蛋白酶对解淀粉芽孢杆菌α－淀粉酶活力的影响

目前工业生产α－淀粉酶的主要菌种是解淀粉芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）,该菌在培养条件下不但产生α－淀粉酶,同时也产生一定比例的蛋白酶。本文研究了不同来源的蛋白酶对解淀粉芽孢杆菌ＢＦ７６５８和８６３１５α－淀粉酶活性的影响,结果发现中性蛋白酶对两种α－淀粉酶活性无显著影响,而２７０９碱性蛋白酶能使α－淀粉酶活性丧失６０％以上。     

信号肽C—端和成熟蛋白N—端氨基酸序列的变化时α—淀粉酶分泌作用的影响

本文利用ｐＡｍｙ４１３质粒通过定点诱变技术,在α－淀粉酶基因的２８７和２９１位分别引入１个Ｇ和Ｃ,代替原来的Ｔ和Ｇ,构建成质粒ｐＡｍｙ４１３Ｂ,使成熟的α－淀粉酶Ｎ－端（７）Ｌｅｕ（８）Ｍｅｔ变为（７）Ａｒｇ（８）Ｉｌｅ。ｐＡｍｙ４１３Ｌα－淀粉酶信号序列因引入１个多酶切点接头而比ｐＡｍｙ４１３的２９个氨基酸增加了１３个氨基酸,创造了１个新的信号肽酶Ｉ识别窗口Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ａｌａ↓Ｓｅｒ,利用计算机对该信号肽进行了二级结构分析。这两株突变株产酶能力分别为野生株（ｐＡｍｙ４１３）的３％和３６％;胞外α－淀粉酶的分子量同于野生株;末端分析显示,成熟酶第一个氨基酸为Ａｌａ,表明信号肽酶Ｉ在野生型识别窗口Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ↓Ａｌａ处切割。结果还表明,Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓα－淀粉酶在Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ中分泌作用属共翻译转移模型     

豆科植物籽实中的昆虫消化道α－淀粉酶抑制剂的研究（Ⅰ）

对６种豆科植物籽实进行了蜚蠊消化道α－淀粉酶抑制剂活性的测试。但只从褐色菜豆（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓｖｕｌｇａｒｉｕｓｌ）中检测出特异性抑制剂。该抑制剂在酸性条件下能有效地抑制蜚蠊α－淀粉酶的活性,最适抑制ｐＨ５．４５,３７℃时预温３０分钟后能显示最大抑制活性,不预温时的抑制活性仅为最大抑制活性的２５％;０℃时几乎不显示抑制活性,但在一定范围内,抑制活性随温度的升高而呈近似的线性增加;抑制剂浓度较低时,α－淀粉酶的抑制程度与抑制剂浓度的变化成正比。但超过约５０％后,抑制程度只随抑制剂浓度的增加而缓慢上升并趋近于最大值。     

α－淀粉酶基因表达中启动子上游区EcoRI－BclI片段的生理功能

本文从ｐＡｍｙ４１和ｐＮＬ２０１出发,构建了一系列α－淀粉酶基因上游区ＥｃｏＲＩ－ＢｃｌＩ片段缺失或部分缺失的质粒,并构建了含有ｐＡｍｙ４１系列单质粒ｐＡｍｙ４１系列、ｐＮＬ２０１系列双质粒工程菌。通过对这些工程菌α－淀粉酶基因表达水平的分析显示,Ｂ．Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓα－淀粉酶基因上游区ＥｃｏＲＩ－ＢｃｌＩ片段在α－淀粉酶基因表达中行使负的调控功能。     

α—淀粉酶基因表达中启动子上游区EcoRI—BclI片段的生理功能

本文从ｐＡｍｙ４１和ｐＮＬ２０１出发,构建一系列α－淀粉酶基因上游区ＥｃｏＲｉ－ＢｃｌＩＩ片段的人或部分缺失的质粒,并构建了ｐＡｍｙ４１系列质粒ｐＡｍｙ４１系列、ｐＮＬ２０１系列双质粒工程菌,通过对这些工和力α－淀粉酶基因表达水平的分析显示,Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ α－淀粉酶基因上游区ＥｃｏＲＩ－Ｂｃｌｌ片段在α－淀粉酶基因表达中行使负的调控功能。     

