pAd—SIG腺病毒质粒构建及其在MCF-7细胞中的表达

目的含人生长抑素受体2亚型（ human somatostatin receptor subtype 2, hSSTr2 ）和增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）的腺病毒重组质粒的构建及表达。方法采用PCR方法将hSSTr2以及IRES-EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle—CMV中,获得pShuttle-CMV／hSSTr2-EGFP,经PmeI酶切,去磷酸化后转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183菌,细菌内同源重组构建腺病毒质粒pAdeasy-1／hSSTr2．EGFP（pAd．SIG）,将其转染HEK293细胞进行病毒包装与滴度测定。重组腺病毒感染MCF-7细胞,流式细胞术检测其表达。结果酶切、PCR及基因测序证实重组腺病毒质粒pAd-SIG构建成功,病毒滴度为8．2×10^9 IU／ml,流式细胞术结果显示hSSTr2在MCF-7细胞中表达阳性率为86．59％。结论成功构建了区组腺病毒质粒pAd-SIG,并能在真核细胞表达,为体内外研究hSSTr2效应提供了基础。     

TLR7刺激对系统性红斑狼疮易感型小鼠树突状细胞免疫功能的影响

目的研究TLR7通路对于系统性红斑狼疮易感Fas-/-MRLlpr/lpr小鼠树突状细胞免疫功能的影响。方法 从5周龄MRLlpr/lpr小鼠骨髓提取DC体外培养,以TLR7激活剂咪喹莫特处理48h,流式细胞仪检测细胞表面分子CD80、MHCⅡ表达。ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-10。结果咪喹莫特处理后,树突状细胞表面抗原提呈相关分子MHCⅡ和CD80分子均降低,分泌的IFN-γ、TNF-α和IL-10均明显增加。结论 TLR7通路调节系统性红斑狼疮易感小鼠MRLlpr/lpr小鼠DC抗原呈递能力,具有影响免疫应答作用。