低温技术与生物工程

低温生物学(cryobiology)是研究低温条件下生物生命现象的特征和规律、研究生物与环境之间的相互关系。以及生物体保存的一门新兴的边缘科学。就是利用低温技术手段。人为地控制各种生物生命现象,以便研究、解决生物学中的有关问题。这里的低温是指冰点以下。对生物保存一般在-80℃(干冰温度)至-196℃(液氮温度)甚至更低。它涉及到     

低温显微装置及其对细胞胞内冰晶形成现象的观察

了解细胞在不同条件下的结冰可能性有助于设计低温保存方案。应用低温显微系统．本对快速冷冻的脐带血干细胞的结冰现象进行了研究。在没有低温保护剂时,胞内出现冰晶温度范围为-4℃— -13℃,在有10％二甲亚砜做低温保护剂时,胞内出现冰晶温度范围为-27℃— -38℃。利用得到的实验数据,根据Toner提出的胞内冰晶形成模型,对有关参数进行了拟合。     

小球藻的玻璃化超低温保存法

先用含0.5 m01·L-1甘油和0.4 mol·L-1蔗糖的预处理液处理20min,然后用含30%蔗糖 15%乙二醇 10%二甲基亚砜 BBMG培养液的玻璃化液处理,在0℃下预冻60min后,将小球藻投入液氮.此法存活率较高,可达到60.14%,小球藻种质保存效果较好.通过试验初步建立了小球藻玻璃化法超低温保存的技术程序.     

系统低温生物学技术在实验小鼠资源保存中的建立与应用

目的建立小鼠胚胎与配子冷冻库,以安全、有效地保存小鼠资源。方法选择不同遗传背景（近交系、远交群、免疫缺陷、疾病模型和基因改变等）的实验小鼠,系统进行了超数排卵、体外受精（IVF）率、胚胎与精子的冷冻复苏效果、卵巢冷冻与移植、辅助体外受精等比较研究。结果①小鼠年龄和遗传背景的不同,其超数排卵的结果也不同（P〈0．01）。三个日龄段中,28日龄最好,其次为112日龄,56日龄最差;不同遗传背景小鼠的超数排卵结果显示,封闭群和大部分近交系小鼠优于转基因小鼠（P〈0．05）,自发性疾病小鼠和基因剔除小鼠的结果最差;②不同品系小鼠的新鲜精子和冻融精子的体外受精率差异有显著性（P〈0．05）,特别是C57BL／6J小鼠冻融精子的IVF率（10．3±4．2％）与新鲜精子（89．8±4.8％）相比,差异极显著（P〈0．01）;③不同品系小鼠的胚胎复苏率,除MRL／mp小鼠的复苏率略低外,其他小鼠品系均有较高的冷冻胚胎复苏率（58．2％～83．9％）,表明,不同遗传背景小鼠之间差异有显著性（P〈0．05）,但均可以达到有效保存小鼠资源的目的。④小鼠的遗传背景、年龄等对小鼠精子的冷冻效果都有影响,采用改良的FERTIUP冷冻保护剂和细胞质内单精注射（ICSI）技术可有效提高以C57BL／6J为背景的基因改变小鼠的精子冷冻复苏率。⑤卵巢冷冻保存可以改善雌性小鼠的繁殖困难或不孕。结论小鼠资源的安全保存,除了长期连续繁殖保种外,最好的或最保险的方法是低温保存。通过将胚胎、配子、卵巢等长期保存在液氮（-196℃）中避免遗传性状的改变,并在将来复苏后获得正常的小鼠后代,以用于生物学和医学等研究。     

甘薯种质超低温保存研究进展

甘薯是重要的粮食及经济作物,其种质保存一般采用田间种质圃和离体试管苗保存两种方式.但因甘薯的生理特性及这两种保存方式本身存在的弊端,有必要开展新的保存方法研究.超低温保存是目前甘薯种质长期安全保存的最有效方式.本文对甘薯超低温保存的定义、方法及存在的问题和展望进行了论述,并对茎尖玻璃化法进行了详细介绍.     

园艺植物茎尖冷冻疗法脱毒的技术研究

超低温冷冻疗法是超低温保存技术在植物脱毒上的一个新的应用。由于其脱毒率高,操作简单,被认为是最有效脱除植物病毒的方法,为脱毒苗的生产开辟了一条新的途径。本文就超低温冷冻疗法脱毒的原理、操作程序、关键技术和在园艺植物上的最新研究进展进行综述,并对其今后的发展进行了展望。     

果树种质资源超低温保存研究进展

综述了国内外在超低温保存果树种质资源方面的最新研究成果,从材料选择、材料预处理、冰冻保护剂、冰冻方法及超低温保存对组织超微结构的影响等几个方面总结了果树超低温保存的原理、影响因素及关键操作技术,展望了果树种质资源超低温保存技术的应用前景.     

红豆杉愈伤组织超低温保存有关因素的研究

对红豆杉愈伤组织超低温保存中几个主要因素进行了比较,试验证明预培养时间、预培养基中蔗糖浓度、保护剂的组合以及冰冻降温方法与超低温保存后的相对细胞活力密切相关.试验结果表明,在含8%蔗糖的62号液体培养基中振荡预培养6d,红豆杉愈伤组织在超低温保存后细胞活力可保持最高.有效的冷冻保护剂为10%山梨醇+10%DMSO,冷冻方法以分步冷冻和慢冻较为适宜,而经快冻的愈伤组织复苏后活力低下.     

液氮超低温保存放线菌条件研究

用6种保护剂对28株放线菌和小单孢菌进行液氮超低温保存。保存3年4个月其存活率均达100％。拮抗性检查结果表明,肉汤和龙眼蜜保护剂对小单孢菌,牛奶保护剂对放线菌保护效果显著,保存前后其拮抗性无明显变化。     

凹叶厚朴愈伤组织的超低温保存

采用单因子比较和均匀设计法。研究凹叶厚朴愈伤组织超低温的影响因素。结果表明：超低温保存的适宜材料是４周龄的愈伤组织。经４－６℃低温下预培养１２天的愈伤组织抗冻能力最强。