α—淀粉酶成熟蛋白N—端氨基酸序列变化对蛋白分泌的影响

从地衣芽孢杆菌（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）构建的重组质粒ｐＡｍｙ４１３,经过定点诱变,在α－淀粉酶基因的２７１位引入Ｇ取代原来的Ａ,构建成突变型质粒ｐＡｍｙ４１３Ｃ。成熟的α－淀粉酶氨基酸由＋２Ａｓｎ变为＋３Ａｓｐ,其产量是野生型的２．０２－２．５７倍;Ｎ－端氮基酸序列分析发现：信号肽酶Ｉ的切割位点前移了一个氨基酸,即ＡｌａＡｌａ－＋３Ａｓｐ;二级结构分析发现：在自由能为－５１．７ｋｃａｌ时,突变型与野生型的ｍＲＮＡ都形成１４个环状结构,区别在于２７１位的Ｇ不再与２１１位的Ｕ配对,形成Ｇ突出;蛋白质二级结构分析发现：３３－３７氨基酸的转角结构减少了１个氨基酸,这个氦基酸参与形成α－螺旋;这些空间结构和荷电氮基酸的变化有利于蛋白质的分泌。     

产α-淀粉酶菌株的分离、鉴定及酶学性质研究

目的:筛选高产α-淀粉酶菌株,为工业生产α-淀粉酶提供储备菌株。方法:利用碘液显色法和摇瓶发酵法,从土壤中筛选产α-淀粉酶菌株;通过菌落形态、菌体特征观察和16S rDNA序列比对对菌种进行鉴定;发酵粗酶液经硫酸铵沉淀、透析脱盐后,对其酶学性质进行初步研究。结果:从土壤中筛选到一株高产α-淀粉酶菌株,枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XL-15。该菌株所产α-淀粉酶的最适反应温度为50℃,最适作用pH为6.5;Ca2 和Mn2 对酶有激活作用,而Cu2 、Zn2 和EDTA对酶有抑制作用;酶的动力学研究测出米氏常数Km值为1.726mg/mL。结论:该菌株是产α-淀粉酶的较好材料,且具有一定的应用前景。     

嗜碱性芽孢杆菌碱性α淀粉酶的纯化和性质

淀粉是高等植物体内碳水化合物的主要储藏形式,广泛存在于谷物、豆类的种子和果实中.α1,4葡聚糖4葡聚糖水解酶(α1,4glucan4glucanohydrolase,EC3.2.1.1),又简称为α淀粉酶(αamylase),能水解淀粉分子内部α1,4葡萄糖苷键,水解产物有糊精、麦芽寡糖、麦芽糖和葡萄糖.它和β淀粉酶、α葡萄糖苷酶、去分枝酶(普鲁兰酶)和异淀粉酶等都属于糖苷水解酶13家族,即α淀粉酶家族[1].α淀粉酶是目前世界上最早生产、产量最大的工业酶制剂品种之一,在食品、纺织、医药和饲料等工业中都有非常重要的应用;其中碱性α淀粉酶常用于洗涤剂和纺织品工业中,…     

嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

以质粒pATl53为载体,应用鸟枪法在大肠杆菌中建立了嗜热脂肪芽孢杆菌α－淀粉酶基因无性繁殖系。两个含α一淀粉酶基因的克隆的Hind Ⅲ片段均为4．5kb,内切酶谱也相同。本文还比较了从HBl01,p^a－1823和从基因供体菌中提取的α－淀粉酶的耐热性。     

