白细胞介素及其受体研究进展

已被发现和命名的白介素有19种,其相应的受体大多也已被克隆及鉴定。白介素及其受体的结构特征决定了其信号转导和功能效应的共性和特性。许多白介素及可溶性受体在临床疾病的治疗中可能起重要作用,同时这也带动了对白介素及其受体的基因工程研究。随着基因组计划的日趋完成和一些新的分子生物学技术方法的建立,对白介素及其受体的研究在许多方面都面临着新的机遇和挑战。     

人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子在大肠 杆菌中的克隆与表达

利用基因重组技术构建人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子(bGM—CSF)的高效表达菌株E．Coli HB101／pZw．GM47,经酶切电泳、DNA测序、SDS—PAGE、Western印迹及生物活性测定等分析鉴定,证明能特异性表达有生物活性的14kDaGM—CSF,表达水平达40％以上,比活性高达5×10⁷u／mg．具有良好的开发应用前景。     

一种高效和经济的单克隆抗体制备新方法

杂交瘤技术使得单克隆抗体大量制备成为可能,采用该技术制备单抗的关键步骤是杂交瘤细胞的培养,常规方法是用细胞培养瓶水平方式培养,这需要经常细心照料细胞使之处于健康状况,此外,如要获得大量的单抗,还需要通过进一步重新接种来扩大细胞数量。本文报道了一种高效而又简便易行的在标准细胞培养瓶中制备单克隆抗体的方法。该方法的关键在于将杂交瘤细胞和其适合的培养液放在水平的细胞培养瓶中培养,直到９０％的细胞达到融合,然后补加培养液至培养瓶的颈部,将瓶子竖直地放置在培养箱中培养３～４周,直到９０％～９５％的细胞死亡…     

无性繁殖病毒序列的非放射性检测

无性繁殖的Epstein-Barr病毒、疱疹病毒(Ⅰ和Ⅱ型)和B犁肝炎病毒序列,被用作研制Southern印迹上非放射性检测系统的模型。这些克隆用结合了生物素或麦芽三糖的2′-脱氧UTP-烯丙基胺进行缺口翻译。然后在无关的细胞DNA存在或不存在的情况下,让这些探针同上述病毒DNA的限制酶消化物的Southern印迹进行杂交。     

人白细胞介素6cDNA克隆的分离与鉴定

我们从重组的人α干扰素处理的单层HeLa细胞常规提取Poly(A)~+RNA作为逆转录合成cDNA第一链之模板,用引物-适配接头法在噬菌质粒pTz19R中构建cDNA文库。以~(32)p-标记的480bpIL-6cDNA片段作探针进行菌落原位及狭缝印迹杂交,筛选出6个阳性克隆。其中两个克隆并用限制酶切分析及DNA序列测定做进一步鉴定。结果证明,一个克隆的cDNA片段长1.3kb,含有人白介素6全长编码区;另一个的cDNA插入片段为0.9kb,缺乏信号肽及成熟IL-6N端30个残基的编码序列。     

人NMDA受体主亚基M3-M4环基因片段的高效表达、纯化与鉴定

用基因工程方法获得人N 甲基 D 天冬氨酸 (N methyl D aspartate ,NMDA)受体主亚基M3 M4环靶片段 ,以此为免疫原 ,用于进一步免疫原性及相关应用研究 .自人脑胶质瘤组织中提取总RNA ,采用RT PCR扩增出人NMDA受体主亚基M3 M4环的基因片段 ,并按照计算机辅助原核表达载体pBV2 2 0中外源基因高效表达的数学模型预测方法 ,将其进行优化改构 .将目的基因克隆到pBV2 2 0中 ,转化大肠杆菌DH5α ,升温诱导表达 ,从蛋白质水平检测重组体在大肠杆菌中的表达情况 ,通过制备性SDS PAGE进行纯化 ,从相对分子质量、免疫反应性、肽质谱指纹分析等方面进行鉴定 .结果表明 ,成功构建了人NMDA受体主亚基M3 M4环的原核表达载体 (命名为pBV NR1L3) ,通过基因优化 ,实现了高效表达 .凝胶扫描分析表达量约占菌体总蛋白 2 9% ,重组肽纯度达 95 %以上     

