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1.
利用细小RNA 病毒属脑炎和心肌炎病毒(EMCV)的内核糖体进入位点(IRES)元件构建了人肿瘤坏死因子受体75 基因(hTR75) 和新霉素抗性基因(neoR)的双顺反子表达载体, 通过电脉冲转染BHK21 细胞, 筛选出分别和同时稳定过量表达两种hTNF受体的细胞株。这些细胞在mRNA 和蛋白质水平均可检测到hTR75 的表达。利用野生型和具有两种受体选择性结合活性的hTNFα突变体对这些细胞株进行测定, 发现过量表达的hTR75 可以独立地介导hTNFα对BHK21 细胞的细胞毒性, 而hTR55 的存在并不能显著增强这种作用。上述结果为进一步阐明TR75 的功能以及两种受体间的相互作用提供了一条新的途径。  相似文献   
2.
我的回顾     
王德宝教授是我国老一辈生物化学家,中国科学院学部委员学部主席团成员。在核酸研究中,成绩卓著,在培养人才中,也付出了心血。他在上海生化所建立了我国第一个核酸研究组,在他领导下,完成了酵母丙氨酸tRNA的人工合成,享有国际声誉。他在国内外重要杂志上发表论文百余篇。  相似文献   
3.
特异亲和活性蓝染料的小分子RNA的SELEX筛选   总被引:5,自引:1,他引:4  
化学合成含有20 个核苷酸随机序列, 长度为73 个核苷酸的单链 D N A 随机库; P C R 扩增和双链化后, T7 R N A 聚合酶体外转录得到单链 R N A 随机库。以活性蓝染料凝胶柱为筛选介质, 体外进化方法筛选特异亲和活性蓝染料的 R N A 分子。经8 轮循环筛选, R N A 群体亲和染料的比例从小于0 .03 % 上升至22 .4 % 。克隆筛选出 R N A 序列后, 测定了30 个克隆的序列, 得到三类 R N A 分子。经二级结构分析和活性蓝染料特异亲和能力测试,发现 R N A 特异亲和活性蓝染料的主要结构因素是 R N A 形成的双链结构  相似文献   
4.
含PR启动子的原核高效表达载体的构建及应用   总被引:2,自引:0,他引:2  
组建了一个仅含PR启动子的原核高效表达载体pRC,它同时含有cⅠ调控基因、多酶切位点和两个强的转录终止序列.现已成功地用于表达重组人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)、重组人白细胞介素-3(hIL-3)和抗溶菌酶(HEL)抗体Fd基因,表达量均占菌体总蛋白的36%以上.同时还研究了不同的宿主菌和原核增强子序列等因素对PR启动子载体表达的影响.此外,还比较了分别以PR、PL或PRPL作为启动子时表达hTNF-α的情况,结果表明,单用PR或PL启动子可获得与使用PRPL串联启动子一样的高效表达.  相似文献   
5.
RNA研究的一些新进展——RNA生物功能的多样性   总被引:1,自引:0,他引:1  
近几年发现某些RNA具有酶(Ribozyme)的催化功能。这不仅改变了酶都是蛋白质的传统观念,而且认为在远古时期RNA可能就具有自我复制的活力,因而RNA是先于DNA和蛋白质的最早出现的生物大分子。真核细胞mRNA的剪接机制比较复杂,至今还远没有搞清楚。现在知道,必须通过一个由2′,5′磷酸二酯键形成的“套环”结构,另外还有一类核蛋白体(snRNP)参与反应。反义RNA通过其碱基序列与相关的mRNA形成互补碱基对的方式影响mRNA的翻译。tRNA是蛋白质生物合成中必不可少的一类RNA。此外,它还有其它重要的生物功能。  相似文献   
6.
To study the expression activity of various vectors containing anti-caspase-3 ribozyme cassettesin vivo, and to further study the role of caspas-3 in the apoptotic pathway, we constructed anti-caspase-3 hammerhead ribozyme embedded into the human snRNA U6, and detected the activity of the ribozymein vitro andin vivo. Meanwhile we compared it with the self-cleaving hammerhead ribozymes that we previously studied, and with the general ribozyme, cloned into RNA polymerase II expression systems. The results showed that the three ribozymes, p1.5RZ107, pRZ107 and pU6RZ107 had the correct structure, and that they could cleave caspase-3 mRNA exactly to produce two fragments: 143nt/553nt. p1.5RZ107 has the highest cleavage efficiencyin vitro, almost 80%. However, the U6 chimeric ribozyme, pU6RZ107, has the highest cleavage activityin vivo, almost to 65%, though it has lower cleavage activityin vitro. The cleavage results demonstrated that the pU6RZ107, the U6 chimeric ribozyme, could more efficiently express and downregulate the level of caspase-3in vivo, and the ribozyme could provide an alternative approach to the research into the mechanism of apoptosis and human gene therapy also.  相似文献   
7.
tRNA是古老而具有多功能的小分子,具有复杂的倒“L”型高级结构。L形的tRNA结构为二维对称,因此可以将它分解为对应于双链螺旋结构的两部分,分别毗邻T环和反密码环。tRNA的主要功能是活化专一的氨基酸并携带氨基酸参与蛋白质生物合成。研究发现,有一些模拟tRNA结构特征的类似物,可参与其它生物功能。随着人们对tRNA结构和功能认识的逐渐积累,已经可以设计一些非天然的tRNA类似物。对这些类似物的研究,揭示了生物体复制、翻译和代谢途径之间的联系,为生命进化过程的探索提供了有力的工具,并导致一些生物技术的应…  相似文献   
8.
报道重组点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶(简称apPEP)的基因工程下游工艺研究。工程菌株E.coli BL21/pKKH\|PEP表达产物apPEP为可溶性蛋白,在NBS BioFlo 3000型5L自控发酵罐中经14h培养每升发酵液可达到22.5g干重菌体,含apPEP 3.0g左右。发酵菌体经超声破碎、硫酸铵沉淀后,依次经Sephadex G-25、High performance Q sepharose FF(HP\|Q)、Phenyl separose 6 FF柱层析分离纯化,每升发酵产物最终可得0.86g纯度达96%的重组apPEP,比活力达到65.5u/mg,整个纯化工艺的蛋白回收率为8.2%,活力回收率为24.4%。纯化的apPEP经电喷雾质谱测定分子量为76464±30D,N端氨基酸序列与基因序列推导的一致。等电点为pI6.0左右。与Aeromonas hydrophila来源的PEP(pI=5.5)相近。  相似文献   
9.
中国共产党党员、九三学社社员、著名生物化学家、中国科学院院士、中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所研究员 ,全国第四、五届人大代表 ,全国第六、七届政协委员 ,中国科学院学部前主席团成员王德宝教授 ,因病医治无效 ,于 2 0 0 2年 11月 1日在上海逝世 ,享年 84岁。王德宝教授是一位杰出的科学家 ,是我国在世界上首次人工全合成酵母丙氨酸转移核糖核酸研究工作具体的业务领导者 ,这项成果是我国继在世界上首次人工全合成结晶牛胰岛素后 ,在生命科学史上竖起的又一座里程碑。王德宝教授热爱祖国 ,淡泊名利 ,知识渊博…  相似文献   
10.
利用酰胺化基团与羧基在一定的缓冲液中表现出不同的带电性和疏水性,建立了以毛细管电泳为基础的多肽C端酰胺化结构分析和酰胺化酶活性测定的新方法。  相似文献   
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