低温保存脐带和胎盘组织的效果研究

目的:建立脐带和胎盘组织的低温保存方法,为自体化基因治疗和细胞治疗提供丰富的细胞储备。方法:取离体的脐带和胎盘,冲洗干净,以体积比20kg/m~3、15kg/m~3、10kg/m~3、5kg/m~3共4组浓度的DMSO作为抗冻剂,采用程序降温,至-80℃后转入液氮中保存,采用细胞培养与电镜扫描进行效果评估。结果:10kg/m3组组织低温保存效果最好,15kg/m~3组次之,5kg/m~3组效果最差,培养所得的胎盘组织来源的基质样细胞具有间充质干细胞的某些生物学特性。结论:低温保存脐带和胎盘组织切实可行,为自体基因治疗和细胞治疗提供了细胞储备。     

枇杷茎尖二步玻璃化法超低温保存的研究

超低温保存是目前植物种质资源长期稳定保存最理想的方法,而近几年发展的玻璃化超低温保存法具有设备要求简单、材料处理步骤简便及效果和重演性好等特点,倍受人们的青睐。国内外用玻璃化法成功地保存许多果树的种质资源。在对枇杷（Eriobotrya japonica Lindl．）花粉超低温保存取得成功的基础上,作者进行了枇杷茎尖玻璃化超低温保存的研究,以期建立枇杷茎尖超低温保存体系,为长期稳定保存枇杷种质资源提供技术支持。     

落叶松体细胞的胚胎发生

简要回顾了重要用材树种落叶松体细胞胚胎发生的研究历史,并对落叶松体细胞胚胎发生的基本步骤、影响体细胞胚胎发生的因素及其主要应用,进行了综述,同时就落叶松体胚发生的研究趋势作了展望.     

人骨髓细胞长期低温保存的研究

细胞保存有重要价值 ,骨髓细胞保存的价值主要在于为骨髓细胞移植提供可靠保证。传统的骨髓细胞低温保存是采用二甲基亚砜为保护剂 ,以慢速率“二步”法降温至 - 80℃ ,直接投入液氮。理论上讲 ,细胞在这种温度下 ,一切代谢停止 ,可以永远保存。本文对 2 0例人骨髓细胞持续低温保存 15年的情况进行分析。1　材料与方法(1)材料①骨髓冻存与复温　在局麻下采集骨髓 (恶性淋巴瘤骨髓象正常 12例 ,急性白血病完全缓解 8例 ) ,肝素抗凝 (4 0ｕ/ｍｌ) ,采集平均量 6 2 0 (385～ 880 )ｍｌ,4℃下 ,自然沉降 6 0ｍｉｎ ,除去血浆及部分红细胞 ,浓集…     

利用不同稀释剂对长期保存的猪精液质量检测

目的：由于冷冻保存的猪精液在解冻后会出现低成活率和低繁殖率的情况,本项目研究猪精液的低温长期保存和保存后的精子质量评定。方法：本实验选用目前常用的BTS,ANDROHEP,KIEV,ZORLESCO等四种稀释剂,将猪新鲜精液进行稀释（1：1）后分别于17℃保存15天,每天取样对精子的质量进行评价,利用荧光染料Hoechst 33258和SYBR－14／碘化丙碇（PI）分别检测精子死活;利用活体荧光染料JC－1检测精子线粒体活性;利用考马斯亮兰染色检测精子顶体状态;利用金霉素（CTC）检测精子是否获能。结果：SYBR－14／PI和Hoechst 33258两种方法检测精子死活都很灵敏,前检测的活精子比例较后稍高,但都低于JC－1检测的线粒体有活性的精子比例,说明精子线粒体活性损失要慢于质膜完整性的破坏;活精子比例和线粒体活性在保存的前8天都是缓慢减少,获能比例和顶体状态分别在第9－14天和第11天变化较大,利用AN和ZO保存13天,BTS保存10天以及KIEV保存9天的精液中精子的活率,顶体完整率及线粒体有活性的比例仍高于50％,提示这些精液仍可用于人工授精或体外受精,这四种稀释剂保存15天后的精子获能比例接近70％,Hoechst33258,SYBR-14,JC-1,考马斯亮兰检测结果亮度相关。结论：这四种稀释剂对精子的低温保存效果依此为：AN＞ZO＞BTS＞KIEV。     

