中国人肥胖基因克隆及其原核表达载体的构建

为了探讨人肥胖（obesity,OB）基因的生理和病理意义,利用逆转录-聚合酶链式．反应（RT-PCR）方法,从中国汉族成人腹膜后脂肪组织总RNA中扩增出肥胖基因编码区序列（cDNA）．定向亚克隆pUC19质粒,克隆的OBcDNA不含信号肽序列并加入了新的起始密码子ATG,序列分析表明,与日本报道的人OBcDNA相比,多出一个谷氨酸密码子CAG．将OBcDNA定向克隆至原核表达载体pBV220,构建了重组OB基因表达质粒pBV220-OB．SDS-PAGE证实pBV220-OB在大肠杆菌中可表达分子量为16.7KD的特异蛋白带．     

从石蜡包埋的微量肾活检组织中提取及分析RNA

本文用氧钒核糖核苷复合物ＶＲＣ（ＶａｎａｄｙｌＲｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅＣｏｍｐｌｅｘ）孵育的方法,从石蜡包埋半年以上的肾组织中提取出ＲＮＡ,分析了ＲＮＡ的质量,探讨了影响ＲＮＡ提取的因素。在此基础上,我们又采用ｔＲＮＡ助沉的方法,进一步从石蜡包埋的微量肾活检组织中提取出ＲＮＡ,并用逆转录热启动ＰＣＲ（ＲＴ－ｈｏｔｓｔａｒｔ－ＰＣＲ）方法,观察了石蜡包埋的肾活检组织中细胞因子的基因表达。     

中国人肥胖基因克隆及其原核表达载体的构建

为了探讨人肥胖基因的生理和病理意义,利用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,从中国汉族成人腹膜后脂肪组织总ＲＮＡ中扩增出肥胖基因编码区序列（ＣＤＮＡ）,定向亚克隆至ＰＵＣ１９质粒,克隆的ＯＢＣＤＮＡ不含信号肽序列并加入了亲折起始密友子ＡＴＧ〈序列分析表明,与日本报道的人ＯＢＣＤＮＡ相比,多出一个谷氨酸密码子ＣＡＧ,将ＯＢＣＤＮＡ定向克隆至原功体ＰＢＶ２２０,构建了重组ＯＢ基因表达质粒ＰＢＶ     

Cloning and high-level expression of plasminogen activator inhibitor-1 cDNA derived from human glomerular mesangial cells

Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒ1(ＰＡＩ1)ｉｓａｓｐｅｃｉｆｉｃｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｕｒｏｋｉｎａｓｅｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ(ｕＰＡ)ａｎｄｔｉｓｓｕｅｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ(ｔＰＡ)[1].ＣｈａｎｇｅｓｏｆＰＡＩ1ｍａｙｉｎｄｕｃｅｉｍｂａｌａｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｇｌｏｍｅｒｕｌａｒｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ(ＥＣＭ)ｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ,ｔｈｕｓｌｅａｄｉｎｇ…     

人肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物cDNA克隆和高效表达

利用逆转录 聚合酶链式反应 (RT- PCR)方法 ,从中国正常人肾小球系膜细胞总RNA中扩增出人纤溶酶原激活物抑制物 (PAI 1 )基因cDNA编码区序列 ,并定向亚克隆至pUC1 9质粒 ,克隆的PAI -1cDNA去除了信号肽核苷酸序列并加入新的起始密码ATG ,编码区序列与文献报道的人内皮细胞PAI -1cDNA序列完全相同 .将PAI -1cDNA定向亚克隆至原核表达质粒 pBV2 2 0 ,构建了重组PAI -1基因表达质粒pBV2 2 0 PAI -1 ,在大肠杆菌中得到了高效表达 ,重组PAI -1蛋白表达占菌体总蛋白 45 % .Westernblotting检测 ,在分子量约为 43.0ku处出现一特异性蛋白质条带 .对形成包涵体的表达产物进行变复性处理及FPLC纯化 ,获得纯度 97%以上的潜伏态重组PAI -1 .经 4mol/L盐酸胍激活后 ,重组PAI- 1具有与天然PAI- 1同样的生物学活性 ,对尿激酶型纤溶酶原激活物 (u- PA)具有显著抑制活性 .