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1.
我们首次利用基因同源重组技术,用包含编码β半乳糖苷酶(LacZ基因)基因的AT1B同源DNA片段,置换AT1B受体基因的外显子序列,通过显色示踪基因LacZ产生的β半乳糖苷酶,观察了有基因转录活性的AT1B受体的组织分布。结果显示AT1B受体主要分布在睾丸、肾上腺皮质的球状带和蛛网膜下腔血管及侧脑室脉络膜血管上,在垂体前叶组织中也有少量的存在。为进一步研究AT1B受体的生理和生化功能确定了组织学分布范围 相似文献
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为了动态观察复制性衰老细胞中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)激活人信号转导与转录活化因子3(hSTAT3)信号转导途径的核转位情况及该途径在细胞衰老过程中的变化。将载体pMS1-hSTAT3上的目的基因STAT3序列亚克隆到pEGFP-C3报告载体中,构建出pEGFP-hSTAT3质粒选择人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38细胞株进行细胞培养,通过脂质体(Effectene)转染的方法,将pEGFP-STAT3质粒分别转染至19代,42代WI-38细胞中;在激光共聚焦显微镜下动态观察血管紧张素Ⅱ激活STAT3的核转位的变化及不同代数的差别.结果显示AngⅡ刺激细胞后,出现活化的STAT3在胞核内聚集现象,并且在19代细胞中15分钟开始出现,30—45分钟左右时达到高峰;42代细胞中30分钟左右开始出现,50—60分钟左右达到高峰。因此我们认为AngⅡ刺激WI-38细胞,能出现hSTAT3信号转导的核内集聚现象;并且随着WI-38细胞传代数的增加,STAT3信号转导入核时间延迟。说明随着细胞的复制性衰老,通过STAT3通路转导的信号活性逐渐降低,最终影响细胞的增殖,可能是促进细胞衰老的原因之一。 相似文献
3.
利用逆转录病毒RNAi载体抑制心肌成纤维细胞分泌纤维连接蛋白 总被引:2,自引:0,他引:2
心脏间质纤维化是心室重塑的最重要表现之一, 心肌细胞外基质的过度积聚在其中扮演着重要角色. 纤维连接蛋白是细胞外基质的重要成分之一, 它负责胶原之间的连接、细胞的黏附和增殖等. 纤维连接蛋白主要由心肌成纤维细胞产生. 由于导致心肌细胞外基质过度分泌的因素很多, 单独阻断某一上游途径很难完全抑制由其他途径导致的过度合成. 利用RNAi技术试图在细胞外基质合成的终末途径进行阻断以期达到更为有效的结果. 通过体外合成的双链RNA, 抑制了纤维连接蛋白在血管紧张素Ⅱ刺激下的过度表达, 进而构建带有H1启动子的逆转录病毒载体, 成功地实现了用可稳定表达的shRNA抑制纤维连接蛋白的过度分泌. 该载体也可作为今后进行基因功能快速分析和基因治疗的工具. 相似文献
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三种不同方法固定的石蜡切片中RNA的分析 总被引:3,自引:0,他引:3
研究在 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定的石蜡切片中提取RNA的质量和数量 .取 2 5 0g体重的Wistar大鼠的肾脏 ,分别采用 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定 ,石蜡包埋 ,H E染色 ;采用RNA裂解液、TRIZOL试剂 2种方法提取切片RNA ,逆转录为cDNA ,采用普通PCR和SYBRGREEN 1定量PCR分析RNA质量和数量 .结果表明 ,3种固定方法都可保持组织良好的结构和形态 ;采用 2种提取方法 ,均可经RT PCR扩增出 180bp大鼠磷酸甘油醛脱氢酶 (G3PDH)、5 6 5bpβ肌动蛋白 (β actin)、10 0bp纤溶酶系活化剂抑制物 1(PAI 1) ;但采用RNA裂解液时 ,比TRIZOL试剂可提取更多的RNA . 相似文献
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在鄱阳湖湿地典型分布区采集常见植物的叶片与根际土壤样品,以探讨土壤养分变化对湿地植物叶片氮磷含量及其化学计量关系的影响。结果表明:鄱阳湖湿地植物叶N含量变化范围为4.98~52.29 g·kg~(-1),平均值为(21.71±8.99) g·kg~(-1);叶P含量波动范围为0.44~3.02 g·kg~(-1),平均值为(1.38±0.53) g·kg~(-1); N∶P平均值为(17.19±8.23);叶片N、P含量受土壤P含量的影响显著,对土壤P含量的变化较N更敏感;叶片N∶P化学计量关系具有稳定性特征,不随土壤N、P养分变化而产生显著差异,且叶片N-P线性关系在不同土壤养分环境下没有发生策略位移现象。 相似文献
