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摘要:【目的】利用生物信息学方法了解目前拥有全基因组序列的极端嗜盐古菌中CRISPR结构的特征。【方法】通过比对,保守性分析,GC含量分析,RNA结构预测等方法对已有全基因组序列的嗜盐古菌基因组进行研究。【结果】在5株嗜盐古菌基因组中发现CRISPR结构,在leader序列内得到具有回文性质的保守motif。发现在大CRISPR结构内repeat序列具有很强的保守性。同时根据第四位碱基的不同,repeat序列可形成两类不同的RNA二级结构。【结论】leader序列中回文结构的发现对其可能为蛋白结合位点的假 相似文献
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苯丙氨酸脱氨酶cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达及酶法合成L-苯丙氨酸 总被引:3,自引:0,他引:3
利用基因重组技术 ,在大肠杆菌中克隆并表达苯丙氨酸脱氨酶 (PAL) (EC4 .3 .1 .5) ,并应用此酶转化肉桂酸生成L 苯丙氨酸。方法是将欧芹苯丙氨酸脱氨酶cDNA亚克隆到组成型表达载体pMG3 6e启动子P3 2下游 ,以菌落PCR法鉴定插入片段的大小和方向都正确的克隆 ,进而以HPLC检测肉桂酸浓度的方法鉴别重组质粒有催化肉桂酸生成L 苯丙氨酸的酶活力。结果获得能表达PAL酶活性的阳性克隆 ,在pH1 0 ,含 1 .0 %肉桂酸、8.0mol/L氨的转化液中 ,3 0℃反应 2 0h ,肉桂酸重量转化率可达 60 %。该基因工程菌有希望用于工业化生产L 苯丙氨酸。 相似文献
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用PCR法直接快速筛查重组阳性克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
应用PCR法快速筛查插入有苯丙氨酸脱氨酶cDNA重组阳性克隆。方法:用于PCR扩增的引物是位于载体pET23b启动子处的T7启动子引物和位于目的基因PALcDNA3’端终止密码TAA处的引物。以灭菌吸头挑一单菌落加入PCR体系扩增。结果:在筛查的3个克隆中,有2个阳性克降,并且插入方向正确,经DNA序列测定得到进一步证实。结论:以PCR方法筛查重组阳性克隆,可以简便快速鉴定插入片段的大小和方面,不 相似文献
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将欧芹(Petroselinumcrispum)苯丙氨酸脱氨酶(PAL)cDNA亚克隆到组成型表达载体pMG36e启动子P32下游,电穿孔法转化乳酸乳球菌,获得有PAL表达活性的乳酸乳球菌工程菌(pMG36ePAL/L.lactisMG1363)。通过递归PCR合成了一段120bp的调控片段,用以将pMG36e改造为分泌型表达载体pXHS,以翻译偶联的方式表达PAL,可使PAL的N末端带上usp45信号肽,结果亦检测到PAL酶活性。自行分离克隆了乳酸乳球菌热休克蛋白基因dnaJ的启动子区域,构建了热诱导表达载体pXHJ,获得PAL热诱导表达工程菌(pXHJPAL/L.lactisIL1403),经30℃至37℃热诱导,可使PAL表达活性提高至2倍。本文还就乳酸乳球菌PAL工程菌在经典型苯丙酮尿症防治中的应用进行了分析和讨论 相似文献
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未来气候变化对华中地区中稻产量影响的模拟 总被引:2,自引:0,他引:2
按照政府间气候变化专业委员会( IPCC)排放情景特别报告(SRES)中的A2和B2情景,将基于区域气候模式PRECIS构建的气候变化情景与水稻生长模型ORYZA2000相结合,在多年试验数据和模型适宜性验证的基础上,模拟基准时段(1961-1990年)和2011-2050年时段A2、B2情景下的中稻发育期和产量,分析未来气候变化对华中地区中稻的影向.结果表明:1)相对于基准年,未来40年华中地区中稻生育期缩短,A2情景下中稻生育期平均缩短3.5d,B2情景下生育期平均缩短1.3d.其中,生育期缩短4d以上的区域集中在鄂西.2)不考虑CO2肥效作用时,未来40年华中地区中稻产量下降:A2情景下,雨养中稻产量平均减少17.8%,灌溉中稻产量平均减少14.2%;B2情景下,雨养中稻产量平均减少16.4%,灌溉中稻产量平均减少12.7%.A2情景比B2情景减产幅度大,说明升温幅度越大,对中稻负面影响越大.