用合成多肽免疫制备尿激酶原单克隆抗体

根据尿激酶原与尿激酶一级结构的区别并结合计算机分子模拟,设计合成了包括尿激酶原Thr152-Glu163肽段的13肽,然后与载体蛋白KLH偶联作为免疫原,用BI林巴细胞融合技术获得了3种尿激酶原特异性单克隆抗体,这3种抗体仅与尿激酶原和合成多肽反应 ,而不与尿激酶及其结构类似物组织型纤溶酶原激活剂,凝血酶,纤维蛋白原反应,琼脂双向免疫扩散实验及酶活性抑制实验表明,3种抗体均为IgG类的IgG1亚类,所有3种抗体均不抑制酶活力,探讨了这组抗体用于尿激酶原结构与功能及其定量,定性分析研究方面的可能性。     

巴氏杆菌糖酵解酶的黏附作用研究

巴氏杆菌（主要是多杀性巴氏杆菌）可以引起多种动物疫病（巴氏杆菌病）,同时也引起人类感染发病。[目的] 研究巴氏杆菌糖酵解酶对宿主细胞（兔肾细胞）和两种常见分子[纤连蛋白（fibronectin,Fn）和血浆纤维蛋白溶解酶原（plasminogen,Plg）]的黏附作用。[方法] 采用原核表达系统对多杀性巴氏杆菌的糖酵解酶进行表达并纯化及制备多克隆抗体,通过菌体表面蛋白定位检测、黏附与黏附抑制等实验探究巴氏杆菌糖酵解酶的黏附作用。[结果] 菌体表面蛋白检测结果显示除烯醇化酶和丙酮酸激酶外的7个糖酵解酶在多杀性巴氏杆菌表面存在。这7个糖酵解酶均能黏附兔肾细胞,但仅有磷酸葡萄糖异构酶的多克隆抗体能对多杀性巴氏杆菌黏附宿主细胞产生抑制作用。Far Western blotting结果显示9个糖酵解酶均能结合宿主Fn和Plg。招募抑制实验结果显示磷酸葡萄糖异构酶、醛缩酶、磷酸甘油酸变位酶的抗体对多杀性巴氏杆菌结合Fn和Plg都有抑制作用,磷酸果糖激酶、丙糖磷酸异构酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、磷酸甘油激酶抗体仅对多杀性巴氏杆菌结合Fn或Plg有抑制作用。[结论] 多杀性巴氏杆菌糖酵解酶成员葡萄糖异构酶、磷酸果糖激酶、醛缩酶、丙糖磷酸异构酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、磷酸甘油激酶、磷酸甘油酸变位酶在多杀性巴氏杆菌黏附宿主细胞或分子过程中发挥作用。该研究的完成将加深巴氏杆菌病分子发病机制的认识,并为巴氏杆菌病的诊断标识筛选、新型疫苗创制和药物靶标筛选等提供基础数据。     

1-甲基次黄苷抗体的制备、鉴定及其在酵母丙氨酸转移核糖核酸研究中的应用

本文制备了m~1I~*专一性抗体。经过双向琼脂扩散实验,微量免疫沉淀抑制实验,半抗原结合抑制实验及亲和层析实验证明:抗体可以特异性地与m~1I相结合。可以和含有该核苷的tRNA_y~(ala)的反密码环部位结合。这种结合并不影响tRNA_y~(ala)t与鼠肝氨酰基-RNA合成酶相互识别。似乎从较为直接的意义上说明:反密码环部位不参与tRNA_y~(ala)分子与相应的鼠肝氨酰基-tRNA合成酶的识别。文中强调了用于核酸大分子研究的核酸类物质抗体,必须去除核酸酶的污染。用固相化的m~1I抗体进行亲和层析,可能是一种纯化tRNA_y~(ala)的有用手段。     