BF7658α-淀粉酶稳定性的研究

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BF 7658即能产生丰富的α-淀粉酶,又能产生丰富的蛋白酶。在0.2mol/L pH7.2磷酸缓冲液中,不加任何底物,样品中α-淀粉酶与蛋白酶的比例是13:1,21:1,27:1,37℃保温24小时,α-淀粉酶活力损失22.1—8.8%,即α-淀粉酶的稳定性随蛋白酶的增加而减少,因而认为蛋白酶是影响α-淀粉酶稳定性的重要因素。Α-淀粉酶的稳定性可以通过选育菌种,选择合适的培养条件,添加钙离子保护及热处理等方法予以提高。     

α-淀粉酶抑制剂AAI的核磁共振氢谱谱峰归属及结构分析

α－淀粉酶抑制剂ＡＡＩ（α－Ａｍｙｌａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）是从墨西哥苋属植物Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ ｈｙｐｏｃｈｏｎｄｒｉａｃｕｓ种子中提取的由３２个氨基酸残基组成的多肽。它能强烈地抑制几种昆虫幼虫的α－淀粉酶活性,而不抑制人及哺乳类动物的α－淀粉酶活性。使用核磁共振方法收集了ＡＡＩ的二维氢谱谱图,完成了全部主链和绝大部分侧链质子共振峰的序列归属,并利用Ｘ－ＰＬＯＲ软件计算出ＡＡＩ的三维结构。     

在同一份植物样品中测定α-和β-淀粉酶活力方法的改进

前言本世纪二十年代Kuhn等发现植物淀粉酶有两种类型,根据酶作用于淀粉时旋光度的变化,水解产物为α—型,有负的变旋光作用的称为α—淀粉酶;产物为β—型,有正的变旋光作用的称为β—淀粉酶。由于α—和β—淀粉酶在植物的生理生化过程和某些食品发酵工业中起着重要的作用,因此,同时测定这两种淀粉酶活力的方法,对农业、食品工业和淀粉酶的生化研究都具有实际的应用价值。苏联植物生理学家X.H.波钦诺克所著《植物生物化学分析方     

中国大麦地方品种的α-淀粉酶酶活性研究

为了研究中国大麦地方品种种质资源α-淀粉酶的遗传变异,发掘具有高α-淀粉酶酶活性的材料。本试验以257份中国地方品种为试验材料,利用3,5-二硝基水杨酸法(DNS)和降落数值法(FN)测定了2010年和2011年收获的发芽种子与干种子中的α-淀粉酶活性。分析了不同年份间及发芽种子与干种子中的酶活性的相关性。结果表明,中国大麦地方品种的α-淀粉酶酶活性存在广泛的遗传变异,酶活性最高的品种几乎是酶活性最低品种的4倍,且多数品种的α-淀粉酶活性在发芽后第5天或第6天达到最高。发芽种子的α-淀粉酶酶活性在年份之间的相关性达到极显著水平,说明发芽种子的α-淀粉酶酶活性主要受遗传因素控制;发芽种子与干种子的酶活性之间相关性不显著,表明干种子测定的降落数值不能用来预测大麦品种的α-淀粉酶活性。     

喜树碱对胰α-淀粉酶部分性质的影响

喜树碱对胰α-淀粉酶有明显的抑制作用,其抑制类型为反竞争性抑制。利用紫外差光谱,研究发现喜树碱能改变胰α-淀粉酶的空间结构;利用荧光光谱研究了喜树碱与胰α-淀粉酶的相互作用,计算了二者的结合常数KA=2.78×106(mol/L)-1和结合位点数n=1.2477。其结果对喜树碱的进一步开发具有一定的指导意义。     

“pH对α-淀粉酶活性影响”之实验设计优化

以α-淀粉酶为研究对象,通过寻找合适的p H条件,以及调整酶与底物用量、反应温度来优化"p H对α-淀粉酶活性影响"的实验设计。优化后的实验方案为:3%可溶性淀粉与0.1%α-淀粉酶各1 m L,25℃下反应5 min;p H值分别为1、2、3的HCl溶液和p H值为12的Na OH溶液可分别作为影响α-淀粉酶活性的酸、碱性条件。     

