鹦鹉源Ⅰ型禽副粘病毒F和HN基因序列测定与分析

禽副粘病毒(Avian paramyxovirus,APMV)属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、腮腺炎病毒属,现已确定有9个血清型(APMV-1～9).     

禽副粘病毒2型(APMV-2)血凝素单克隆抗体的制备与初步应用

禽副粘病毒2型(Avian paramyxovirus type 2,APMV-2)属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、禽腮腺炎病毒属,是养禽生产中的一种常见病原,禽类感染较为普遍[1,2].利用单克隆抗体对APMV-2进行相关研究也有一些报道,例如Ozdemir等制备了APMV-2的单克隆抗体,并利用单抗对APMV-2的抗原性差异进行了研究[3].国内张国中等也制备了APMCV-2的群特异性单克隆抗体,并利用制备的单克隆抗体建立了检测APMV-2抗原的双抗体夹心ELISA方法用于临床上对该病毒的检测[4,5].     

禽副粘病毒-2 膜融合相关多肽基因的构建与表达

囊膜病毒与宿主细胞的膜融合是病毒入侵宿主细胞的第一步 . 禽副粘病毒 -2 (APMV-2) 囊膜表面糖蛋白有 2 种,与宿主受体结合的血凝素神经氨酸酶 (HN) 及介导膜融合的融合糖蛋白 (F). HN 蛋白的茎部区域 (stalk region) 与球状头部区域 (globular head region) ,以及 F 蛋白的 3 段七肽重复区域 (heptad repeat , HR) 都可能与膜融合直接相关,将 5 段多肽进行基因的构建与表达研究 . 根据已发表的禽副粘病毒 -1 (APMV-1) 氨基酸序列,应用 BLAST 程序进行同源性分析,以确定 APMV-2 相应区域,使用搭桥 PCR 或普通 PCR 方法构建基因,分别克隆入表达载体 pGEX-6p- Ⅰ获得重组质粒,阳性重组质粒转化入大肠杆菌 BL21 (DE₃) ,表达后获得可溶性融合蛋白, 3C 蛋白酶酶切后的蛋白质混合物经 Glutathione-Sepharose 4B 亲和层析纯化,最终获得可溶性、高纯度的 5 段多肽 . 应用 LearnCoil-VMF 软件与 ExPASy 系列软件对蛋白质结构与功能进行预测与分析 . 分子筛实验结果表明, F 蛋白的 HR1 与 HR2 可形成六聚体结构,圆二色谱实验结果则表明,六聚体蛋白富含 α 琢螺旋结构 .     

新城疫病毒F和HN蛋白的氨基酸序列对其毒力的影响

新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)属副粘病毒科副粘病毒属,为不分节的负极性单股RNA病毒,有囊膜.它虽只有一个血清型,但不同毒株的致病力差异较大,有强毒株、中毒株和弱毒株之分.业已证明,NDV不存在先天性控制病毒致病性基因,不同的毒株都含有相同的基因组和结构蛋白质组分.     

生物技术在新城疫疫苗研究上的应用

新城疫病毒(NDV)是副粘病毒科、副粘病毒属的原型病毒,亦称副粘病毒1型(APMV-1),属于不分节段的负极性单股基因组RNA病毒。它所引起的传染病——人兽共患新城疫(ND)至今仍是对世界养禽业危害和威胁最严重的病毒病之一。NDV是一种高度接触传染性病原,在小鸡、火鸡、鸽、鹤、鹌鹑和数种鸟群中能引起100％发病死亡。为此,国内外学者一直对ND防治研究给予高度重视。现代生物     

新城疫现毒F和HN蛋白的氨基酸序列对其毒力的影响

新城疫病毒 (Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ ,ＮＤＶ)属副粘病毒科副粘病毒属 ,为不分节的负极性单股ＲＮＡ病毒 ,有囊膜。它虽只有一个血清型 ,但不同毒株的致病力差异较大 ,有强毒株、中毒株和弱毒株之分。业已证明 ,ＮＤＶ不存在先天性控制病毒致病性基因 ,不同的毒株都含有相同的基因组和结构蛋白质组分。1 .ＮＤＶ的结构蛋白质及其功能ＮＤＶ由囊膜和核衣壳组成。其基因组由 1 5 0 0 0个碱基组成 ,分子量为 5 .5× 1 0 6 。ＮＤＶ含有 6种特异性结构蛋白质 ,即Ｌ、ＮＰ、Ｐ、ＨＮ、Ｆ和Ｍ蛋白。Ｌ、ＮＰ和Ｐ三种蛋白质称…     

