白藜芦醇促进老年大鼠缺血后肢侧支血管生长

目的 本研究旨在探讨白藜芦醇对老年大鼠缺血后肢侧支血管生长的影响。方法 采用老年大鼠股动脉结扎建立侧支血管生长模型,10 mg/kg白藜芦醇处理,免疫荧光染色和HE染色观察大鼠后肢侧支血管生长情况。结果 HE染色显示,股动脉结扎后给予白藜芦醇处理使侧支血管管壁增厚,管腔增大;免疫荧光染色显示,股动脉结扎后给予白藜芦醇处理使侧支血管管壁增殖细胞（Ki-67阳性细胞）增多,eNOS表达增强。结论 白藜芦醇可促进老年大鼠缺血后肢侧支血管的生长。     

不同月龄大鼠空肠粘膜上皮细胞的形态、增殖及凋亡

为研究雄性大鼠空肠在发生、发育和衰老过程中上皮细胞增殖与凋亡形态学的变化,本实验采用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫细胞化学染色、原位末端标记(TUNEL)法检测了不同生长发育阶段SD大鼠空肠绒毛粘膜上皮及小肠腺上皮的细胞增殖、凋亡的变化情况,并统计测量了不同发育阶段大鼠空肠绒毛的高度、肌层厚度及绒毛杯形细胞、肠腺杯形细胞的数量变化。观察到大鼠空肠肠腺隐窝增殖细胞的阳性着色表达从出生后开始增强,到3月龄时达最高峰,12月龄时增殖细胞阳性染色又减弱;凋亡细胞主要分布于固有层,凋亡阳性细胞数在3月龄最多;大鼠空肠绒毛的高度从初生后开始增加,到3月龄达顶峰,而后开始变矮;空肠肌层在3周龄、12月龄较厚;杯形细胞数量于生后3周迅速增长,不同发育阶段的大鼠空肠肠腺隐窝的杯形细胞数量与年龄呈正相关。     

ERK激活对SDF-1引起的大鼠海马神经元GABA分泌抑制的影响

目的:观察细胞外调节激酶(ERK)信号通路激活对基质细胞衍生因子(SDF-1)引起离体培养的大鼠海马神经元γ-氨基丁酸(GABA)分泌的影响。方法:新生SD大鼠海马神经元离体培养,Western blot法观察ERK1/2信号通路的磷酸化水平;ELISA法和RT-PCR技术检测ERK1/2特异性阻断剂PD98059作用于离体培养的海马神经元后GABA分泌的改变;谷氨酸脱羧酶(GAD65/67)和γ-氨基丁酸转运体(GAT)的蛋白表达量及GAD65和GAT-1 mRNA表达水平。结果:SDF-1作用于海马神经元可引起ERK1/2磷酸化水平明显升高,同时加用CXCR4受体阻断剂AMD3100,可阻断SDF1引起的ERK1/2激活;SDF-1可明显抑制离体培养的海马神经元GABA的分泌,同时加用ERK1/2特异性抑制剂PD98059,可部分逆转SDF-1对GABA分泌的抑制作用;SDF-1作用于离体培养的海马神经元,可抑制谷氨酸脱羧酶GAD65和GABA转运体GAT-1 mRNA的生成;ERK抑制剂PD98059可有效翻转SDF-1的作用。Western blot结果发现SDF-1可抑制海马神经元GAT-1和GAD65/67蛋白的表达,加用ERK1/2抑制剂可部分恢复GAT-1和GAD65/67蛋白合成。结论:SDF1作用于离体培养的海马神经元CXCR4,通过激活ERK1/2信号通路进而抑制GAD蛋白表达,可能是其介导GABA分泌抑制的通路之一。     

交感神经对青年和老龄小鼠肠道上皮细胞增殖和抗氧化功能的影响

目的 探讨交感神经对青年和老龄小鼠小肠上皮细胞增殖的影响。方法 腹腔注射6-羟多巴胺(6-OHDA)阻断交感神经,用石蜡组织切片和HE染色检测绒毛长度、隐窝深度及两者比值,用免疫组织化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)在肠腺中的表达,用试剂盒检测总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)等指标。结果 化学性阻断交感神经,在3月龄和18月龄鼠中小肠绒毛长度、V/C比值、小肠肠上皮细胞PCNA表达水平均下降显著,小肠SOD、T-AOC降低,MDA升高。结论 交感神经均能促进3月龄和18月龄鼠小肠上皮细胞的增殖,其中对3月龄小鼠的作用大于18月龄小鼠。     

