一株单环刺螠肠道电活性希瓦氏菌Shewanella marisflavi的生理学特性

【目的】探究以单环刺螠为代表的海洋环节动物肠道中电活性微生物的存在情况,并表征其生理学及电化学特性。【方法】采用平板划线法、16S rRNA基因测序技术分离纯化菌株并进行菌株鉴定。利用扫描电镜表征菌株形态。高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测其无氧呼吸底物氧化及产物生成情况。通过菲啰嗪和甲醛肟显色法检测菌株的异化Fe(Ⅲ)和Mn(Ⅳ)还原能力。借助单室微生物燃料电池(single-chamber microbial fuel cells,SCMFCs)及循环伏安法检测菌株的电化学活性。【结果】从单环刺螠肠道中成功分离得到了一株兼性厌氧菌,16S rRNA基因序列比对结果显示该菌株与Shewanellamarisflavi的相似性达99.93%。扫描电镜结果显示其为杆状,长约2μm,宽度约为0.5μm。HPLC检测结果表明,该菌能以乳酸钠为电子供体,富马酸为电子受体进行无氧呼吸并伴随代谢产物乙酸钠和琥珀酸产生。菲啰嗪和甲醛肟显色法结果证实,该菌具有异化铁、锰还原能力。单室MFCs检测结果发现该菌的最大电流输出密度为146 mA/m2,循环伏安法检测结果显示该菌在0.14 V和–0.51 V位置处分别存在氧化峰和还原峰。【结论】本研究结果证实以单环刺螠为代表的海洋环节动物肠道中存在以Shewanella marisflavi UU-3-2为代表的电活性微生物。表明电化学活性微生物在海洋环节动物肠道中广泛存在。     

鱼类对晶体氨基酸利用的研究进展

随着鱼粉供应的紧张和价格的上扬,有关植物蛋白源取代鱼粉的研究也逐渐增加,与鱼粉等优质动物蛋白源相比,植物蛋白源通常表现为某些必需氨基酸缺乏或不足,如赖氨酸、蛋氨酸等,因而向饲料中添加晶体氨基酸成为解决这一问题的有效途径.但是在水产饲料中添加晶体氨基酸的作用效果,目前尚无定论,研究和生产中对氨基酸的使用也存在许多模糊认识.本文就水产饲料中氨基酸的研究现状作一综述,为晶体氨基酸在生产中的合理使用提供指导,为鱼类的氨基酸营养研究提供思路.     

一种改良的逼尿肌急性分离方法及离子通道电流检测

目的:建立一种稳定的适合膜片钳技术的逼尿肌细胞急性酶分离方法,为排尿相关障碍性疾病的研究提供必要的技术平台.方法:采用H型胶原酶和木瓜蛋白酶相混合的鸡尾酒酶液对新鲜离体的大鼠膀胱逼尿肌条在37℃条件下振荡消化,α-actin免疫荧光染色对分离并培养的原代细胞进行鉴定,在膜片钳工作台上分别对其进行L型钙电流和BKca钾电流的全细胞记录.结果:可获得大量的单个逼尿肌细胞.经过免疫荧光染色证实为平滑肌细胞.分离细胞活性良好,在膜片钳实验系统上可记录到多种通道电流.结论:建立了一种操作简单、成功率高、活性好的逼尿肌细胞急性酶分离方法并成功应用于膜片钳技术.     

辣椒种子的超干研究

辣椒种子含水量(MC)降至5％以下,能显著提高抗老化劣变的能力。在同等老化处理(50C15d)后,对照种子(MC=7．5％)发芽势已大幅度下降,而超干种子(MC=4．1％～1．4％)的发芽势与未老化种子相同。超干种子脱氢酶活性明显高于同等老化条件下的对照种子,而丙二醛的含量则显著低于对照种子。电导率测定结果表明,超干种子细胞膜系统的完整性良好。     

