冻结速率对血小板冷冻干燥保存的影响

冷冻干燥法是使血小板能够长期保存的一种理想方法。冻结过程对血小板的冻干保存至关重要。采用梯度降温、搁板预冷、液氮冻结等三种冻结方式,研究了冻结速率对血小板冷冻干燥保存恢复率的影响。实验结果表明用搁板预冷的方式冻结并干燥的血小板复水后的恢复率最高,达到(93.0.2)%,此时的冻结速度约为10℃/min。扫描电镜照片显示冻干复水后的血小板保持了完整的细胞结构,但与新鲜血小板相比略呈球形。冻干复水后的血小板对1U/ml凝血酶的最大聚集率接近于新鲜血小板,但聚集速度比新鲜血小板慢。     

非洲鲫Tilapia mossambica Peters的食料研究

一、引言引进优良鱼种是发展淡水鱼类养殖事业重要途径之一。非洲鲫(Tilapia mossambica Peters)属鲈形目(Perciformes)丽鱼科(Cichlidae),原产于非洲东南部的莫三鼻给湾。由于它具有生长迅速、繁殖力和抗病力强等特点,因而具有养殖价值。1957年开始引入我国,先后在广东、广西、福建、浙江等省试养成功。并很快传播到其他省区,成为我国当前重要的养殖对象之一。费鸿年(1958)在报导“新移殖到我国饲养的非洲鲫鱼”时指出:这种鱼是以植物性食料为主的杂食性鱼类。幼鱼完全吃硅藻、单细胞绿藻和小甲壳类。较大的鱼摄食腐败的植物,特别爱吃丝状藻类、原球藻类、硅藻类,有时还能吃蚊的幼虫和虾类。广东省水产科学研究所(1960)对非洲鲫研究结果也表明其食料以植     

超声波用于海藻糖载入血小板

研究超声波对海藻糖载入人血小板过程的影响.将浓度约1×109个/ml的人血小板在含50 mmol/L海藻糖、100 mmol/L NaCl、10 mmol/L KCI,10 mmol/L EGTA、10 mmol/L咪唑的溶液中孵化,温度为37℃,持续时间4 h.孵化期间对各试样分别施加800 kHz、不同强度和不同时间的超声波辐射,以不施加超声波辐射的血小板样品为对照组.采用蒽酮硫酸法和分光光度计测量糖含量,并据此计算渗入血小板的海藻糖浓度.结果表明,在超声波辐射强度1=0.8 W/cm2、辐射时间1 h时海藻糖载入血小板的浓度最高,达(17.40±2.90)mmol/L,比对照组(11.27±2.53)mmol/L高54.3%.在光学显微镜下观察经超声波法载入海藻糖后的血小板,发现形态保持完好,与新鲜血小板形态几乎无差别,合适的超声波辐射能够有效强化海藻糖载入人血小板的过程,同时为进一步的血小板冻干研究提供了基础.     

濒危药用植物云南黄连传粉生态学研究

云南黄连为中药材黄连的原植物之一,为国家二级濒危保护植物。通过对云南黄连的开花物候、花部特征、繁育系统及传粉方式进行观察研究,以探讨云南黄连濒危机制,为其种质资源保护及人工抚育奠定基础。结果表明:(1)云南黄连的花期从12月份起至第二年的3月份,花期长达4个月,花序开花可持续45～60d,同一花序上不同花的开花时间相隔1～3d,单花花期可持续40～45d。(2)云南黄连为多歧聚伞花序,苞片包被花芽,花两性,雄蕊和心皮多数。(3)云南黄连的花粉-胚珠比(P/O)为9 000左右,杂交指数(OCI)值为4或5,为自交亲和但需要传粉者完成传粉的兼性异交型繁育系统,并存在无融合生殖现象。     

