面临的瓶颈等问题进行了分析与总结,提出了促进桑黄产业健康发展的建议,并对产业发展愿景进行了展望。 相似文献
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目的含人生长抑素受体2亚型( human somatostatin receptor subtype 2, hSSTr2 )和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)的腺病毒重组质粒的构建及表达。方法采用PCR方法将hSSTr2以及IRES-EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle—CMV中,获得pShuttle-CMV/hSSTr2-EGFP,经PmeI酶切,去磷酸化后转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183菌,细菌内同源重组构建腺病毒质粒pAdeasy-1/hSSTr2.EGFP(pAd.SIG),将其转染HEK293细胞进行病毒包装与滴度测定。重组腺病毒感染MCF-7细胞,流式细胞术检测其表达。结果酶切、PCR及基因测序证实重组腺病毒质粒pAd-SIG构建成功,病毒滴度为8.2×10^9 IU/ml,流式细胞术结果显示hSSTr2在MCF-7细胞中表达阳性率为86.59%。结论成功构建了区组腺病毒质粒pAd-SIG,并能在真核细胞表达,为体内外研究hSSTr2效应提供了基础。 相似文献
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