微生物介导的新城疫病毒疫苗的研制现状

新城疫病毒引起的新城疫是一种禽类急性接触性传染病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一。HN/F蛋白是2种有效的疫苗候选分子,乳酸乳球菌、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌、根癌农杆菌、鸡痘病毒、牛痘病毒、鸽痘病毒、禽红白血病病毒、禽副粘病毒3型、传染性法氏囊病病毒和传染性气管炎病毒等微生物经过改造后可成为理想的疫苗载体。本文综述了重组乳酸乳球菌(rLL-HN)、重组鼠伤寒沙门菌(rSt-F和rSt-HN)、重组单增李斯特菌(rLm-F)、重组根癌农杆菌(rAt-F)、重组鸡痘病毒(rFPV-HN、rFPV-F-gB和rFPV-F-HN-gB)、重组牛痘病毒(rVV-F)、重组鸽痘病毒(rPPV-F)、重组禽红白血病病毒(rAEV-HN)、重组禽副粘病毒3型(rAPMV-F)、重组传染性法氏囊病病毒(rIBDV-HN)和重组传染性气管炎病毒(rIBV-HN)等疫苗的构建及其免疫机制的研制现状。     

禽Ⅰ型副粘病毒各种禽源分离株毒力及其相关基因的研究

用测定新城疫病毒(NDV)毒力的经典方法,即鸡胚平均死亡时间(MDT)和脑内接种致病指数(ICPI),对源于鸡、鸽、鹅、珍珠鸡、孔雀、鹌鹑和画眉鸟等7种禽(鸟)源的共14个禽Ⅰ型副粘病毒(APMV-1)广西分离株,分别测定了毒力。同时对分离株F基因的N一端前段和HN基因的e末端片段进行扩增、测序和分析,并绘制系谱树。结果发现,分离株的MDT在36h～75h之间,除1株鸽源毒株gxp22的ICPI值为0外,其余分离株在1．09～1．95之间;除孔雀源的分离株gxpc52在F基因裂解位点附近的氨基酸序列为^112R-RQ-R-R-F^117之外,其它13株均为^112R-R-Q-K-R-F^117,都符合强毒株的特征。所有分离株与国内参考强毒株F48E8和国外参考强毒株HER／33在HN基因e末端终止密码子的位置相同,也符合强毒株的特征。根据F基因核苷酸序列绘制的系谱树发现,近几年来在广西流行的APMV-1毒株的基因型为Ⅶd亚型;根据HN基因核苷酸序列绘制的系谱树表明,广西各种禽源APMV-1分离株可分为2个群。研究的结果表明,根据F基因裂解位点附近的氨基酸序列和HN蛋白翻译的终止密码子的位置判定APMV-1毒力的结果,都与毒株在临床上的致病情况相符。因此,根据F基因和HN基因序列和结构的特征,均可以判定APMV-1临床分离株的体内致病性。     

禽白血病病毒J亚群(ALV-J)的血清学调查及PCR诊断

禽骨髓细胞性白血病(myeloid leucosis)(或称禽骨髓细胞瘤,myelcytomatomatosis)(ML)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus)J亚群(ALV-J)引起的禽的一种肿瘤性传染病[1],ALV-J是英国的Payne于1991年从肉鸡中分离出来的一个新的囊膜亚群[2,3].对ALV-J的原型株,HPRS-103的致病性和传播的研究中发现,本病毒能诱导肉鸡产生骨髓细胞瘤病(ML)、肾瘤和其它多种肿瘤,死亡率为1%～2%,偶尔可高达20%.由于本病毒为ALV和禽内源性反转录病毒囊膜(E51)的重组体[4,5],因此其可通过水平传播和垂直传播迅速地感染整个鸡群,使鸡群在短时间内遭受灭顶之灾.近十年来,在许多国家,包括美国在内的肉鸡中,ML已经是引起死亡和其它生产性问题的严重原因.     

