pAd—SIG腺病毒质粒构建及其在MCF-7细胞中的表达

目的含人生长抑素受体2亚型（ human somatostatin receptor subtype 2, hSSTr2 ）和增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）的腺病毒重组质粒的构建及表达。方法采用PCR方法将hSSTr2以及IRES-EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle—CMV中，获得pShuttle-CMV／hSSTr2-EGFP，经PmeI酶切，去磷酸化后转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183菌，细菌内同源重组构建腺病毒质粒pAdeasy-1／hSSTr2．EGFP（pAd．SIG），将其转染HEK293细胞进行病毒包装与滴度测定。重组腺病毒感染MCF-7细胞，流式细胞术检测其表达。结果酶切、PCR及基因测序证实重组腺病毒质粒pAd-SIG构建成功，病毒滴度为8．2×10^9 IU／ml，流式细胞术结果显示hSSTr2在MCF-7细胞中表达阳性率为86．59％。结论成功构建了区组腺病毒质粒pAd-SIG，并能在真核细胞表达，为体内外研究hSSTr2效应提供了基础。