猪瘟病毒糖蛋白E^rns中和表位的鉴定和比较

猪瘟病毒 (CSFV)囊膜结构糖蛋白Erns(gp4 8)是诱导机体产生中和抗体及激发保护性免疫应答的第二抗原蛋白。E2和Erns与细胞表面受体的相互作用介导CSFV感染细胞的过程。Erns具有RNA酶活性 ,影响病毒自身复制并涉及对病毒的中和效应。采用抗CSFValfortT櫣ｂｉｎｇｅｎ毒株Ｅｒｎｓ糖蛋白的 1B5 ,b4_2 2和 2 4 16单克隆中和抗体 ,筛选噬菌体展示的 12肽随机肽库 ,进行Erns中和表位的鉴定和比较 ,获得分别针对 1B5、b4_2 2和 2 4 16单克隆抗体的 3个主要中和表 (拟 )位基序WxNxxP、DKNR (Q)G和A(T)CxYxKN ,分别定位于Erns的 35 1位～ 35 6位或 348位～ 35 0位、384位～ 386及 32 2位～ 32 3位、380位～ 386位氨基酸区域。分析表 (拟 )位基序与单克隆抗体的免疫反应性差异。b4_2 2和 2 4 16单克隆抗体识别基序存在共有序列KN ,识别Erns中的相似抗原区 ,但其侧翼序列及免疫印迹、免疫荧光抗体抑制试验结果均存在显著差异     

鹦鹉源I型禽副粘病毒F和HN基因序列测定与分析

Virion RNA was abstracted from purified type I Avian paramyxovirus strain YN-PA01(isolated from parrot)and used as a template. The fragment containing the fusion gene(F) and hemagglutinin-neuraminidase gene(HN) of the isolate was amplified by RT-PCR and cloned to the pMD18-T Vector. Using primer walking method the complete sequence of F-HN genes was obtained finally.And the respective amino acid sequence was deduced. Through relative software the phylogenetic trees on F gene and HN gene were constructed between strain YN-PA01 and reference strains. The results showed that strain YN-PA01 comparing with reference strains displays 98.7%-83.2% nucleotide homology and 98.1%-86.2% amino acid homology on F gene; 97.4%-79.1% nucleotide homology and 97.2%-83.2% amino acid homology on HN gene. Additional 6 amino acids are encoded by the HN gene ORF of strain YN-PA01 comparing with national reference strains.The studied strain YN-PA01 exhibits highest identities with strain JS/5[O1/Go either analyzed on F gene or HN gene.     

鹦鹉源Ⅰ型禽副粘病毒F和HN基因序列测定与分析

禽副粘病毒(Avian paramyxovirus,APMV)属于副粘病毒科、副粘病毒亚科、腮腺炎病毒属,现已确定有9个血清型(APMV-1～9)。APMV-1血清型是禽类最重要的致病型,几乎所有禽种均对其敏感。该病毒是一种有囊膜的单股负链RNA病毒,由囊膜、核衣壳和核酸组成;基因组全长约15kb,     

赤羽病病毒核蛋白基因克隆和序列分析

参考GeneBank发表的赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)的核蛋白基因(SmRNA)序列,设计合成一对引物,从分离自牛体的AKAV BHK21细胞培养物中提取总RNA,对AKAV核蛋白基因进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,呈现一条约696bp的条带,回收纯化后,将其克隆至pMD18-T质粒载体中,然后进行核苷酸序列分析.与GenBank中报道的多株AKAV编码核衣壳蛋白(N)的SmRNA基因比较后发现,与其它株的核苷酸的同源性为94.2%～98.3%,推导的氨基酸的同源性为97.6%～100%,证实为AKV的N基因.为生产AKAV特异性核蛋白抗原、免疫血清学诊断试剂的制备和分子生物学研究打下了坚实基础.     

蓝舌病毒野毒株及疫苗株S10基因多态性分析研究

对中国蓝舌病毒1株疫苗株、31株野毒株及1株南非毒株进行测序。结果揭示33株毒株S10基因核苷酸长度均为822bp,S10基因为基因内基因,其核苷酸链的第20～22和59～61位有两个起始密码子,共有终止子在707～709位,预测编码NS3和NS3A两种蛋白;32株中国毒株间核苷酸差异0～107个,同源性86%～100%; NS3蛋白氨基酸差异0～10个,同源性956%～100%。测序毒株与GenBank中9株其它毒株比较,建立的S10基因系统发生树,将蓝舌病毒分为China group和US group两大基因群,两大群的同源性为85%;US group包括美国8株及南非1株毒株;China group包括中国32株及澳大利亚1株毒株;说明蓝舌病毒S10基因分群与毒株的地理区域来源有关。在国内首次进行了全国较大范围内蓝舌病毒分子流行病学调查,揭示了我国蓝舌病毒毒株的遗传多样性。     