1-甲基次黄苷抗体的制备、鉴定及其在酵母丙氨酸转移核糖核酸研究中的应用

本文制备了m~1I专一性抗体。经过双向琼脂扩散实验,微量免疫沉淀抑制实验,半抗原结合抑制实验及亲和层析实验证明:抗体可以特异性地与m~1I相结合。可以和含有该核苷的tRNA_y~(ala)的反密码环部位结合。这种结合并不影响tRNA_y~(ala)t与鼠肝氨酰基-RNA合成酶相互识别。似乎从较为直接的意义上说明:反密码环部位不参与tRNA_y~(ala)分子与相应的鼠肝氨酰基-tRNA合成酶的识别。文中强调了用于核酸大分子研究的核酸类物质抗体,必须去除核酸酶的污染。用固相化的m~1I抗体进行亲和层析,可能是一种纯化tRNA_y~(ala)的有用手段。     

用单克隆抗体分析HBsAg的多肽及a决定簇的表位

通过Western-Blot发现,多克隆抗-HBs抗体及单克隆抗体B_(13),A_1均识别24kd及27kd两条多肽带,而单克隆抗体B_6,B_9及B_(12)只识别24kd,不识别27kd的多肽带。用这几株单克隆抗体对不同来源HBsAg a决定簇的表位密度进行了研究,结果表明血源、重组CHO细胞表达及重组痘苗病毒表达的HBsAg与重组酵母表达的HBsAg在结合单克隆抗体A_1、B_6及B_9的密度上有数量的差别,并且有统计学意义。     

胍和脲溶液对氨基酰化酶活性和构象的影响

 本文研究了不同浓度盐酸胍和脲溶液对猪肾氨基酰化酶活性和构象的影响。研究结果表明,在低浓度的胍和脲溶液中(小于2mol/L),酶分子的整体构象变化的程度与活力变化的程度基本是平行的;而在高浓度的胍和脲溶液中(2mol/L以上),失活程度稍大于构象变化的程度。这些结果与分子量和亚基组成基本相同,但不含金属配基的肌酸激酶的结果,以及小分子量的胰凝乳蛋白酶和牛胰核糖核酸酶的结果相比较来看,可以认为配基锌离子的存在对酶分子的活性部位区域构象的稳定作用有一定的贡献,致使氨基酰化酶的活性部位的构象状态不象后三种酶那样脆弱。同时,我们还发现锌离子的存在对酶分子整体构象的稳定性上贡献很小。     

蛋白质功能基团的改变与其生物活力的关系 Ⅲ.对硝基苯酰甲基溴对某些蛋白质活力的影响

对-硝基苯酰甲基溴(NPAB)在不太高的浓度之下对木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,胰凝乳蛋白酶和胰島素等的生物活力有明显的抑制作用。当NPAB与胰島素或胰疑乳蛋白酶共同保温时,随着生物活力的下降也同时发生吸收光譜的变化。对于胰凝乳蛋白酶而言,355mμ光密度的增加与其活力的下降完全平行說明NPAB仅作用于一个必需基团,再从二氫肉桂酸对这一抑制作用的?た蠢?这一基团可能是酶活性中心的一部分。NPAB对胰島素及核糖核酸酶的作用受pH影响,說明这一反应受蛋白分手中解离基团的控制,并且从它的pK值看来,这一解离基团很可能是组氨酸的咪唑基。pH影响木瓜蛋白酶和胰疑乳蛋白酶与NPAB的作用較为复杂,可能有不只一种解离基团参与控制它們与NPAB的反应。     

中华仓鼠二氢叶酸还原酶的酶学性质研究

测定中华仓鼠二氢叶酸还原酶（ＤＨＦＲ,Ｅ．Ｃ．１．５．１．３．）催化反应的各个动力学常数,对其反应机制进行了研究。测定了不同浓度脲溶液中酶与底物的解离常数Ｋｄ和表观米氏常数Ｋｍ,结果表明酶与底物二氢叶酸（ＤＨＦ）和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ＮＡＤＰＨ）的结合能力相差很小,都随脲浓度增加而减弱,而且一种底物的结合会削弱酶与另一底物的结合能力。研究了ＤＨＦＲ在脲变性过程中活力和构象的变化,结果表明低浓度脲可使稳态酶活力增强,此时酶的内源荧光发射光谱和ＣＤ谱变化很小;随脲浓度的增加,酶逐渐失活,同时荧光光谱的最大发射峰位红移,荧光强度和椭圆率也明显下降,说明酶活力的变化先于酶分子整体构象的变化,酶活性部位位于比酶分子整体更易受变性剂影响的有限区域,而且酶分子这种相对的和一定限度内的柔性是其表现生物活性所必需的     