石韦不同极性萃取物体外降血糖活性研究北大核心CSCD

为进一步明确石韦对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制作用机制,该研究以石韦95%乙醇提取物的不同极性萃取物为试材,阿卡波糖为阳性对照,采用pNPG法(p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside,pNPG)、DNS法(3,5-dinitro salicylic acid,DNS)考察石韦不同极性萃取物的α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性,并采用酶促动力学方法与Lineweaver-Burk曲线分析最强活性萃取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用类型,以期为石韦的进一步开发利用提供科学依据。结果表明:石韦水萃取物对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用最强,其IC_(50)值分别为(4.71±0.72)μg·mL^(-1)、IC_(50)=(48.40±0.32)μg·mL^(-1),并显著强于其他萃取物(P<0.05),且对α-葡萄糖苷酶抑制作用比阿卡波糖强,对α-淀粉酶抑制作用弱于阿卡波糖。阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制作用的IC_(50)值分别为(2857.36±1.35)μg·mL^(-1)和(16.41±0.63)μg·mL^(-1)。酶促动力学显示水萃取物对α-葡萄糖苷酶为可逆性抑制,Lineweaver-Burk曲线显示为竞争性抑制。综上结果表明,石韦水萃取物具有较好的α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性,是一种胃肠道副作用小、天然α-葡萄糖苷酶抑制剂来源。     

酶和发酵工程

枯草杆菌(Bacillus subtilis)2633能超量生产α-淀粉酶(比其亲本品系枯草杆菌6160约高3000倍)。采用枯草杆菌-大肠杆菌穿梭载体 PHY 300 PLK 将枯草杆菌2633的一个α-淀粉酶基因克隆到大肠杆菌中。当含有α-淀粉酶基因的重组质粒 PAM 26被导入枯草杆菌6160后,一个转换体大约可产生40000 U/毫升的α-淀粉酶,为枯草杆菌6160的4000倍。这表明2633的α-淀粉酶基因(淀     

复合淀粉酶酶解生淀粉机理探讨

以生土豆淀粉为原料,考察了复合生淀粉酶水解机制。发现单个糖化酶的酶解遵循Michaelis-Menten机制,而α-淀粉酶的酶解不遵循Michaelis-Menten机制;水解过程中复合酶酶解产物d[G]／dt的变化说明α-淀粉酶能很好地协同糖化酶水解生淀粉,其效果不仅仅是两者的简单相加。     

耐高温α-淀粉酶分子结构与异源表达研究进展

耐高温α-淀粉酶是数千年前即取得工业化应用的重要工业用酶。由于其具有热稳定性好、液化彻底、易保存等优势,在淀粉制糖、味精、啤酒等食品发酵以及纺织印染等行业都有着广泛的应用。本文首先就耐高温α-淀粉酶的菌种来源、结构与功能、α-淀粉酶酶活性提升、基因工程菌的构建等方面已取得的研究成果进行综述,然后对耐高温α-淀粉酶外源表达最新研究成果进行了总结。文章最后分析讨论了在耐高温α-淀粉酶开发方面国内现有水平与国际领先水平的差距,以期为耐高温α-淀粉酶的开发提供参考及思路。相信随着代谢工程和过量表达等技术手段的相继应用及业界的持续努力,我国耐高温α-淀粉酶的开发必将取得飞跃式发展。     

α-淀粉酶检测方法及其应用

α-淀粉酶是一种内切糖苷水解酶,可以水解淀粉等多聚糖内部的α-1,4-糖苷键,生成低聚糖、糊精、麦芽三糖、麦芽糖和少量葡萄糖。由于α-淀粉酶在食品、人体健康监测和制药方面的重要作用,其活性检测广泛应用于工业生产菌株的选育、临床疾病的诊断、糖尿病药物的开发和食品质量的控制中。近年来,随着检测技术的发展,许多更加快速、灵敏的α-淀粉酶检测方法被开发出来。本文综述了近年来α-淀粉酶的检测方法和应用研究进展,分类介绍其检测原理和优缺点,并对未来α-淀粉酶检测方法提出展望,以期为α-淀粉酶检测方法的开发和应用提供参考。