| 抗人胎盘酸性铁蛋白单链抗体的构建、表达与鉴定 |
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| 引用本文： | 邢薇,刁智娟,肖代雯,黄宇,沈欣,雷萍,周春,朱慧芬,沈关心.抗人胎盘酸性铁蛋白单链抗体的构建、表达与鉴定[J].生物技术通讯,2006,17(5):685-687. |
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| 作者姓名： | 邢薇 刁智娟 肖代雯 黄宇 沈欣 雷萍 周春 朱慧芬 沈关心 |
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| 作者单位： | 华中科技大学,同济医学院免疫药理研究室,免疫学系,湖北,武汉,430030 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划项目(2002CB513109) |
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| 摘 要： | 目的:制备人胎盘酸性铁蛋白(PAF),构建、表达并鉴定抗人PAF单链可变区抗体片段(scFv)。方法:设计以SfiⅠ、NotⅠ为酶切位点、以(Gly4Ser)3为linker的2对引物,从抗人PAF单克隆抗体可变区基因的克隆载体中扩增VH和VL基因,用重叠延伸PCR在VH和VL基因间引入连接短肽,构建VH-linker-VL的scFv基因。经SfiⅠ、NotⅠ酶切后克隆到原核分泌型表达载体pUC19/119上,转化大肠杆菌TG1和筛选后测序验证,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量(Mr)。以人PAF为抗原,scFv为一抗,抗His单克隆抗体为二抗,间接ELISA鉴定其抗体活性。结果:重叠延伸PCR扩增产物经凝胶电泳可见约700bp的条带,DNA序列分析证明2株抗体具有完整的scFv序列,并含有c-myc和His。IPTG诱导阳性菌表达产物经SDS-PAGE鉴定有Mr约27000的显示条带,符合scFv与表达标签融合蛋白的理论值;间接ELISA证明表达产物可与PAF结合。结论:成功构建并表达了抗人PAF单链抗体,为进一步建立检测PAF的间接ELISA奠定了基础。
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| 关 键 词： | 胎盘酸性铁蛋白 单链可变区抗体片段 重叠延伸PCR 间接ELISA |
| 文章编号： | 1009-0002(2006)05-0685-03 |
| 收稿时间： | 11 28 2005 12:00AM |
| 修稿时间： | 2005年11月28 |
Construction, Expression and Characterization of scFv of Anti-Human Placental Acidic Ferritin |
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| XING Wei,DIAO Zhi-juan,XIAO Dai-wen,HUANG Yu,SHEN Xin,LEI Ping,ZHOU Chun,ZHU Hui-fen,SHEN Guan-xin.Construction, Expression and Characterization of scFv of Anti-Human Placental Acidic Ferritin[J].Letters in Biotechnology,2006,17(5):685-687. |
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| Authors: | XING Wei DIAO Zhi-juan XIAO Dai-wen HUANG Yu SHEN Xin LEI Ping ZHOU Chun ZHU Hui-fen SHEN Guan-xin |
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| Institution: | Laboratory of Immunopharmacology, Department of Immunology, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | placental acidic ferritin scFv splicing overlap extension PCR indirect ELISA |
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