AcMNPV的囊膜形成与囊膜蛋白gp64在细胞内的定位

应用电镜观察了重组AcMNPV感染的Sf9细胞,结果表明该病毒的囊膜形成至少有两种形式：一是通过细胞质膜上出芽,二是在核内被膜结构包围而获得囊膜,此外通过核膜出芽也可能是病毒获得囊膜的一种方式。应用免疫荧光技术研究了该病毒在Sf9细胞内囊膜的形成及其与病毒囊膜蛋白gp64间的关系,结果表明gp64主要存在于细胞的质膜与核膜上。该存在方式使得通过出芽而获得囊膜的病毒粒子与核内包被产生的病毒粒子在囊膜成分上有很大差异。     

禽Ⅰ型副粘病毒f基因克隆及序列分析

用RT—PCR一步法对云南省不同禽类(鸡、鸽子)3株禽Ⅰ型副粘病毒F基因进行扩增和克隆,并对其f基因片段核苷酸序列进行分析,结果表明,云南省禽Ⅰ型副粘病毒各毒株同源性为88．1％--94．9％,与疫苗株LaSota和强毒株F48E9的同源性为85．6％。所分离两株新城疫病毒在F蛋白裂解位点区(112—117aa)的氨基酸序列与强毒株在这一区域的序列完全相同,表明为强毒株。鸽Ⅰ型副粘病毒F蛋白裂解位点区的氨基酸序列与PPMVZQ98—1株在这一区域的序列完全相同,揭示为中强毒株。以1662bp核苷酸绘制系统发育树,表明云南地方新城疫病毒届于基因Ⅶ型,鸽Ⅰ型副粘病毒届于基因Ⅵ型。     

禽I型副粘病毒f基因克隆及序列分析

用RT-PCR一步法对云南省不同禽类(鸡、鸽子)3株禽I型副粘病毒F基因进行扩增和克隆,并对其f基因片段核苷酸序列进行分析,结果表明,云南省禽I型副粘病毒各毒株同源性为88.1%～94.9%,与疫苗株LaSota和强毒株F48E9的同源性为85.6%。所分离两株新城疫病毒在F蛋白裂解位点区(112～117aa)的氨基酸序列与强毒株在这一区域的序列完全相同,表明为强毒株。鸽I型副粘病毒F蛋白裂解位点区的氨基酸序列与PPMV ZQ98-1株在这一区域的序列完全相同,揭示为中强毒株。以1 662bp核苷酸绘制系统发育树,表明云南地方新城疫病毒属于基因Ⅶ型,鸽I型副粘病毒属于基因Ⅵ型。     

禽Ⅰ型副粘病毒f基因克隆及序列分析

用RT-PCR一步法对云南省不同禽类(鸡、鸽子)3株禽I型副粘病毒F基因进行扩增和克隆,并对其f基因片段核苷酸序列进行分析,结果表明,云南省禽I型副粘病毒各毒株同源性为88.1%～94.9%,与疫苗株LaSota和强毒株F48E9的同源性为85.6%.所分离两株新城疫病毒在F蛋白裂解位点区(112～117aa)的氨基酸序列与强毒株在这一区域的序列完全相同,表明为强毒株.鸽I型副粘病毒F蛋白裂解位点区的氨基酸序列与PPMV ZQ98-1株在这一区域的序列完全相同,揭示为中强毒株.以1 662bp核苷酸绘制系统发育树,表明云南地方新城疫病毒属于基因Ⅶ型,鸽I型副粘病毒属于基因Ⅵ型.     

新城疫病毒抗肿瘤研究进展

新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)为副黏病毒科,禽腮腺炎病毒属(Avulavirus)的禽副黏病毒Ⅰ型(APMV-Ⅰ),可对250多种禽类造成致死性感染,给世界范围内的家禽养殖造成了巨大损失。目前,研究发现NDV对人肿瘤细胞具有溶瘤作用,能够选择性地在癌细胞中复制。并且一些研究已经进行了人体临床试验,取得了良好的效果。因此,新城疫病毒是肿瘤治疗的潜在治疗剂。文中就NDV结构蛋白与毒力的关系、NDV直接溶瘤作用、NDV为载体的肿瘤基因治疗、NDV抗肿瘤与自噬等进行了综述。     