小鼠GM-CSF的基因克隆和锚定修饰

将糖基化磷脂酰肌醇(GPI）锚定修饰的细胞因子直接转移到肿瘤细胞膜上,是研究治疗性肿瘤疫苗的一种有潜力的新策略。克隆了小鼠GM-CSF基因,井通过将从衰变加速因子（DAF）来源的GPI修饰性信号序列与mGM—CSF、嵌合,获得了GPI修饰的mGM-CSF分子,构建并鉴定了GPI锚定修饰的真核表达裁体pCI／GPI-mGM-CSF,为进一步研究表面工程治疗性肿瘤疫苗奠定了基础。     

人白细胞介素22基因的分离及其在大肠杆菌中的克隆与表达

白细胞介素 2 2 (ＩＬ 2 2 )是 2 0 0 0年发现的一种新的人类细胞因子 ,它在多种组织中均有表达 ,包括胰腺、脑 ,肝、小肠、直肠和肾等 .在功能方面 ,ＩＬ 2 2上调肝细胞急性期产物 ,参与炎症反应[1～ 3] ;诱导胰腺相关蛋白ＰＡＰ1 Ｒｅｇ2和ＯＰＮ的高表达 ,表明ＩＬ 2 2参与胰腺免疫功能反应[4 ] ;它对ＣｏｎＡ刺激下Ｔｈ1细胞ＩＦＮ γ的产生没有明显的抑制作用 ,却大大抑制了Ｔｈ2细胞ＩＬ 4的分泌 ,这对于哮喘有潜在的治疗作用[1] .我们利用反转录ＰＣＲ获得了编码ｈＩＬ 2 2成熟蛋白的ｃＤＮＡ ,并构建了高表达载体ｐＢＶｈＩＬ 2 2 ,…     

GDNF缺失突变体的设计及其结构与功能关系(英文)

研究了GDNF结构与功能的关系 .基于鼠源GDNF的晶体结构 ,利用计算机SGIIndigo2(R4 4 0 0 )工作站和InsightⅡ (95.5)蛋白质分析软件模拟了人GDNF三维结构 ,设计了GDNF分子的两个缺失突变体ΔN1 2 8和ΔN78 90 .以野生型GDNFcDNA作为模板 ,用PCR法得到编码缺失突变体的DNA片段 .将大肠杆菌作为表达系统 ,使缺失突变体GDNF在大肠杆菌中表达 ,对表达产物纯化和复性后进行生物活性测定 .两株突变体在大肠肝菌中获得了高效表达 ,纯化后的GDNF突变体ΔN1 2 8可以与存在于KG 1a细胞表面的受体结合 ,但不能促进 8日龄鸡胚背根节突起的生长 .突变体ΔN78 90既不能与受体结合 ,同时也失去了促背根节突起生长的功能 .说明GDNF分子的N端氨基酸对分子的生物学活性很重要 ,但对分子与受体GDNFR α的结合并不是必需的 ,而分子中的螺旋区对分子与受体的结合以及生物学活性都必不可少 .     

阿尔茨海默病

近年来,对阿尔茨海默病（Alzheimer＇sdisease,简称AD）的分子基础的了解进展迅速,特别是AD病人脑内空斑（plaque）和缠结（tangle）化学组分的鉴定和导致该病家族性形式的遗传突变的鉴定。淀粉样蛋白前体蛋白（amyloidprecursorprotein,APP）在AD中起重要作用,它产生β－淀粉样蛋白,后者是空斑的主要组分。已知编码APP的基因的突变使一些个体易感早发性AD。再者,APP基因位于２１染色体;唐氏综合征（Down＇ssyndrome）患者有三条２１染色体,他们３０岁时就会犯AD。关于从APP生成β－淀粉样蛋白的生化基础的知识对了解阿…