牛精子和卵母细胞低温保存研究进展

牛的精子和卵母细胞的低温保存对于畜牧业的发展有重要价值。该文综述了近年来牛精子和卵母细胞低温保存的研究进展,包括保存方法、与低温保存有关的细胞特性、存在的问题和改进的方法等内容。     

唐菖蒲花粉低温保存过程中的生理生化特征

以唐菖蒲切花栽培品种嫦娥粉花粉为实验材料,比较其花粉各项生理生化指标在-80℃和4℃贮藏过程中(360 d)的变化,以探讨2种保存条件下花粉保存效果出现显著性差异的生理生化原因.结果表明:唐菖蒲花粉在2种保存温度条件下,随保存时间的延长,各项生理生化指标表现出显著差异.与4℃保存处理相比,-80℃保存处理抑制了花粉中MDA的积累,增强了超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)的活性,减轻了花粉膜质过氧化和膜系统受伤害程度,同时提高了花粉可溶性蛋白质和可溶性糖的含量,增强了花粉的抗冻能力,从而使低温保存花粉活力维持在相对较高水平,这或许是-80℃条件下花粉保存效果较好的部分生理生化原因.     

黄独微型块茎低温保存及其萌发苗遗传稳定性研究

以黄独微型块茎为材料,对其低温保存期间的解剖结构、生理生化指标进行观察,并对其低温保存后的萌发苗进行遗传稳定性检测。结果表明:低温保存时间越长,微型块茎外围细胞内的淀粉粒消失越多,至90d时,淀粉粒消失的细胞扩延到微型块茎中部;低温保存期间,微型块茎的抗氧化酶和淀粉酶活性及其脯氨酸和可溶性糖含量均呈显著增加趋势。在低温保存的0~90 d内,SOD活性在18~54 d内持续增加,而在54~90 d内基本维持不变;POD活性在18~36 d内显著增加,在36~54 d内维持稳定,而在54~72 d内又开始显著增加,72~90 d趋于稳定;CAT活性变化趋势与SOD活性一致,即在18~54 d内持续增加,而在54~90 d内基本维持不变;α-淀粉酶和总淀粉酶活性在18~36 d内快速增加,在36~54 d内无显著变化,在54~90 d内持续显著增加;β-淀粉酶活性在18~54 d内显著增加,在54~72 d内维持稳定,在72~90 d内又开始显著增加;可溶性糖含量在18~36 d内显著增加,36~54 d内无显著性变化,54~90 d又开始显著增加;脯氨酸含量在18~36 d内无变化,在36~72 d内显著提高,在72~90 d内维持不变。微型块茎低温保存90 d后,其萌发苗的形态(株高、叶片数、根数和茎节长)、DNA含量、生理指标(总叶绿素含量、SOD活性、CAT活性、POD活性、可溶性糖含量和可溶性蛋白含量)及其叶片的光合特性参数(净光合速率、气孔导度、细胞间CO2浓度、蒸腾速率、气孔限制值、水分利用效率和瞬时羧化速率)和叶绿素荧光参数(初始荧光、最大荧光、PSⅡ最大光化学效率、PSⅡ潜在光化学效率、PSⅡ实际光化学效率、开放的PSII反应中心捕获激发能效率、光化学荧光猝灭系数和非光化学猝灭系数),与常温保存的比较均无显著性差异,这表明黄独微型块茎的低温保存不会造成植株的遗传变异。     

包埋玻璃化法超低温保存植物种质的研究进展

包埋玻璃化法是在玻璃化法和包埋脱水法基础上发展起来的超低温保存植物种质的新技术.它具有能同时处理大量材料,处理后恢复生长快,对材料的毒害作用较小及成芽率高等优点,已成功地用于辣根、山嵛菜等20余种植物,在植物种质资源的保存上显示出了巨大的应用潜力.本文介绍了包埋玻璃化法产生的背景及其优点,阐述了包埋玻璃化法的基本方法和预培养、包埋、脱水、化冻及恢复培养等过程,比较了该法冻存后的效果和冻存后所形成植株的遗传稳定性,同时指出了进一步研究的重点.     