海藻糖载入血小板的研究

将不可渗透型的保护剂海藻糖有效地载入血小板内部是用冷冻干燥法保存血小板重要的第一步。研究血小板对海藻糖的载入量随外部海藻糖浓度、孵化时间、孵化温度改变的变化规律,发现在细胞外海藻糖浓度为50mmol/L、孵化温度37℃、孵化时间4h的条件下,血小板能有效地吸收海藻糖,细胞内海藻糖浓度达到15mmol/L以上。对孵化后的血小板进行形态观察、血液学分析和膜联蛋白(annexin)V结合活化分析,结果表明孵化后的血小板保持了正常血小板的形态和功能。     

新的端粒酶活性抑制蛋白LPTS-L的制备

LPTS基因是利用定位候选克隆策略克隆的一个新的肝相关候选肿瘤抑制基因。LPTS基因编码一个全长为328氨基酸的蛋白质(LPTS-L),该蛋白具有抑制细胞端粒酶活性的功能。为了进一步研究LPTS-L蛋白的结构与功能,利用DNA重组技术,将LPTS-L的cDNA克隆到表达载体pET-24a中构建重组克隆pET-24-LPTS,并在大肠杆菌BL-21中进行融合表达,获得可溶形式的LPTS-L融合蛋白。采用Ni Sepharose4B柱亲和层析,可以获得纯度较高的蛋白,但不适合大量制备。通过设计引物去掉了pET-24a载体上的6×His tag将LPTS-L基因进行了非融合表达,然后采用磷酸纤维素P11阳离子交换层析纯化LPTS-L蛋白,纯度可达到55%。再经Sephadex G-100凝胶过滤,LPTS-L蛋白的纯度可达到80%。Western blot实验显示经纯化后的LPTS-L蛋白可与兔抗GST-LPTS-L的多抗发生特异性结合。采用TRAP法测定蛋白质活性,结果显示纯化得到的LPTS-L蛋白可抑制端粒酶的活性,与采用Ni Sepharose4B纯化获得的LPTS-L融合蛋白比较,其抑制效率基本一致。因此,所建立的技术可以有效地制备LPTS-L蛋白。     

低温显微装置及其对细胞胞内冰晶形成现象的观察

了解细胞在不同条件下的结冰可能性有助于设计低温保存方案。应用低温显微系统．本对快速冷冻的脐带血干细胞的结冰现象进行了研究。在没有低温保护剂时,胞内出现冰晶温度范围为-4℃— -13℃,在有10％二甲亚砜做低温保护剂时,胞内出现冰晶温度范围为-27℃— -38℃。利用得到的实验数据,根据Toner提出的胞内冰晶形成模型,对有关参数进行了拟合。     

脐带血干细胞渗透特性实验研究

冷冻过程中水的输运直接影响生物材料低温保存的效果.对细胞渗透特性的测量将有助于低温保存方案的设计.本文采用渗透腔法,对脐带血干细胞的渗透性能或特性进行了实验研究.实验测得脐带血干细胞的不变体积比例为0.52土0.07,平均直径为9.9士1,0μm,25℃下对水的渗透系数为4.394×10-13m3/N.s,10℃下对水的渗透系数为1.256×10-13m3/N·s.根据Arrhemius关系式,得到渗透系数的活化能为58 6kJ/mol.文中将脐带血干细胞的这些性能数据与从其它文章得到的干细胞的类似性能数据进行了对比.     

牛精子和卵母细胞低温保存研究进展

牛的精子和卵母细胞的低温保存对于畜牧业的发展有重要价值。该文综述了近年来牛精子和卵母细胞低温保存的研究进展,包括保存方法、与低温保存有关的细胞特性、存在的问题和改进的方法等内容。     

低温保护剂加入/取出过程中细胞体积的极值

低温保护剂是细胞低温保存过程中必不可少的,其加入／取出过程受到细胞体积变形极限的限制．在两参数细胞渗透模型的基础上,得到了细胞在低温保护剂加入／取出过程中细胞内水体积和细胞体积极值的解析解,分析了低温保护剂的渗透性和初始浓度差对细胞体积极值的影响。