蓖麻毒素A链的基因克隆

作为导向药物蓖麻毒素A(Ricin-A)链在大肠杆菌中表达时不含糖基侧链,在体内半衰期长,可提高共作为导向药物的疗效。我们根据Ricin基因核苷酸序列,设计Ricin-A的上、下游引物,通过PCR(多聚酶链式反应)方法,扩增出Ricin-A链基因。与pUC_(19)载体连接,转化到JM103大肠杆菌中,得到重组克隆。对其进行几种酶切鉴定,证明酶切位点正确,又经序列分析,读出与文献发表的Ricin-A序列只有两个碱基不同,但无氨基酸残基的改变。有关Ricin-A的表达工作正在进行中。     

多药抗药基因Mdrl探针的克隆及初步应用

多药抗药基因Mdrl的表达水平与细胞的耐药性直接相关,检测Mdrl的表达水平可预测化疗的效果以及预后,用分子原位杂交的方法可检测单个细胞中Mdrl的表达水平.用PCR扩增方法获得了一段特异的DNA片段,并将其克隆到pUC18载体中,经DNA序列分析证明与文献报道一致,此探针可用于临床标本的分子杂交检测.     

免疫毒素的纯化

本文采用Ultrogel AcA 34凝胶柱纯化单克隆抗体和蓖麻毒素的结合物。结合物与游离毒素的分离较Sephadex G150柱好。继而利用蓖麻毒素B链能与半乳糖基结合的特性,用酸化Sepharose 4B柱进一步纯化结合物;达到完全除去游离抗体,使免疫毒素对靶细胞的特异性毒性提高20倍。     

用PCR方法定量检测多药抗性基因的表达

肿瘤细胞对化疗药物的抗性是癌症有效化疗的主要障碍。人类细胞中多药抗性基因(MDR1)编码一种p-糖蛋白,后者功能是能量依赖的跨膜药物外输泵,可降低细胞毒药物在胞内的积累。定量分析MDR1表达水平可说明病人抗药能力的高低。本文应用PCR技术建立了灵敏度高、专一性好、可定量检测临床标本中MDR1表达水平的方法。对周血标本的初步检测表明:白血病化疗效果与MDR1表达水平的高低有关。     

人髓过氧化物酶基因cDNA克隆及急性白血病髓过氧化物酶基因的表达

应用PCR技术和DNA重组技术从HL－60细胞中克隆人髓过氧化物酶(MPO)轻链和部分重链基因cDNA片段,经核酸序列分析确证克隆片段全长769bpc将克隆的MP0 cDNA片段作为探钎,对一组白血病细胞系和急性白血病病例样本细胞的mRNA进行N0rthern印迹和点印迹分析,结果显示,MPO基因表达产物与急性白血病的粒细胞源性相关,因而它可作为白血病分型中确定细胞源性的重要标志。     

蓖麻毒素A链的基因克隆

作为导向药物蓖麻毒素Ａ链在大肠杆菌中表达时不含糖基侧链,在体内半衰期长,可提高共作为导向药物的疗效。我们根据Ｒｉｃｉｎ基因核苷酸序列,设计Ｒｉｃｉｎ－Ａ的上,下游引物,通过ＰＣＲ（多聚酶链式反应）方法,扩增出Ｒｉｃｉｎ－Ａ链基因。与ｐＵＣ１９载体连接,转化到ＪＭ１０３大肠杆菌中,得到重组克隆。对其进行几种酶切鉴定,证明酶切位点正确,又经序列分析,读出与文献发表的Ｒｉｃｉｎ－Ａ序列只有两个碱基不同,     

不同交联方法制备的免疫毒素及其体内外特性

用三种不同的异型双功能交联剂把单抗和完整蓖麻毒素连接起来,经适当纯化获得了高活性免疫毒素(ITs),体外试验中蛋白质合成抑制50％的浓度IC₅₀达到2.7×10^-12mol/L.以二硫键连接的ITs比硫醚键连接的ITs细胞毒性高5—10倍(P<0.05),而硫醚键连接的ITs在动物体内代谢慢1倍,且其原型药物维持时间更长,稳定性更好。两类ITs在体内的代谢产物也不相同。