人同源盒基因NKX3.1对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用

构建人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP 中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3.1基因全长编码片段,将NKX3.1 cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1（+）中; 将pcDNA3.1-NKX3.1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP 细胞,用RT-PCR和Western印迹检测NKX3.1 cDNA在转录水平和蛋白水平的表达;绘制细胞生长曲线,观察NKX3.1对前列腺癌细胞增殖的抑制作用;用DNA/ladder和流式细胞术检测NKX3.1对前列腺癌细胞凋亡的影响,进一步用RT PCR检测凋亡相关基因caspase3、caspase8、caspase9、Apaf1、survivin和Bcl2表达的变化.人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1-NKX3.1经酶切及测序鉴定正确. pcDNA3.1-NKX3.1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和Western印迹证明能有效表达NKX3.1.生长曲线显示,前列腺癌细胞转染NKX3.1 cDNA后细胞增殖受到抑制;前列腺癌细胞转染NKX3.1 cDNA 48 h后,DNA电泳呈现具有凋亡特征的DNA ladder;流式细胞术检测出现明显凋亡峰;RT-PCR检测凋亡相关基因.结果显示,caspase3、caspase8、caspase9基因表达明显增加,Bcl2基因表达明显减少.本研究成功构建了真核表达载体pcDNA3.1 NKX3.1, 转染PC3和LNCaP细胞后能有效表达,并对细胞具有诱导凋亡作用     

五龙鹅MHC ClassⅠ基因克隆及同源建模研究

主要组织相容性复合体(MHC)与动物机体对外源性抗原的免疫应答之间存在关联。从GenBank/DDBJ/EMBL基因库中读取鸡、其他鸟类、爬行类和哺乳类的MHC ClassⅠ基因进行序列分析设计引物, 使用LA-PCR法从五龙鹅的基因组中克隆了MHC ClassⅠ基因序列(DNA序列和mRNA序列GenBank登录号分别为: AM114925和AM114924), 并分析其基因组结构。运用生物信息学技术对测序结果进行分析显示: 基因组DNA由8个外显子和7个内含子组成, 与鸡基因序列同源率为60.8%~64.1%, 与人的同源率为42.9%。分子进化树进一步揭示了五龙鹅与鸡、其他鸟类、爬行类、哺乳类以及人类的进化关系, 同源建模分析发现该基因由氨基末端结构域和羧基末端结构域构成。     

鹧鸪胃的动脉分布

为了研究鹧鸪腺胃和肌胃的动脉分布状况,本实验用血管铸型法对10只鹧鸪胃的动脉分支和分布情况进行了详细的解剖观察。结果表明,鹧鸪的腺胃由腺胃背侧动脉和腺胃腹侧动脉供应营养,肌胃由胃左动脉和胃右动脉供应,肌胃背侧动脉是胃右动脉的一末端分支,肌胃腹侧动脉由胃左动脉分出。     

两种动物血巧克力平板分离流感嗜血杆菌效果评价

目的比较羊血、马血巧克力平板痰培养流感嗜血杆菌的检出率和生长情况。方法将送检的痰标本及流感嗜血杆菌标准菌株ATCC10211分别接种于羊血、马血巧克力平板上,置烛缸中,36气培养24h,比较流感嗜血杆菌检出率及其生长情况。结果（1）2种巧克力平板痰培养流感嗜血杆菌的检出率分别为8％、34．5％。（2）标准菌株ATCC10211在马血巧克力平板上生长良好,菌落直径0．5-1．0mm,而在羊血巧克力平板上生长差,菌落大小如“沙粒”,肉眼难见。结论痰培养流感嗜血杆菌使用马血巧克力平板效果优于羊血巧克力平板。     

TNF—a在糖尿病合并牙周炎大鼠模型中的表达及意义

目的：建立糖尿病合并牙周炎大鼠模型,观察比较近牙槽嵴区牙周膜内肿瘤坏死因子-a（TNF-a）的含量,探讨高血糖对牙周组织炎症程度的影响。方法：糖尿病大鼠（STZ组）模型采用链脲佐菌素一次性腹腔注射制备,单纯牙周炎组州组）注射同剂量的枸橼酸钠缓冲液。成模且稳定后（4周）,两组都采用大鼠牙颈部丝线结扎的方法诱导牙周炎模型,于结扎后1周,2周,3周处死大鼠,采用组织学方法,免疫组织化学结合MATLAB7．0．1图像灰度定量分析法,研究近牙槽嵴区牙周膜中TNF-a水平的变化及牙周组织炎症的进展程度。结果：N组与STZ组除0周外各时间点两组之间比较有显著性差异（P〈0．001）;N组内各时间点每两组之间比较有统计学差别（P〈0．05）;STZ组内各时间点每两组之间比较有统计学差别（P〈0．05）。随时间的增加,各组大鼠的炎症程度增加,TNF—a的表达水平增加,STZ组的病变进展程度显著重于N组。结论：一次性腹腔注射STZ＋牙颈部丝线结扎可成功建立实验性糖尿病大鼠的牙周炎模型。高血糖浓度使糖尿病大鼠牙槽骨TNF-a的表达水平增加,降低了机体的损伤一修复能力,牙周组织的炎症进一步加重。