肌醇磷脂激酶(PI4-K)单克隆抗体的制备及其对细胞生长的抑制

制备了抗肌醇磷脂激酶 ( PI4- K)单克隆抗体 ( A6D)并测定了抗原 -抗体反应基本特性及功能 .结果表明 ,单克隆抗体与固相及溶液中肌醇磷脂激酶的亲和常数分别为 7.5× 1 0 6和 6× 1 0 8( mol/L) -1.单抗 1 .9× 1 0 -7mol/L可以抑制从细胞提取液的 PI4- K酶活力 50 % .用 FITC标记单抗在蛋白微球引导下进入细胞内 ,主要富集在细胞质膜区 ,并对 He La细胞和小鼠小脑细胞生长有明显抑制作用 .     

腺苷酸激酶的脲激活及构象变化

用紫外吸收、圆二色、ANS结合外源荧光和小角X 射线散射等方法研究了腺苷酸激酶 (AK)的脲变性去折叠过程 .实验发现 :低浓度脲对酶有激活作用 ,最大激活的脲浓度是 1mol/L ;伴随着激活 ,酶分子的二级结构发生了微小的变化 ,但此时观察不到其整体结构的明显变化 .对照分析AK的晶体结构和催化反应机制 ,激活作用被认为是低浓度脲增加了酶分子活性部位的柔性 .AK与ANS结合荧光与脲浓度关系的研究支持了上述推论     

肌醇磷脂激酶(PI4-K)单克隆抗体的制备及其对细胞生长的抑制

制备了抗肌醇磷脂激酶 ( PI4- K)单克隆抗体 ( A6D)并测定了抗原 -抗体反应基本特性及功能 .结果表明 ,单克隆抗体与固相及溶液中肌醇磷脂激酶的亲和常数分别为 7.5× 1 0 6和 6× 1 0 8( mol/L) -1.单抗 1 .9× 1 0 -7mol/L可以抑制从细胞提取液的 PI4- K酶活力 50 % .用 FITC标记单抗在蛋白微球引导下进入细胞内 ,主要富集在细胞质膜区 ,并对 He La细胞和小鼠小脑细胞生长有明显抑制作用 .     

猴肝细胞膜脂蛋白(a)受体的研究

猴肝细胞膜蛋白经 SDS- PAGE和蛋白转移电泳后用免疫印迹法测定 ,硝酸纤维素膜分别与抗牛肾上腺皮质 LDL受体的抗体、LDL、Lp( a)和 PLG温育后见有 3条不同的蛋白条带 ,分子量分别为 370 kd、2 90 kd和 80 kd.用酶标法测定猴肝细胞膜蛋白 ,发现经 Lp( a) + PLG温育后用 Lp( a)抗体反应的结果与 Lp( a)温育后用 Lp( a)抗体反应的结果比较无显著差异 ,而经 Lp( a) + PLG温育后用 PLG抗体反应的结果比单独用 PLG温育后用 PLG抗体反应的作用强 ;同样经 Lp( a) +LDL温育后用 Lp( a)抗体反应的结果与经 Lp( a)温育后用 Lp( a)抗体反应的结果比较无显著差异 ,而经 Lp( a) + LDL温育后用 LDL抗体反应比单独经 LDL温育后用 LDL抗体的反应强 ,排除Lp( a)与 PLG和 LDL的交叉反应 ,实验认为猴肝细胞膜上可能同时存在 LDL受体、PLG受体和Lp( a)受体     

Bowman-Birk蛋白酶抑制剂的体外和动物模型实验抗癌实验研究进展

Bowman-Birk蛋白酶抑制剂（BBI）是一种植物丝氨酸蛋白酶抑制剂,能同时抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶。体外及动物实验都证实：BBI纯品或BBI浓缩物均有较强的抗癌活性。本文综述了近年来有关BBI的一些抗癌研究进展,包括BBI的结构、临床前研究及可能的分子机制等。     