禽致病性大肠杆菌江苏、安徽分离株的生物学特性分析

[目的]研究禽致病性大肠杆菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)江苏、安徽分离株的优势血清型,并分析其生物学特性.[方法]对分离自病禽的细菌进行鉴定,采用玻片凝集法测定禽致病性大肠杆菌的血清型,PCR方法检测14种毒力基因的分布,采用美国临床和实验室标准化研究所的方法进行药物敏感性检测,改良结晶紫半定量法检测分离细菌的生物被膜形成能力. [结果]共分离到禽致病性大肠杆菌56株,血清型检测结果表明,O78血清型占64.29％,为主要血清型.毒力基因检测显示,fimC、pfs、ompA和luxS的阳性率超过90％.药物敏感性检测显示,58.93％的菌株对8种以上的药物耐受.生物被膜检测显示,有16株细菌生物被膜形成能力为中等以上,其中68.75％的菌株耐8种以上的药物.[结论]O78为主要流行的血清型.fimC、pfs、ompA和luxS基因为APEC保守基因.多重耐药性仍很普遍,细菌生物被膜与耐药性具有相关性.     

腮腺炎病毒F蛋白七肽重复序列的表达、纯化及特性分析

副粘病毒F蛋白的两段七肽重复序列（HR1和HR2）在病毒侵染细胞的过程中相互作用形成热稳定的富含α螺旋的异源二聚体,此结构的形成引起病毒囊膜与细胞膜的并置而最终导致膜融合的发生。腮腺炎病毒（Mumps virus, MuV）属于副粘病毒科,腮腺炎病毒属,可能利用与其他副粘病毒相似的侵染机制。本研究对MuV 融合蛋白的HR区进行了计算机程序预测,并利用大肠杆菌GST融合表达系统对MuV F蛋白HR1和HR2两段多肽进行了表达和纯化,通过GST pull_down 实验证实HR1和HR2多肽在体外能够相互作用,凝胶过滤层析证明HR1、HR2多肽能够形成多聚体,说明MuV F蛋白的HR区的相互作用可能是其发挥融合功能的关键因素。     

昆虫细胞表达的网状内皮组织增殖症病毒囊膜糖蛋白及其免疫性

利用Bac-to-BacBaculovirusExpressionSystems构建了能表达禽网状内皮组织增殖症病毒(REV)囊膜糖蛋白基因(env)的重组杆状病毒。用REV特异性单克隆抗体分别做间接免疫荧光抗体试验(IFA)和免疫转印试验,均可从感染的Sf9昆虫细胞中检出REVenv。重组杆状病毒感染的Sf9细胞裂解后制备成油乳疫苗免疫SPF鸡后,可以诱发维持45d以上的特异性抗REV抗体,并可抵抗REV病毒感染。     

副粘病毒包膜糖蛋白分子生物学研究进展

副粘病毒是一类重要的人和动物致病病毒。其中包括副流感病毒(Parainfluenza virus,PIV)、流行性腮腺炎病毒(Mumpsvirus,MuV)和新城疫病毒(Newcatle disease virus．NDV)。这些病毒在中性pH条件下,可以通过膜融合而感染宿主细胞。整个病毒由包膜、衣壳和核酸组成。其基因组为15kb左右的单股负链RNA,主要包括6组基因,用于编码6种病毒结构蛋白。     

鸡减蛋综合征病毒DNA的基因文库构建和酶切位点分析

腺病毒载体已经成为基因工程疫苗及癌症、遗传病基因治疗的重要工具。腺病毒可分为哺乳动物腺病毒和禽腺病毒,禽腺病毒包括20多个血清型,分别归属于三个群:Ⅰ群为传统的禽腺病毒(FAV),Ⅱ群包括火鸡出血性肠炎病毒(HEV)等,Ⅲ群禽腺病毒为减蛋综合征病毒(EDSV)。这些病毒广泛地存在于多种禽类的呼吸道、消化道,大多呈显性或不显性感染。以禽类腺病毒为载体表达禽类重要病原的保护性抗原基因,构建多价(联)活载体基因工程疫苗,有其重要特点:腺病毒的某些毒株可以在禽体     

研发动态

<正>中科院就冠状病毒跨种传播过程发表重要综述中国科学院微生物所研究所高福院士课题组近日在Trends in Microbiology上发表关于冠状病毒跨种传播的综述,被选为精选综述(feature review)。冠状病毒是一类具囊膜的RNA病毒,可感染动物和人;依据其血清型和基因型特征,又可进一步分为Alpha-、Beta-、Gamma-和Delta-冠状病毒属。