冻结速率对血小板冷冻干燥保存的影响

冷冻干燥法是使血小板能够长期保存的一种理想方法。冻结过程对血小板的冻干保存至关重要。采用梯度降温、搁板预冷、液氮冻结等三种冻结方式,研究了冻结速率对血小板冷冻干燥保存恢复率的影响。实验结果表明用搁板预冷的方式冻结并干燥的血小板复水后的恢复率最高,达到(93.0.2)%,此时的冻结速度约为10℃/min。扫描电镜照片显示冻干复水后的血小板保持了完整的细胞结构,但与新鲜血小板相比略呈球形。冻干复水后的血小板对1U/ml凝血酶的最大聚集率接近于新鲜血小板,但聚集速度比新鲜血小板慢。     

超声波用于海藻糖载入血小板

研究超声波对海藻糖载入人血小板过程的影响.将浓度约1×109个/ml的人血小板在含50 mmol/L海藻糖、100 mmol/L NaCl、10 mmol/L KCI,10 mmol/L EGTA、10 mmol/L咪唑的溶液中孵化,温度为37℃,持续时间4 h.孵化期间对各试样分别施加800 kHz、不同强度和不同时间的超声波辐射,以不施加超声波辐射的血小板样品为对照组.采用蒽酮硫酸法和分光光度计测量糖含量,并据此计算渗入血小板的海藻糖浓度.结果表明,在超声波辐射强度1=0.8 W/cm2、辐射时间1 h时海藻糖载入血小板的浓度最高,达(17.40±2.90)mmol/L,比对照组(11.27±2.53)mmol/L高54.3%.在光学显微镜下观察经超声波法载入海藻糖后的血小板,发现形态保持完好,与新鲜血小板形态几乎无差别,合适的超声波辐射能够有效强化海藻糖载入人血小板的过程,同时为进一步的血小板冻干研究提供了基础.     

海藻糖载入血小板的研究

将不可渗透型的保护剂海藻糖有效地载入血小板内部是用冷冻干燥法保存血小板重要的第一步。研究血小板对海藻糖的载入量随外部海藻糖浓度、孵化时间、孵化温度改变的变化规律,发现在细胞外海藻糖浓度为50mmol/L、孵化温度37℃、孵化时间4h的条件下,血小板能有效地吸收海藻糖,细胞内海藻糖浓度达到15mmol/L以上。对孵化后的血小板进行形态观察、血液学分析和膜联蛋白(annexin)V结合活化分析,结果表明孵化后的血小板保持了正常血小板的形态和功能。     

牛精子和卵母细胞低温保存研究进展

牛的精子和卵母细胞的低温保存对于畜牧业的发展有重要价值。该文综述了近年来牛精子和卵母细胞低温保存的研究进展,包括保存方法、与低温保存有关的细胞特性、存在的问题和改进的方法等内容。     

低温显微装置及其对细胞胞内冰晶形成现象的观察

了解细胞在不同条件下的结冰可能性有助于设计低温保存方案。应用低温显微系统．本对快速冷冻的脐带血干细胞的结冰现象进行了研究。在没有低温保护剂时,胞内出现冰晶温度范围为-4℃— -13℃,在有10％二甲亚砜做低温保护剂时,胞内出现冰晶温度范围为-27℃— -38℃。利用得到的实验数据,根据Toner提出的胞内冰晶形成模型,对有关参数进行了拟合。     

脐带血干细胞渗透特性实验研究

冷冻过程中水的输运直接影响生物材料低温保存的效果.对细胞渗透特性的测量将有助于低温保存方案的设计.本文采用渗透腔法,对脐带血干细胞的渗透性能或特性进行了实验研究.实验测得脐带血干细胞的不变体积比例为0.52土0.07,平均直径为9.9士1,0μm,25℃下对水的渗透系数为4.394×10-13m3/N.s,10℃下对水的渗透系数为1.256×10-13m3/N·s.根据Arrhemius关系式,得到渗透系数的活化能为58 6kJ/mol.文中将脐带血干细胞的这些性能数据与从其它文章得到的干细胞的类似性能数据进行了对比.     

低温保护剂加入/取出过程中细胞体积的极值

低温保护剂是细胞低温保存过程中必不可少的,其加入／取出过程受到细胞体积变形极限的限制．在两参数细胞渗透模型的基础上,得到了细胞在低温保护剂加入／取出过程中细胞内水体积和细胞体积极值的解析解,分析了低温保护剂的渗透性和初始浓度差对细胞体积极值的影响。     

脐带血干细胞的低温保存研究

脐带血干细胞在医学上具有广阔的应用前景.本文对其低温保存进行了理论和实验研究.在以5%和10%的二甲亚砜做低温保护剂时,实验得到干细胞分别在冷却速率为10℃/min和10.5℃/min时细胞具有最高的存活率,与理论预测的最佳冷却速率十分接近.