植物顽拗性种子研究进展

对植物顽拗性种子的概念、物种分类、形态、分布及一些生理生态特征进行了综述,分析了顽拗性种子脱水敏感性的原因和对环境的生态适应性,探讨其可能的进化地位和贮存技术。同时,对顽拗性种子研究的发展趋势和应用前景进行了展望,即加强生境调查,更新顽拗性种子植物数据库,从形态学、生理生态学和分子生物学分析种子顽拗性本质。     

螺旋藻的超低温保存法

【目的】建立螺旋藻藻种的超低温保存法,并探究该方法对不同种类螺旋藻藻种保存的适用性。【方法】采用碘量法筛选出耐低温螺旋藻藻株,通过单因素和正交试验设计对耐低温螺旋藻超低温保存法进行条件优化,并以优化后的超低温保存法对8株不同种类的螺旋藻进行保藏实验。【结果】FACHB-351为筛选出的耐低温螺旋藻藻株;优化后的超低温保存方案为:以10%蔗糖溶液做冷冻保护剂,将藻丝体密度为1.0×107 CFU/m L的藻悬液于4°C驯化72 h,再将藻液和保护剂分别在0°C预冷30 min后混匀,混匀后于0°C停留3 h,然后投入液氮保存。保藏实验结果表明,保藏6个月时除了耐低温性较差的FACHB-350、FACHB-1070、FACHB-902螺旋藻存活率为0,不能恢复生长繁殖,其它5种耐低温性较好的螺旋藻均能在一定时间内恢复正常的生长繁殖,其中FACHB-351的存活率最高,为39.33%。【结论】建立的超低温冷冻保存法可用于耐低温性较好的螺旋藻藻种的长期保存。     

微流控线性加载低温保护剂减少猪MⅡ期卵母细胞的渗透损伤

在卵母细胞低温保存中,通常需要加载冷冻保护剂来抑制冰晶对细胞的损伤,但高浓度冷冻保护剂的加载会对细胞造成渗透损伤.为了减小细胞的渗透损伤,本文设计并制作了适合卵母细胞冷冻保护剂加载的微流体装置,研究了微流控线性加载30%(v/v)二甲基亚砜(Me2SO)低温保护剂时细胞内保护剂浓度变化、细胞体积变化,以及对细胞存活率与发育率的影响,并与传统的加载方法(一步法、分步法)做了比较.结果表明:微流控法能够实现卵母细胞冷冻保护剂的连续线性加载,避免了卵母细胞体积的骤变,显著减小了细胞的渗透损伤,提高了细胞的存活率.其中细胞的最小渗透体积减小为0.86V0,细胞的存活率达到92.8%,比一步法高33%,比两步法高16.3%,但与四步法之间无显著性差异.经孤雌激活后体外培养,细胞的卵裂率和囊胚率分别达到75.8%和27.4%,都显著高于一步法和分步法(P0.05).因此,微流控线性加载低温保护剂能够显著减小细胞的渗透损伤,为卵母细胞低温保存技术提供新思路.     

脐带血干细胞渗透特性实验研究

冷冻过程中水的输运直接影响生物材料低温保存的效果.对细胞渗透特性的测量将有助于低温保存方案的设计.本文采用渗透腔法,对脐带血干细胞的渗透性能或特性进行了实验研究.实验测得脐带血干细胞的不变体积比例为0.52土0.07,平均直径为9.9士1,0μm,25℃下对水的渗透系数为4.394×10-13m3/N.s,10℃下对水的渗透系数为1.256×10-13m3/N·s.根据Arrhemius关系式,得到渗透系数的活化能为58 6kJ/mol.文中将脐带血干细胞的这些性能数据与从其它文章得到的干细胞的类似性能数据进行了对比.     

SOD对4℃保存人红细胞损伤的防护作用研究

目的：探讨SOD对延时保存红细胞损伤防护作用的机理。方法：取义务献血人员静脉血,置4℃冰箱保存。保存前后不同时期用标准方法分别检查各项指标,用生物荧光素标记红细胞,测定24h活存率。实验分3组：ACD和／或GMA、抗氧化剂（SOD）组。结果：SOD组保存75d,无氧糖酵解率维持在保存前的86．2％,ATP为56．4％,PK为64．3％,明显高于GMA或ACD组。保存75d整体回输后24h活存率为86．1％,与GMA保存42d(89.1%)结果接近。结论：用抗氧化剂保养液在4℃条件下保存人血红细胞从42d延长到75d,红细胞无氧糖酵解率、ATP、PK和整体回输后24h活存率等均与42d保存方相符,为红细胞的活存提供了理论根据。