甘珀酸对大鼠大脑中动脉缺血再灌注后星形胶质细胞增殖及活化的影响

目的探讨缝隙连接阻断剂甘珀酸对大鼠大脑中动脉(Middle Cerebral Artery,MCA)缺血再灌注模型半暗带区星形胶质细胞增殖及活化的影响。方法成年雄性SD大鼠80只,随机分为生理盐水组(n=35)、CBX干预组(n=35)和假手术组(n=10)。CBX干预组术前1h右侧侧脑室注射CBX,生理盐水组右侧侧脑室注射生理盐水,建立标准大脑中动脉梗死模型,缺血1h后再灌注6h、1d、3d、7d,免疫荧光及免疫印迹的方法观察GFAP,Ki67,PCNA的表达情况。结果与对照组比较,CBX干预组大鼠术后半暗带区GFAP的表达量减少,Ki67与GFAP双阳性细胞减少(P0.05),PCNA的表达量没有明显的变化。结论甘珀酸可以抑制缺血引起的星形胶质细胞的活化增殖。     

大鼠心包组织存在C-kit、Sca-1和Nanog阳性细胞

目的观察大鼠心包组织中C-kit,Sca-1,Nanog阳性细胞的表达及分布,为治疗心肌损伤寻找新的干细胞来源。方法取大鼠新鲜心包,利用石蜡切片和铺片技术,HE和Masson染色,观察其组织结构;利用免疫组织化学染色技术,观察C-kit、Scal-1、Nanog阳性细胞在心包组织中的表达;利用免疫荧光双标技术观察C-kit、Scal-1、Nanog之间的共表达情况;利用免疫印迹法检测心包组织中C-kit、Scal-1、Nanog的表达。结果大鼠心包组织中存在大量散在的小而圆或椭圆形细胞,广泛分布于成纤维细胞之间和小血管周围。免疫组织化学染色显示,这些细胞分别阳性表达C-kit、Sca-1、Nanog。免疫荧光双标染色显示,部分细胞共表达C-kit和scal-1两种表面抗原,部分细胞共表达scal-1和Nanog表面抗原,而C-kit与Nanog共表达于血管弹力膜。结论大鼠心包组织中存在C-kit、Scal-1和Nanog阳性细胞,一种细胞可表达两种表面标记。     

不同强度电针对PCPA失眠大鼠下丘脑γ-氨基丁酸及受体的影响

通过观察不同强度电针对睡眠节律紊乱大鼠下丘脑γ-氨基丁酸(GABA)及受体(GABRA1)的影响,初步探讨针灸治疗失眠的作用机制及不同强度电针的效应差异.用免疫组织化学技术观察失眠大鼠下丘脑GABA阳性细胞的表达情况,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测失眠大鼠下丘脑GABRA1 mRNA表达改变.研究发现,对氯苯丙氨酸(PCPA)化失眠大鼠下丘脑GABA阳性细胞染色较浅,且表达量减少,GABRA1mRNA表达明显降低(P＜0.01);经电针治疗5 d后,失眠大鼠下丘脑GABA阳性神经元染色较深,表达量较多,GABRA1 mRNA表达显著升高(P＜0.01),且2 V电针刺激作用比1 V电针刺激更为明显.结果表明电针可增加失眠大鼠下丘脑GABA及受体的表达,调节睡眠-觉醒周期,发挥镇静催眠作用,且2 V电针刺激效果优于1 V电针刺激.     

