癌胚抗原启动子用于结直肠癌专一性自杀基因治疗(英文)

以癌胚抗原（ＣＥＡ）阳性人结直肠癌细胞株ＬｏＶｏ及ＣＥＡ阴性细胞株ＨｅＬａ为模型,进行了结直肠癌专一性自杀基因治疗研究。在ＣＡＴ分析验证了ｃｅａ启动子的细胞专一性的基础上,构建了在ｃｅａ基因启动子控制下表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因（ＣＤ）的真核表达质粒ｐＣＥＡＣＤ。转染ｐＣＥＡＣＤ的ＬｏＶｏ细胞对原药５－氟胞嘧啶（５ＦＣ）的敏感性提高了７５０倍,并存在着明显的旁杀伤效应;同样条件下,ＨｅＬａ细胞对５ＦＣ的敏感性仅提高７．５倍,且对低于血药安全浓度的５ＦＣ不敏感,显示在原药存在下,ｃｅａ启动子驱动自杀基因ＣＤ的表达使ＣＥＡ阳性的结直肠癌细胞获得了专一性杀伤。透射电镜及ＤＮＡ片段化分析证明,诱导细胞凋亡是ＣＤ／５ＦＣ自杀基因系统的作用机制之一。     

含CD自杀基因腺病毒载体的构建及其应用

构建了含ＣＭＶ启动子、大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ｃｄ）基因的复制缺陷型重组腺病毒载体（ＡｄＣＭＶＣＤ）。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ鉴定证实,ｃｄ基因已克隆进入ＡｄＣＭＶＣＤ,并在受染细胞中表达。经氯化铯密度梯度离心法纯化的病毒滴度达１×１０１５ｐｆｕ／Ｌ。经１００ｍ．ｏ．ｉ．的ＡｄＣＭＶＣＤ感染的ＨｅＬａ和Ｃ６细胞株在１００μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,细胞存活率＜２０％。同时也观察到ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统有很强的旁杀伤效应,将３．３％的ＡｄＣＭＶＣＤ受染细胞与９６．７％的野生型细胞混合,经５０μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,＞６０％的细胞被杀死。ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统的建立为肿瘤基因治疗的研究提供了新的手段。     

腺病毒载体介导CEA基因元件调控自杀基因治疗

构建以CEA启动子控制HSV-TK基因表达的复制缺陷型腺病毒载体(AdCEATK).纯化的重组腺病毒滴度达1×10¹²pfu/ml.CEA阴性的HeLa细胞感染AdCMVTK后对丙氧鸟苷(GCV)很敏感,而感染了AdCEATK后不被GCV杀伤.与此相反CEA阳性的LoVo细胞中AdCMVTK和AdCEATK都有很好的表达活性,说明CEA启动子有良好的细胞专一性.AdCEATK/GCV系统还有明显的旁杀伤效应.此载体将有助于实现对CEA阳性肿瘤的专一性自杀基因治疗.     

pppA2’p5’A2’p5’A保护病毒感染细胞的普遍性

pppA2’p5’A2’p5’A(简称2’-5’P_3A_3)是干扰素作用于细胞后诱导产生的物质。干扰素的作用机理很复杂,其中之一是2’-5’寡聚腺苷酸合成酶的活力增加,此酶以ATP为底物合成2’-5’P_3A_3及其同系物2’-5’P_3An。但2’-5’P_3A_3或2’-5’P_3A_n本身是否具有抗病毒作用,干扰素的抗病毒作用是否通过2’-5’P_3A_3或2’-5’P_3An而进行,这是一个很     

人类淋巴细胞干扰素的简易部分纯化方法

干扰素的纯化是一个重要的问题,对临床疗效与应用研究将有很大的推动作用。七十年代,特别是最近几年以来,干扰素的纯化研究取得了重大的进展,人的α及β型干扰素已基本上纯化了,但由于细胞(特别是人白细胞)来源困难以及单尾细胞培养产量受限制,故干扰素仍然供不应求。1975年Strander等发现一株“人类淋巴细胞”(Namalwa)     