猪瘟病毒糖蛋白Erns中和表位的鉴定和比较

猪瘟病毒（CSFV）囊膜结构糖蛋白Erns（gp48）是诱导机体产生中和抗体及激发保护性免疫应答的第二抗原蛋白。E2和Erns与细胞表面受体的相互作用介导CSFV感染细胞的过程。Erns具有RNA酶活性,影响病毒自身复制并涉及对病毒的中和效应。采用抗CSFV alfort Tübingen 毒 株Erns糖蛋白的1B5, b4_22 和24/16单克隆中和抗体,筛选噬菌体展示的12肽随机肽库,进行Erns中和表位的鉴定和比较,获得分别针对1B5、b4_22 和24/16单克隆抗体的3个主要中和表（拟）位基序WxNxxP、DKNR (Q) G和 A（T）CxYxKN,分别定位于Erns的351位～356位或348位～350位、384位～386及322位～323位、380位～386位氨基酸区域。分析表（拟）位基序与单克隆抗体的免疫反应性差异。B4_22 和 24/16单克隆抗体识别基序存在共有序列KN, 识别Erns中的相似抗原区,但其侧翼序列及免疫印迹、免疫荧光抗体抑制试验结果均存在显著差异。     

猪瘟病毒E2蛋白表位分析及其单克隆抗体可变区cDNA测序

猪瘟病毒(CSFV)囊膜表面结构糖蛋白E2(gp55)是诱导机体产生中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白。E2和E^ms与细胞表面受体的相互作用介导病毒对细胞的感染过程。本文采用抗CSFV(Alfort Tiibingen毒株)E2结构蛋白的单克隆抗体c2410和a18,淘选噬菌体展示的12肽随机肽库,对CSFV E2蛋白表位进行分析。研究发现：单克隆抗体c2410和a18识别同一线性表位,定位于E2蛋白的832-837位氨基酸(SPTTLR),但二者在ELISA和免疫印迹分析中对不同表(拟)位的反应性存在差异。自杂交瘤细胞中提取总RNA,对单克隆抗体轻链和重链可变区cDNA进行序列分析。结果表明：c2410和a18虽然来源于同一批次融合的杂交瘤细胞系,识别同一表位,但仍属于不同的单克隆抗体。     

猪瘟病毒E2蛋白表位分析及其单克隆抗体可变区cDNA测序

猪瘟病毒(CSFV)囊膜表面结构糖蛋白E2(gp55)是诱导机体产生中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白.E2和Erns与细胞表面受体的相互作用介导病毒对细胞的感染过程.本文采用抗CSFV(AlfortTubingen毒株)E2结构蛋白的单克隆抗体c2410和a18,淘选噬菌体展示的12肽随机肽库,对CSFV E2蛋白表位进行分析.研究发现单克隆抗体c2410和a18识别同一线性表位,定位于E2蛋白的832-837位氨基酸(SPTTLR),但二者在ELISA和免疫印迹分析中对不同表(拟)位的反应性存在差异.自杂交瘤细胞中提取总RNA,对单克隆抗体轻链和重链可变区cDNA进行序列分析.结果表明c2410和a18虽然来源于同一批次融合的杂交瘤细胞系,识别同一表位,但仍属于不同的单克隆抗体.     

马动脉炎病毒核蛋白基因的克隆与表达

马病毒性动脉炎是危害世界养马业的重要传染病之一,是由动脉炎病毒科动脉炎病毒属的马动脉炎病毒(Equinearteritisvirus,EAV)引起的一种以病马发热,步态僵直,躯干及眼周围水肿,并出现粘液脓性鼻炎、结膜炎,外生殖道水肿为特征的传染病,对妊马能引起流产,使易感怀孕母马的流产率     

马动脉炎病毒核蛋白基因的克隆与表达

马病毒性动脉炎是危害世界养马业的重要传染病之一,是由动脉炎病毒科动脉炎病毒属的马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)引起的一种以病马发热,步态僵直,躯干及眼周围水肿,并出现粘液脓性鼻炎、结膜炎,外生殖道水肿为特征的传染病,对妊马能引起流产,使易感怀孕母马的流产率达90%以上[1, 8].