小鼠胸腺髓质上皮细胞系体内诱导胸腺细胞功能成熟

来源于BALB/c小鼠 (H-2^d)胸腺的髓质上皮细胞系MTEC1细胞表达H-2^d和I -A^d 分子 .为研究上皮细胞诱导胸腺细胞阳性选择及功能分化的能力 ,首先用γ 线照射C5 7BL/6J小鼠(H-2^d) ,再经静脉注射 (H-2^b×d)F1代骨髓细胞 ,制备 H-2^b×d→H-2^b)嵌合体 ,然后将MTEC1细胞注射到嵌合体胸腺内 .注射后 2个月 ,经HE染色显示 ,MTEC1细胞在嵌合体小鼠胸腺被膜下皮质区成簇存在 ,体外免疫学试验发现 ,嵌合体小鼠脾细胞含有抗原特异性H-2^d识别限制的杀伤T细胞 (CTL) ,IL -2产生T细胞及增殖应答T细胞 .在MLR试验中 ,嵌合体小鼠脾细胞显示对H-2^d 同种异型抗原的明显耐受 .从而证明MTEC1髓质上皮细胞能在胸腺微环境内诱导H-2^d识别限制的对特异抗原应答的T细胞发育及功能成熟 .由此提出在胸腺髓质区进行“2次胸腺选择”的假说 ,并讨论了其意义 .     

促肾上腺皮质激素引起大鼠肾上腺c-fos原癌基因表达的免疫组化研究

采用冰冻切片及免疫组化法观察了注射促肾上腺皮质激素(ACTH,75U/kg)、胰岛素及正常对照大鼠中肾上腺各部分c-fos原癌基因表达产物Fos蛋白的出现和分布特点。结果表明注射ACTH后90min,大鼠肾上腺皮质网状带出现Fos蛋白染色阳性细胞,阳性染色物集中于细胞核,肾上腺皮质束状带仅见少数Fos蛋白染色阳性细胞,肾上腺髓质则未见Fos蛋白染色阳性细胞。与注射ACTH相反,注射胰岛素引起肾上腺髓质出现Fos蛋白染色阳性细胞。注射生理盐水对照组动物肾上腺皮质和髓质均未见Fos蛋白染色阳性细胞。上述结果表明,注射ACTH或胰岛素可以引起大鼠肾上腺不同部位c-fos原癌基因表达。     

细胞外基质对培养咽癌细胞增殖及p53、PCNA基因表达的影响

为探讨细胞外基质(ECM)对咽癌细胞生物学行为的影响,将两种咽癌细胞在ECM成分Ⅰ型胶原胶上进行细胞培养,通过免疫荧光染色及Western blot法对细胞增殖及p53、PCNA基因表达进行了研究。在Ⅰ型胶原上培养的细胞增殖活跃,并形成鳞状上皮样结构。PCNA表达量增加,p53表达阳性细胞主要分布于表层细胞,而基底层细胞表达少。结果说明ECM成分对咽癌细胞增殖及基因表达有调节作用。     

ABRA在不同年龄大鼠腰段脊髓中的表达变化

目的检测Actin binding Rho activator（ABRA）在不同年龄大鼠腰段脊髓中的表达变化。方法采用Western blot定量检测不同年龄大鼠腰段脊髓中ABRA蛋白水平表达变化,采用免疫荧光染色显示不同年龄大鼠腰髓中ABRA细胞定位。结果Western blot显示ABRA在新生鼠腰段脊髓中表达显著高于成年鼠及老年鼠。免疫荧光染色显示ABRA广泛表达于神经元的胞核、胞浆和突起,在腰髓前角,与前角运动神经元存在共定位,在腰髓后角,与小的NeuN阳性感觉神经元存在共定位。腰髓前角、后角的阳性细胞计数均显示新生鼠ABRA＋NeuN双阳性细胞占总ABRA阳性细胞百分比显著低于成年鼠及老年鼠。结论ABRA广泛表达于腰髓中的神经元,ABRA在新生鼠腰髓中表达最强,随年龄的增长呈现明显的时相变化,提示ABRA可能参与了腰髓中神经元的发育和成熟。     

