犬气管超微结构分析及低温保存研究

为气管移植的临床需要,气管的低温保存是迫切需要解决的问题,国内外至今未见报导。本文通过电镜观察研究了抗冻剂的种类、浓度,以及降温速率和复温方法等因素对狗气管低温保存效果的影响;初步得到了一些有关参数,可使经低温处理后的气管仍具有较完善的超微结构。     

扶芳藤茎尖的玻璃化法超低温保存及其植株再生

扶芳藤属卫矛科卫矛属常绿藤本灌木,我国拥有丰富的扶芳藤资源,目前已经引起了专家学者的注意,扶芳藤的资源和变异研究(潘青华等2004)、叶片粗蛋白和氨基酸成分分析(潘青华等     

低温保存技术在顽拗性种子种质保存中的利用

由于顽拗性种子不耐脱水且对低温敏感,常规保存方法难以达到长期保存的目的。因此,(超)低温保存顽拗性种子种质是最理想的方法。顽拗性种子的低温保存,应用较多的是玻璃化法和两步法。诸多因素影响着低温保存的成败,如种子或胚的含水量水平、溶液低温保护剂效应、降温冰冻与解冻方式、水合过程以及后培养等,这些需深入探索与解决。除顽拗性种子脱水耐性和低温敏感性机理外,植物细胞的冻害和抗冻机理也亟需探明,以便找到最佳冷冻方法,制定长期保存种质基因的最佳方案。     

抗冻蛋白在超低温保存中作用机制的新模型

在超低温保存(cryopreservation,-80℃—-196℃)中,抗冻蛋白(antifreeze porteins,AFPs)对细胞存活率和热力学特性的影响十分复杂。在一些实验条件下,抗冻蛋白表现出保护活性;在另一些实验条件下,它却表现出毒害性。换句话说,它既能阻遏冰晶生长,又能促使成冰核效应(ice nucle-ation effect)发生。在总结最新实验结果的基础上,结合抗冻蛋白进化和结构生物学方面的新进展,我们提出了一个新模型,该模型对抗冻蛋白功能的两面性作了较好的诠释。     

衣藻细胞玻璃化超低温保存技术的研究

本研究以衣藻为材料,探讨其玻璃化超低温保存的条件和方法,结果表明,衣藻经含0.25mol/L蔗糖溶液的TAP培养基预培养一天后,在玻璃化冷冻保护剂中脱水5分钟,直接投稿液氮,48小时后快速化冻,去保护剂并用含0.5mol/L蔗糖溶液的TAP培养基境培养一天,再转到ATP培养基暗培养一天,最后置光照条件下恢复培养,其存活率可达31.45％,恢复培养后衣藻细胞的生长规律与未冻存的衣藻相一致。     

水稻单倍体不定芽超低温保存和植株再生及其遗传稳定性研究

通过水稻单倍体幼穗离体培养,诱导形成了大量的不定芽。将３ｍｍ左右的不定芽转入半固体继代培养基继代培养７ｄ,而后转入１．８ｍＬ的安瓿瓶中,冰浴条件下加入预冻了的冰冻保护剂淹没材料,在冰上平衡４５￣６０ｍｉｎ后,转入程序降温仪,以１．０℃／ｍｉｎ的速率从４℃降至－４０℃,在－４０℃停留１ｈ后,投入液氮保存。将液氮保存３０ｄ左右的不定芽于３８￣４０℃的水浴中快速解冻,随即转入半固体的再生培养基,以待恢复     

植物榈包埋脱水法超低温保存的研究进展

包埋脱水法是植物材料超低温保存的的新技术,从１９９０年至今,已有３０多篇文献报道。本语文介绍了包埋脱水法的研究历史、技术要点和主要优点。     

抗冻蛋白应用于水稻悬浮细胞超低温保存的研究

AFP from winter flounder was utilized in cryopreservation of plant cells. During cryopreservation of rice suspension cells by two-step method, AFP at 0.01 mg/ml damaged the cells extremely. The data obtained at relatively high concentration, however, decreased the variability of survival rate. During vitrification of rice cells, AFP at 0.2 mg/ml enhanced the viability. However, high concentration AFP (> 5 mg/ml) decreased the recovery rate. Studies indicated that the results of application of AFP in cryopreservation were closely related to the concentration of cryoprotectant. The amount of ice crystal in environment, the concentration of AFP and cryoprotectant, and the composition of plasma membrane were several key factors affecting the results of AFP application. In mechanism analysis, the authors suggested that on one hand AFP can interact with ice crystal, which inhibits ice recrystallization and prevent the cells from devitrification. On the other hand, AFP also can interact with cell membrane, resulting in the ice growth around the plasma membrane.     

盐生杜氏藻和青岛大扁藻的超低温保存

采用两步法冷冻技术超低浊保存盐生杜氏藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎｕ（Ｄｕｎａｌ）Ｔｅｏｄ．）和青岛大扁藻（Ｐｌａｔｙｍｏｎａｓ ｈｅｌｇｏｌａｎｄｉｃａ Ｋｙｌｉｎ ｖａｒ．ｔｓｉｇｔａｏｅｎｓｉｓ）。当二甲基亚砚（ＤＭＳＯ）浓度分别为５％和２０％,平衡时间均为ｍｉｎ,预冻温度及保持时间分别为－４０℃,６０ｍｉｎ和－３０℃,３０ｍｉｎ;化冻后分别在０℃和到温下采用慢速稀释法去除ＤＭＳＯ时,     

低温和超低温保存对中国大鲵成熟精子的影响

中国大鲵Andrias davidianus是中国特有的一种濒危有尾两栖类动物,为了保护这一珍稀物种并且为中国大鲵人工辅助繁育建立一套可靠的技术,对中国大鲵的精子在0—4℃下低温短期保存和在液氮中超低温长期保存进行了研究。研究表明中国大鲵精子原液在常温下一般仅存活3—5h,4℃下能存活6d,0℃下存活时间可达9d。精子原液中添加Ringer氏液或Holtferter氏液,精子存活率比原液保存显著降低。在改良的超低温冻存条件下,中国大鲵精子在液氮中保存两周后解冻,精子复苏率可达10%—15%。利用扫描和透射电镜观察冻融前后中国大鲵精子的超微结构,发现受冷冻损伤精子质膜出现膨胀、破裂;精子穿孔器和轴丝显著弯曲,甚至断裂;波动膜明显脱落或膜结构损坏;精子线粒体嵴变形。结果表明,超低温冻存导致部分中国大鲵精子超微结构发生变化而产生冻伤,进而导致精子活力、复苏率下降。研究为建立规范化的中国大鲵精液保存程序和中国大鲵规模化人工繁育提供重要参考。