肥皂草素类核糖核蛋白体失活蛋白的纯化及其性质研究

 利用强阳离子交换柱从Saponaria officinalis L种子中分离出一种肥皂草素(Saporin)成分。它在无细胞体系中显示了较强的抑制蛋白合成的活性,与抗体连接后能特异性杀伤靶细胞。     

模式匹配分析方法检索免疫球蛋白样功能区

运用计算机进行核酸和蛋白质的序列分析是分子生物学研究的一个较新发展,这项技术已越来越多地用于研究大量积累的序列数据。蛋白质功能区是蛋白质分子中能独立折叠成具有一定结构并执行特定功能的结构域,所有具有同一类功能区的分子统称为一个蛋白质的超族(protein superfamily)。本文通过对免疫球蛋白(Ig)超族及其功能区序列所进行的分析,建立了一种根据功能区之保守片段残基组成的模式匹配分析检索蛋白质功能区的方法,它先根据多序列的对准比较确定某一类功能区之保守片段,再对已知的保守片段各位置上氨基酸残基组成进行统计分析,然后根据与统计数值相匹配的方法,计算待检序列残基组成的统计学意义,由此确定功能区的存在。该方法的优点在于它不仅可以检出已知的具有某一类功能区的分子,而且还可能发现新的具有该功能区的分子,从而推测后者的功能。     

两种纯化蓖麻毒素方法的比较

两种纯化蓖麻毒素方法的比较陈兴,赵立超,贺永怀,沈倍奋（军事医学科学院基础医学研究所,北京１００８５０）高纯度的蓖麻毒素（ｒｉｃｉｎ）对于免疫毒素的制备至关重要,直接影响到免疫毒素的应用效果。总结本实验室纯化ｒｉｃｉｎ的经验,我们发现蓖麻粗提物依次通...     

抗脲激酶单克隆抗体的研制

用杂交瘤技术获得了7种抗人脲激酶单克隆抗体。这些抗体仅与脲激酶反应,而不与结构上类似于脲激酶的胰酶、胰凝乳蛋白酶反应,与正常人血清也无明显反应。免疫电转印实验及酶活力抑制实验表明,除N30识别脲激酶分子及18kd轻链外,其他6种抗体均识别脲激酶54kd分子及33kd重链,所有7种抗体均不抑制酶活力。本文也探讨了这组抗体用于脲激酶结构功能研究,纯化脲激酶以及对某些肿瘤诊断的可能性。     

抗尿激酶单克隆抗体识别相应抗原决定簇的研究

 尿激酶是一种纤溶酶原激活剂,临床上用于治疗血栓。为了有效地用单克隆抗体亲和柱纯化尿激酶,我们对一组抗尿激酶单克隆抗体识别相应抗原决定簇的特性进行了研究。Western Blotting试验表明:S_(13)、S_(26)、N_(14)、N_(30)、N_(17-2)、N_(34)、N_(36)七个单克隆抗体主要抗54000道尔顿的高分子量尿激酶(HUK)。除N_(30)外,其余抗体还同时不同程度地抗33000道尔顿的低分子量尿激酶(LUK)。N_(30)除识别HUK外,还识别分子量为18000道尔顿的多肽链。竞争性结合试验证明:七个单克隆抗体分别抗五个不同的抗原决定簇,但它们都不抗尿激酶的活力中心。     

单克隆抗体概述

本文简单回顾了单克隆抗体技术产生的背景及发展和逐步完善的过程。从生化角度阐明选择核酸代谢旁路酶缺陷型的骨髓瘤细胞株和正常免疫脾细胞作为两个母本细胞融合成杂交细胞的原因,因为只有这样的细胞才能在HAT培养液中无限生长,也就是单克隆技术能取得成功的基本原理。比较了单克隆抗体和常规方法得到抗体的优越性,前者不仅可以较大量地得到高度纯化的针对某特定抗原决定簇的抗体,并能获得在通常情况下不易得到的抗弱抗原抗体,又是一个纯化某些物质的新的途径。本文又简述了单克隆抗体的生产程序,讨论了可能产生的技术问题;指出了杂交瘤的不稳定性和单克隆抗体不可能具有全部免疫球蛋白的生物活性的原因,例如有些单克隆抗体不结合补体,无细胞毒作用,无血凝作用或不与金黄色葡萄球菌蛋白A结合等。最后提出了单克隆抗体技术的应用方面,在产生大量高特异性的纯净抗体和为研究免疫反应的调节方面都有宽广的前途。     

免疫毒素的纯化

本文采用Ultrogel AcA 34凝胶柱纯化单克隆抗体和蓖麻毒素的结合物。结合物与游离毒素的分离较Sephadex G150柱好。继而利用蓖麻毒素B链能与半乳糖基结合的特性,用酸化Sepharose 4B柱进一步纯化结合物;达到完全除去游离抗体,使免疫毒素对靶细胞的特异性毒性提高20倍。     

CTLA4Ig融合蛋白在CHO细胞中的表达

CTLA4Ig是人CTLA4胞外区与人免疫球蛋白铰链区、CH2区、CH3区组成的融合蛋白,可以与B7结合,通过阻断B7与CD28的结合,从而阻断B7介导的T细胞活化必需的共刺激信号,可作为免疫抑制剂用于器官移植。将CTLA4Ig融合分子克隆到真核表达载体pCI-dhfr,并用脂质体方法转染到COS7和CHO-dhfr-细胞中,用氨甲喋呤筛选转染的CHO-dhfr-细胞。用RT-PCR、ELISA、细胞免疫荧光染色和Western-blot鉴定重组蛋白的表达。采用A蛋白纯化重组蛋白。     

人髓过氧化物酶基因cDNA克隆及急性白血病髓过氧化物酶基因的表达

应用PCR技术和DNA重组技术从HL－60细胞中克隆人髓过氧化物酶(MPO)轻链和部分重链基因cDNA片段,经核酸序列分析确证克隆片段全长769bpc将克隆的MP0 cDNA片段作为探钎,对一组白血病细胞系和急性白血病病例样本细胞的mRNA进行N0rthern印迹和点印迹分析,结果显示,MPO基因表达产物与急性白血病的粒细胞源性相关,因而它可作为白血病分型中确定细胞源性的重要标志。