海洋酸化对泥蚶精子运动的影响及作用机理初探

研究分析了未来海洋酸化情景(pH7.8和pH7.4)对典型滩涂贝类泥蚶(Tegillarca granosa)精子运动活力的影响, 并从精子运动供能角度探究了其作用机理。研究结果表明, 海洋酸化可以显著削弱泥蚶的精子运动速度。由于精子的三磷酸腺苷(ATP)水平与其活力呈显著的正相关, 研究检测了不同酸化条件下泥蚶精子的ATP含量及其合成关键酶酶活, 实验结果显示精子的ATP含量以及磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶活力在酸化条件下均显著下降。此外, 精子内的Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase)调节了精子的运动能力, 因此实验也探究了海洋酸化对泥蚶精子Ca2+-ATPase酶活的影响, 结果证实该酶活力在海水pH为7.4时被显著抑制。综合本研究结果可以得出, 海洋酸化很可能会通过干扰精子细胞内ATP的合成及Ca2+的调控进而削弱精子的运动速度。     

Jerne网络学说

他认为免疫系统是由10~(12)淋巴细胞和10~(20)抗体组成,具有双重的特性,表现在(1)T、B 淋巴细胞的作用部份是协同的,部份是对抗的。(2)淋巴细胞识别抗原时的反应可以是正的(如增值、激活、抗体分泌)也可以是负的(如抑制和麻痹)。(3)抗体分子有识别和被识别的特性,它们不但有结合部位可以识别抗原,而且有抗原决定簇可以被其它抗体分子的结合部位所识别,这种抗体分子兼指循环抗体和淋巴细胞     

抑太保对亚洲玉米螟表皮酚氧化酶及几丁质酶活力的影响

采用饲喂法,抑太保(Atabron,IKI-7899)对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis幼虫的LC₅₀约是灭幼脲Ⅰ号的1/10.体内和体外实验表明,抑太保及灭幼脲Ⅰ号均能导致幼虫表皮酚氧化酶及几丁质酶活力显著增高.与对照相比,饲喂抑太保及灭幼脲Ⅰ号,五龄幼虫表皮酚氧化酶活力分别增长276.00%和28.00%、几丁质酶活力分别增长42.25%和13.62%;腹腔注射抑太保及灭幼脲Ⅰ号,五龄幼虫表皮酚氧化酶活力分别增长74.86%和37.98%、几丁质酶活力分别增长68.18%和28.86%.我们认为,酚氧化酶及几丁质酶活力的增高应是抑太保及灭幼脲Ⅰ号导致玉米螟死亡的重要原因.     

慈菇中两种结晶的多功能蛋白酶抑制剂的研究

由于蛋白酶抑制剂在生理、生化、病理、药理上都占有很重要的地位,特别是具有多功能的蛋白酶抑制剂被广泛应用于临床,近年来愈来愈受到各方面的重视。本文报道了从慈菇中提取两种结晶的多功能蛋白酶抑制剂,它们都具有两个活力相等的活性中心,这与其他已知的同类型植物蛋白酶抑制剂不同,有它的特殊性。(1)慈菇蛋白酶抑制剂A、B,除能抑制胰蛋白酶外,还能抑制胰凝乳蛋白酶及猪颌下腺的舒缓激肽释放酶。用酰胺、酯及蛋白等不同底物分别求出抑制剂A、B对胰蛋白酶的当量抑制比值及对胰凝乳蛋白酶的半抑制比值。两者对胰蛋白酶的抑制常数在10~(-9)～10~(-10)的范围内,抑制剂B对胰蛋白酶较之A有更大的结合力,但抑制剂A对胰凝乳蛋白酶及舒缓激肽释放酶较之B却有更明显的抑制活力。(2)用葡聚糖凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳分别测定抑制剂A、B的分子量均在17000左右。从抑制剂A、B对胰蛋白酶的当量抑制比值求得分子量为8500。这说明每一抑制剂分子中具有两个活力相等的活性中心。(3)测定了抑制剂A、B的氨基酸组成,二者除碱性氨基酸及天冬氨酸含量略有差异外其余皆相同,各含有两对二硫键,非极性氨基酸含量较高约占60%左右。由氨基酸组成求得最小分子量约16500。(4)用二硝基氟苯,二甲基氨基萘磺酰氯及氨肽酶M测定抑制剂A、B的N末端,都证实是天冬氨酸。     

