一种改良的逼尿肌急性分离方法及离子通道电流检测

目的:建立一种稳定的适合膜片钳技术的逼尿肌细胞急性酶分离方法,为排尿相关障碍性疾病的研究提供必要的技术平台.方法:采用H型胶原酶和木瓜蛋白酶相混合的鸡尾酒酶液对新鲜离体的大鼠膀胱逼尿肌条在37℃条件下振荡消化,α-actin免疫荧光染色对分离并培养的原代细胞进行鉴定,在膜片钳工作台上分别对其进行L型钙电流和BKca钾电流的全细胞记录.结果:可获得大量的单个逼尿肌细胞.经过免疫荧光染色证实为平滑肌细胞.分离细胞活性良好,在膜片钳实验系统上可记录到多种通道电流.结论:建立了一种操作简单、成功率高、活性好的逼尿肌细胞急性酶分离方法并成功应用于膜片钳技术.     

膀胱ICC样细胞研究进展

Cajal间质细胞(ICC)是分布在消化道自主神经末梢和平滑肌之间的一类特殊细胞,是胃肠道慢波的起搏细胞,是胃肠运动的pacemaker,它推进电活动的传播以及介导神经信号传递,控制胃肠道自主神经运动功能.近年来在人和动物膀耽中已证实存在ICC样细胞,其功能研究是最近研究的热点.ICC样细胞证实具有和胃肠ICC一样的藕联及神经调节功能的结构基础和功能特点,其是否具有起搏特性值得期待.     

成年大鼠阴茎海绵体cajal间质细胞的分离、培养与鉴定

目的:探索成年大鼠阴茎海绵体内cajal间质细胞(ICCs)的分离、培养和鉴定方法,为进一步研究其在阴茎海绵体中的作用提供条件.方法:取大鼠阴茎海绵体组织,采用酶消化法分离细胞,差速贴壁法相对纯化ICCs,将纯化后的细胞悬液接种于DMEM培养基中进行培养.通过倒置显微镜下观察细胞贴壁和形态,并用c-Kit特异性抗体标记细胞,免疫荧光法鉴定ICCs.结果:培养24小时后ICCs贴壁良好,细胞形态学观察显示ICCs呈纺锤状,有两个或多的突起,免疫荧光检验可见ICCs呈c-Kit抗体染色阳性.结果:用酶消化法可成功分离和培养大鼠阴茎海绵体ICCs,大鼠海绵体组织内ICCs的生理学功能有待进一步研究.     

妊娠合并上尿路结石致肾绞痛的临床诊治策略

目的:探讨妊娠期上尿路结石致肾绞痛的诊断和治疗方法.方法:对103例妊娠期上尿路结石致肾绞痛患者的临床资料及诊治过程进行分析,结合文献讨论本病的临床特点及诊治方法.结果:92例B型超声检查发现结石,11例仅发现患侧肾脏积水.所有患者均先行保守治疗;期间14例行输尿管置管术,7例行输尿管镜下气压弹道碎石术,2例行经皮肾穿刺造瘘术;101例患者顺利足月分娩;2例终止妊娠,孕妇平安.结论:妊娠期上尿路结石的诊断首选超声检查.对于有症状发作者保守治疗是主要治疗方法.治疗用药物应注意保护胎儿.对于顽固性肾绞痛患者,外科治疗首选逆行插管引流尿液,必要时可选择输尿管镜检查或经皮肾穿刺.开放手术为最后的治疗手段.     

超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN)研究进展

HCN是超极化激活环核苷酸门控阳离子通道,其激活后产生If/Ih电流,能被ZD7288和Cs+特异性阻断.该通道有4个亚型,具有稳定细胞膜电位、参与心脏和神经节律调节、参与树突整合,以及调节神经递质释放等生理功能.近期实验中发现豚鼠膀胱ICC上存在Ih电流,其功能特点值得进一步研究和探讨.     

膀胱平滑肌细胞自发性钙活动传递的在体观察和分析

目的:观察离体活膀胱肌条铺片中平滑肌细胞自发性钙活动,并分析平滑肌细胞自发性钙活动的特征.方法:制作离体膀胱肌条铺片,Physiological saline生理液灌流保持肌条铺片活性.待肌条自发性收缩活动出现后,Fluo-4负载肌条铺片激光扫描共聚焦显微镜观察并高速扫描记录平滑肌细胞自发性钙活动,随后利用Fluoview软件分析平滑肌细胞自发性钙活动肌束内纵向、横向及肌束间的传递情况.结果:成功记录到离体活膀胱肌条铺片中平滑肌细胞的节律性自发性钙活动.钙活动在肌束内纵向传递几乎无时间延迟,但在肌束内横向传递有一定的时间延迟;在相邻的膀胱平滑肌束间也记录到钙活动的传递.结论:平滑肌细胞的自发性钙活动起源于肌束的一侧,随后传导到肌束的另一侧;平滑肌细胞钙活动纵向传递和横向传递的途径和机制可能不同;膀胱平滑肌束之间的钙活动传递可能是通过ICCs细胞完成.     

T型钙通道在逼尿肌过度活动发病中作用的实验研究

目的:研究T型钙通道在逼尿肌过度活动(detrusor overactivity,DO)大鼠模型中的改变并探索其在发病机制中的作用.方法:部分结扎雌性大鼠近端尿道制作DO动物模型,假手术组作为对照;6周后使用尿流动力学技术膀胱测压筛选实验动物;应用钙荧光探针Fluo-4比较模型和对照大鼠培养逼尿肌静息钙浓度,观察比较加入T型钙通道阻断剂Mibefradil后细胞静息钙浓度的变化;利用穿孔膜片钳技术比较模型和对照组大鼠急性分离逼尿肌细胞中T型钙通道密度.结果:膀胱测压中出现非排尿收缩的为DO大鼠.结果表明近端尿道部分结扎可成功制作DO动物模型;钙探针激光共聚焦实验表明当T型钙通道被抑制后,DO、对照逼尿肌细胞的静息钙荧光强度均显著下降,其中自身前后荧光变化率DO组显著大于正常组;穿孔膜片钳结果表明DO大鼠逼尿肌中T型钙通道的密度显著大于对照.结论:T型钙通道活动在DO动物中显著上调,这可能是导致该疾病的重要分子机制.