储存条件对花绒寄甲成虫寿命及产卵量的影响

花绒寄甲Dastarcus helophoroides Fairmaire是天牛类林木蛀干害虫的重要天敌昆虫,释放成虫是利用该天敌控制害虫的重要手段之一。为保持成虫释放时仍具有有效活力,本文研究了成虫在释放前的储存温度和储存时长对其产卵量和寿命的影响。试验采用饲喂和未饲喂的成虫在16±1℃、12±1℃、8±1℃和4±1℃下储存,测定成虫的死亡率,同时测试成虫在同一储存温度下保存不同时长后的产卵量与寿命。结果显示,成虫在12℃储存条件下死亡率最低,且羽化后的新成虫在储存前未饲喂更利于其存活。经历不同的储存时间后,花绒寄甲的产卵量均随时间变化呈现先升后降的规律,且不同储存时长的累积产卵量差异显著（F7,16=83.12, P<0.001）其中储存60 d的成虫产卵量最高,各处理间的累积死亡率差异显著（F7,16=277.82, P<0.001）,其中储存60 d的死亡率最低为38%。储存温度与时长对花绒寄甲成虫寿命及产卵量有显著影响,成虫适合在12℃条件下保存,保存时长在60 d效果最好。     

常温和低温下保存小新月菱形藻的包埋-脱水法

用包埋.脱水法在常温和低温下保存小新月菱形藻(Nitzschla closterium f.minutissima),探讨了温度、光(暗)、含水量,密封袋内空间体积和密封袋外膜材质等因素对保存效果的影响.结果表明,小新月菱形藻在4℃下暗保存6个月后的最高存活率达到80.4%.而且,保存后的藻细胞经过恢复培养后,其生长力可达到保存前的水平.包埋.脱水法操作简单.无需复杂设备,在藻类种质保存中有广阔的应用前景.     

防风愈伤组织的玻璃化法超低温保存及再生

为避免连续继代造成的愈伤组织变异,探索新的种质资源保存方法,对防风愈伤组织进行了超低温冷冻保存及植株再生研究。以关防风3周龄的愈伤组织为材料,单一变量法研究适宜的玻璃化法超低温保存程序。结果显示:(1)防风愈伤组织超低温保存的最佳方案为:4℃条件下于MS+1.0mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+5%DMSO的继代培养基中预培养3d,60%PVS2常温装载20min,100%PVS2于2℃脱水45min后直接投入液氮。(2)防风愈伤组织经超低温保存后的相对存活率最高为79.24%,其中预培养和脱水是实现超低温冻存的关键环节,且1.0mol/L蔗糖的MS溶液洗涤、暗培养14d以上有助于冻后愈伤组织恢复生长。研究表明,玻璃化超低温冻存可以作为防风愈伤组织的保存方法,冻后愈伤可以恢复生长并再生成完整植株。     

包埋玻璃化法超低温保存植物种质的研究进展

包埋玻璃化法是在玻璃化法和包埋脱水法基础上发展起来的超低温保存植物种质的新技术。它具有能同时处理大量材料,处理后恢复生长快,对材料的毒害作用较小及成芽率高等优点,已成功地用于辣根、山嵛菜等20余种植物,在植物种质资源的保存上显示出了巨大的应用潜力。本文介绍了包埋玻璃化法产生的背景及其优点, 阐述了包埋玻璃化法的基本方法和预培养、包埋、脱水、化冻及恢复培养等过程,比较了该法冻存后的效果和冻存后所形成植株的遗传稳定性,同时指出了进一步研究的重点。