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为了探讨人肥胖(obesity,OB)基因的生理和病理意义,利用逆转录-聚合酶链式.反应(RT-PCR)方法,从中国汉族成人腹膜后脂肪组织总RNA中扩增出肥胖基因编码区序列(cDNA).定向亚克隆pUC19质粒,克隆的OBcDNA不含信号肽序列并加入了新的起始密码子ATG,序列分析表明,与日本报道的人OBcDNA相比,多出一个谷氨酸密码子CAG.将OBcDNA定向克隆至原核表达载体pBV220,构建了重组OB基因表达质粒pBV220-OB.SDS-PAGE证实pBV220-OB在大肠杆菌中可表达分子量为16.7KD的特异蛋白带. 相似文献
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江浙沪和哈尔滨地区汉族D17S30位点的多态性分布 总被引:14,自引:1,他引:13
D17S30是位于人类染色体17d13.3、以70bp为重复单位的,具有高度多态性的VNTR位点,本文采用作者报道的微量快速Amp-FLP分型技术,对100名哈尔滨市北方汉族人和110名江浙沪南方汉族人作了D17S30位点分型,发现在北方汉族与江浙沪南方汉族之间等位基因频率分布并无显著差异,但可见A1和A7基因频率北高南低,A4基因频率则为南高北代,提示存在南北汉族之间的分化。D17S30位点南北 相似文献
8.
本研究应用免疫组织化学方法及计算机图象分析系统,对47例IgA肾病患者肾组织中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)的变化进行了定量研究。以此进一步探讨细胞粘附分子在IgA肾病肾脏损伤中的作用变化机理。本文的结果显示:ICAM-1和VCAM-1在IgA肾病肾小球内表达均增加,且与肾小球病变程度有密切关系。肾小球病变越重,上述粘附分子在肾小球内表达越强。重度IgA肾病患者肾小球内ICAM-1和VCAM-1的表达最强。在伴有炎症细胞浸润的肾间质中ICAM-1也有存在。这一结果说明,ICAM-1和VCAM-1表达强度的变化与IgA肾病的发展有密切的关系。 相似文献
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PCR-SSP分型检测上海汉族人群HLA-Cw位点血清学和非血清学鉴定的等位基因 总被引:9,自引:0,他引:9
应用补体介导的微量淋巴细胞毒实验可检出HLACw1~10,但有20%~50%的空白(blank)不能检出。利用PCRSSP对70例上海汉族样本进行HLACw等位基因分型,首次在中国汉族人群中检出Cw1201/1202、1203、1301、14、1601、1602、1701等非血清学鉴定的抗原,并对血清学鉴定抗原的基因进行分型,依次为Cw01、02、0302/0304、0303、04、0501、0602、0701/0702/0703及08。PCRSP分型使上海汉族人群HLACw位点空白基因频率从0.307下降到0.028。12例样本检出Cw08,与原来认为中国人群中Cw8罕见的观点不符。结果证明,PCRSSP用于HLACw基因分型是快速、准确的。 相似文献
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目的:克隆大鼠高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT2)的全长cDNA,并明确其在肾小管上皮细胞内的定位表达情况。方法:从大鼠肾组织中提取总RNA,用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩增出SDCT2全长基因并测序,将其插入真核表达载体中构建SDCT2真核表达载体,然后将它们转染到肾小管上皮细胞LLC-PKl中表达,并用激光共聚焦显微镜观察该蛋白的亚细胞定位情况。结果:扩增出2kb的SDCT2全长基因,Westernblot表明肋CT2基因在LLC-PKl细胞中得到了正确的表达;共聚焦显微镜分析显示正常SDCT2蛋白主要定位于细胞膜上,与生物信息学的预测结果一致;为了比较不同连接温度对重组DNA连接效率的影响,观察了3种连接温度下的转化效率,结果显示温度循环法的连接效率明显比其他2种常规连接温度要高。结论:高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白全长基因被成功克隆,其主要表达于肾小管上皮细胞膜上。 相似文献