同一情景下,灌溉中稻比雨养中稻减产幅度小,说明灌溉一定程度上能抵消升温的不利影响.3)考虑CO2肥效作用后,未来40年华中地区中稻产量变化趋势不一致:A2情景下,雨养中稻产量平均减少4.3%,灌溉中稻产量平均增加4.3%;B2情景下,雨养中稻和灌溉中稻产量分别增加3.6%、11.8%.4)与不考虑CO2肥效相比,考虑CO2肥效时,A2情景下雨养中稻减产幅度缩小,A2情景灌溉中稻、B2情景雨养中稻、B2情景灌溉中稻均为增产,但增产幅度小于相同情景下的减产幅度,说明CO2肥效一定程度上可提高中稻产量,但不足以抵消升温的负面影响.5)无论是否考虑CO2肥效,雨养还是灌溉,未来气候变化将增加中稻产量的不稳定性,华中地区中稻生产风险加大;灌溉中稻稳定性大于雨养中稻,CO2肥效下稳定性大于无CO2肥效,因此灌溉、CO2肥效是提高区域中稻产量稳定性的有效措施. 相似文献
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鹅细小病毒和番鸭细小病毒核酸疫苗重组质粒的构建及表达 总被引:3,自引:0,他引:3
将鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MPV)主要结构蛋白(VP2-VP3)基因克隆到核酸疫苗质粒pIRESlneo载体上,构建了核酸疫苗重组质粒pIGVP1和pIMVP,通过脂质体转染法分别将重组质粒到鹅胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞中,核酸疫苗重组质粒pIGVP1和pIMVP分别转染鹅胚成纤维细胞和番鸭成纤维细胞中,于转染后72h收取细胞,细胞裂解液裂解后,经Western blot检测其表达产物可出现特异性反应带,证明表达产物具有很好的反应原性。 相似文献
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CRISPR-Cas系统是在原核微生物中广泛存在的抵抗病毒(或质粒)入侵的防御系统。基于CRISPR-Cas9系统发展的基因组编辑工具可以方便快捷地实现对生物体内基因组的精确编辑,如突变基因的修复、有益基因的强化和有害基因的删除等,已在生命科学基础研究、经济物种遗传改良和人类医药健康等领域获得广泛应用,其主要发明人Emmanuelle Charpentier和Jennifer A. Doudna教授于2020年荣获诺贝尔化学奖。CRISPR-Cas9基因组编辑技术在深刻改变生命科学与医学领域研究范式的同时,也提示丰富多彩的微生物资源依然是颠覆性生物技术创新的源泉,微生物前沿基础研究具有极其重要的战略意义。 相似文献
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鹅细小病毒长春分离株主要结构蛋白(VP2-VP3)基因的原核表达 总被引:1,自引:0,他引:1
根据国外巳发表的鹅细小病毒(GPV)A株基因组核苷酸序列,设计并合成了一对用于GPV主要结构蛋白(VP2-VP3)基因表达的引物。利用合成的引物,扩增并鉴定了GPV中国长春株(GPV CC株)的VP2-VP3基因。将扩增的目的的基因插入到原核表达载体pET28(a)的多克隆位点,构建了表达GPV,VP2-VP3基因的原核载体pEGVP1。重组表达载体质粒转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测到大小分别为75000和58000的表达蛋白带。Western blot分析表明,表达产物具有很好的特异性。 相似文献
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HBV(HePatitis B virus)是一种具有严重传染性的肝炎病毒,迄今为止,人们对它的免疫和慢性化的机制等方面还不甚了解。本文基于相关的病理知识,对应的建立了具有时滞的微分方程数学模型,系统地探讨了肝炎B病毒与宿主细胞之间的关系,利用Lyapunov函数方法研究了病毒动力学模型感染平衡点的局部稳定性和未感染平衡点全局稳定性,并利用数学模拟验证了理论分析。结果表明时滞的存在不会影响到感染平衡点的局部稳定性,但能影响平衡点到达的时间跨度,对于药物治疗的疗程和治疗时机的确定有参考意义。 相似文献
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腺病毒载体已经成为基因工程疫苗及癌症、遗传病基因治疗的重要工具。腺病毒可分为哺乳动物腺病毒和禽腺病毒,禽腺病毒包括20多个血清型,分别归属于三个群:Ⅰ群为传统的禽腺病毒(FAV),Ⅱ群包括火鸡出血性肠炎病毒(HEV)等,Ⅲ群禽腺病毒为减蛋综合征病毒(EDSV)。这些病毒广泛地存在于多种禽类的呼吸道、消化道,大多呈显性或不显性感染。以禽类腺病毒为载体表达禽类重要病原的保护性抗原基因,构建多价(联)活载体基因工程疫苗,有其重要特点:腺病毒的某些毒株可以在禽体 相似文献