大白鼠腹腔巨噬细胞2'-5'寡腺苷酸合成酶

干扰素(IFN)或干扰素诱导剂能激活巨噬细胞,提高巨噬细胞的吞噬活力。不同来源的巨噬细胞,在体外培养条件下,用pppA2′p5′A2′p5′A(2′-5′P_3A_3)短时间刺激之后,吞噬活力也明显提高。但这两种作用之间有何关系,目前仍不清楚。因为2′-5′P_3A_3是寡腺苷酸合成酶(Esi)利用ATP合成的寡聚腺苷酸中的一种(它     

人类淋巴细胞干扰素的简易部分纯化方法

干扰素的纯化是一个重要的问题,对临床疗效与应用研究将有很大的推动作用。七十年代,特别是最近几年以来,干扰素的纯化研究取得了重大的进展,人的α及β型干扰素已基本上纯化了,但由于细胞(特别是人白细胞)来源困难以及单层细胞培养产量受限制,故干扰素仍然供不应求。1975年Strander等发现一株“人类淋巴细胞”(Namalwa)可以诱导产生干扰素,因为它来源方便,又可连续传代及大规模悬浮培养,还可在无血     

携带mK5基因的重组腺病毒联合多西他赛对LNCaP细胞的体外抗癌作用探究

该文通过携带mK5基因的溶瘤腺病毒Onco~(Ad)-mK5联合多西他赛(docetaxel, DTX)处理前列腺癌细胞株LNCaP,以探究两者联合作用的体外抗癌效果。采用CCK-8法分别检测Onco~(Ad)mK5、docetaxel以及两者联合用药对LNCaP增殖的抑制作用;用显微镜分别观察Onco~(Ad)-mK5、多西他赛单独作用及两者联合作用引起的细胞形态学变化;利用Hoechst 33258染色、流式细胞术检测各处理组细胞的凋亡情况; Western blot检测E1A、m K5以及凋亡相关蛋白Caspase-8、XIAP、PARP的蛋白质表达水平;实时荧光定量PCR(Q-PCR)分析处理组细胞的血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA水平变化。结果表明:感染复数(multiplicity of infection, MOI)=4的溶瘤腺病毒Onco~(Ad)-mK5与5 nmol/L的docetaxel能够协同抑制LNCaP的生长,且两者联合处理组的细胞凋亡现象比单独作用的效果更明显,这一新的药物组合为前列腺癌的临床治疗提供了参考。     

人白细胞介素－2第20位残基局部空间结构稳定位对活性的影响

用寡核苷酸诱导的基因定位突变法,将人白细胞介素－２（ＩＬ－２）第２０位Ａｓｐ分别突变为Ａｒｇ、Ｌｙｓ．和Ａｓｎ,比较第２０位残基碱性基因对ＩＬ－２活力的影响,结果２０Ａｓｐ突变为碱性残基时,ＩＬ－２活性急剧下降,但突变为Ａｒｇ时所导致的活性下降较突变为Ｌｙｓ严重３０００倍以上,从空间结构变化上对这２个碱性残基造成的如此大的活性差异进行了分析,发现２０Ａｒｇ突变后对。１２１Ｔｒｐ的微环境有极为显著的影响。结果提示２０Ａｓｐ在与β亚基作用的同时,其局部空间结构的稳定对维持ＩＬ－２的生物学活性也有重要作用。     

白细胞介素－2的中枢镇痛作用

本实验采用侧脑室给药,以钾离子透入法引起大鼠甩尾反应为指标,测定动物的痛阈,发现白细胞介素－２（ＩＬ－２）具有显著提高大鼠痛阈的作用,此作用能被抗ＩＬ－２单克隆抗体所阻断。纳洛酮能反转ＩＬ－２的镇痛作用,表明其作用机理与阿片受体有关。