高致病性禽流感病毒H5N1中和抗体的单链抗体构建与活性鉴定

在本实验室研制出的多株针对H5N1血凝素的鼠单抗中,10F7对34株H5N1病毒株都有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强、识别谱广的特点。通过基因工程构建10F7单链抗体(scFv)表达重组质粒,在大肠杆菌中表达并纯化scFv,经血凝抑制实验及中和实验检测其活性。结果在针对3株病毒的血凝抑制实验中,10F7scFv蛋白对其中2株H5N1病毒均显示出结合活性,而对H9毒株没有反应。在针对7株H5N1病毒的中和实验中,10F7scFv对5株病毒具有较好的中和能力。H5N1广谱中和抗体10F7的单链抗体构建,为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础。     

四季豆幼苗中尿囊酸酰胺水解酶的一些特性

酰脲代谢在许多固氮豆科植物氮素代谢中起重要作用;尿囊酸的酰胺水解酶(EC3.5.3.9)分解尿囊酸成为脲基乙醇酸和CO2、NH3,脲基乙醇酸的酰胺水解酶进一步分解脲基乙醇酸产生乙醛酸和CO2、NH3.该文首次报告测定四季豆尿囊酸降解酶(分解尿囊酸的酶)的方法,酶反应基质需要盐酸苯肼存在.在四季豆干种子、幼苗根、茎和叶,均可测出尿囊酸降解酶活力.从四季豆幼苗分离出两个尿囊酸降解酶.一个分子量大于200 kD,另一个分子量为13.5 kD;小分子量的尿囊酸降解酶(没有脲基乙醇酸酰胺水解酶或脲酶活力)用于性质研究.酶反应产物分析表明,该酶是尿囊酸的酰胺水解酶.该酶反应的最适pH为8.5.Mn2 是该酶的金属辅助因子.Km为76μmol/L,Vmax为16.7 nKat/mg(=1 002 nmol min1mg1).乙醛酸和乙醇酸抑制该酶活力.赖氨酸残基和色氨酸残基是酶活力的必需基团;巯基和酪氨酸残基不是酶活力的必需基团.     

慈菇中两种结晶的多功能蛋白酶抑制剂的研究

由于蛋白酶抑制剂在生理、生化、病理、药理上都占有很重要的地位,特别是具有多功能的蛋白酶抑制剂被广泛应用于临床,近年来愈来愈受到各方面的重视。本文报道了从慈菇中提取两种结晶的多功能蛋白酶抑制剂,它们都具有两个活力相等的活性中心,这与其他已知的同类型植物蛋白酶抑制剂不同,有它的特殊性。(1)_慈菇蛋白酶抑制剂A、B,除能抑制胰蛋白酶外,还能抑制胰凝乳蛋白酶及猪颌下腺的舒缓激肽释放酶。用酰胺、酯及蛋白等不同底物分别求出抑制剂A、B对胰蛋白酶的当量抑制比值及对胰凝乳蛋白酶的半抑制比值。两者对胰蛋白酶的抑制常数在10~(-9)～10~(-10)的范围内,抑制剂B对胰蛋白酶较之A有更大的结合力,但抑制剂A对胰凝乳蛋白酶及舒缓激肽释放酶较之B却有更明显的抑制活力。(2)_用葡聚糖凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳分别测定抑制剂A、B的分子量均在17000左右。从抑制剂A、B对胰蛋白酶的当量抑制比值求得分子量为8500。这说明每一抑制剂分子中具有两个活力相等的活性中心。(3)_测定了抑制剂A、B的氨基酸组成,二者除碱性氮基酸及天冬氨酸含量略有差异外其余皆相同,各含有两对二硫键,非极性氨基酸含量较高约占60%左右。由氨基酸组成求得最小分子量约16500。(4)_用二硝基氟苯,二甲基氨基萘磺酰氯及氨呔酶M测定抑制剂A、B的N末端,都证实是天冬氨酸。