链脲佐菌素糖尿病小鼠睾丸内生精细胞减少与PCNA和Ki67表达降低

目的通过检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Ki67在正常及糖尿病小鼠睾丸组织中表达的差异,探讨糖尿病对生精细胞增殖的影响。方法 30只正常雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组(10只)和糖尿病组(20只)。采用腹腔注射链脲佐菌素的方法建立糖尿病小鼠模型,对照组注射相同体积的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液。造模成功3周后处死动物,取睾丸组织,常规固定、石蜡包埋、切片HE染色观察睾丸组织的形态学变化;免疫组织化学SP法检测PCNA及Ki67在睾丸组织中的表达;图像分析技术分析组织中PCNA及Ki67免疫组织化学表达水平。结果 HE染色显示,糖尿病小鼠睾丸内处于精子发生前半期的生精小管内生精细胞排列疏松,细胞层数偏少,附睾管内精子密度相对较低;免疫组织化学染色显示,PCNA和Ki67在糖尿病小鼠睾丸生精小管中的表达均明显降低。结论高糖可能通过降低生精细胞的增殖进而影响睾丸精子的发生。     

大鼠附睾上皮细胞的原代培养及纯化鉴定

目的建立大鼠附睾上皮细胞原代培养及纯化方法。方法利用酶消化法和组织块法对大鼠附睾上皮细胞进行原代培养,然后用胰酶两步消化法进一步纯化附睾上皮细胞,最后分别利用免疫荧光和免疫组织化学染色对原代培养的细胞及相关蛋白表达情况进行鉴定。结果酶消化法较组织块法得到的附睾上皮细胞纯度高,免疫荧光染色结果证明所得附睾上皮细胞主要是主细胞,免疫组织化学结果证明培养的附睾上皮细胞中有雄激素受体和雌激素受体α的表达。结论利用酶消化法对大鼠附睾上皮细胞进行体外培养,方法简单易行,成功率高。     

结直肠癌组织RPN11与Ki67的表达及其临床病理学意义

目的观察去泛素化酶RPN11和增殖相关核标记物Ki67在结直肠癌组织中的表达,研究其与结直肠癌肿瘤细胞增殖的相关性及与结直肠癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SABC法检测56例结直癌组织及20例癌旁正常组织中的RPN11和Ki67表达,结合临床病理学资料进行统计分析。结果免疫组织化学染色显示:RPN11及Ki67在结直肠癌组织的阳性表达率明显高于正常结直肠组织;RPN11和Ki67的表达均与肿瘤分化程度、TNM分期、转移有关,而与性别、年龄无明显相关;RPN11与Ki67的表达呈正相关。结论RPN11和Ki67可能共同参与结直肠癌肿瘤细胞的增殖调控,并促进结直肠癌的发生发展以及浸润转移。     

小鼠角膜上皮祖细胞系TKE2的表型研究

目的：观察小鼠角膜上皮祖细胞系TKE2在扩增以及分化状态下的角蛋白及干细胞标志物的表达情况。方法小鼠角膜上皮祖细胞系TKE2在无血清培养基Keratinocyte-SFM （KSFM）以及含10﹪胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中培养,约70﹪融合时进行角蛋白10、12、14、15、16（K10、K12、K14、K15、K16）以及Connexin43、ABCG2的免疫荧光染色,以及Ki67、P63、PCNA的免疫细胞化学染色。结果无血清培养状态下的TKE2细胞呈克隆样生长,克隆内所有细胞呈ABCG2、K14、Ki67、PCNA以及P63阳性,K15阳性细胞散在分布,K16阳性细胞呈片状分布于克隆中央区,K10、K12以及Connexin43染色为阴性。在含有10﹪胎牛血清的DMEM中培养2 d后,细胞明显增大, ABCG2、K15、P63、Ki67以及PCNA转为阴性,克隆内只有少量细胞呈K16、K14阳性染色, K10、K12、Connexin43仍为阴性。结论 TKE2细胞具有角膜上皮干细胞特性,可以作为角膜缘上皮干细胞表型维持和分化诱导研究的良好工具。     

西酞普兰对应激大鼠额叶皮质神经细胞PCNA、C-fos表达及凋亡的影响

目的：研究西酞普兰对慢性应激大鼠额叶皮质神经细胞增殖细胞核抗原（PCNA）、原癌基因蛋白（C-fos）表达及凋亡的影响。方法：将24只健康雄性SD大鼠随机分为3组（n=8）：对照组（不做任何处理）、应激组（应激＋生理盐水灌胃）、实验组（应激＋西酞普兰灌胃）,采用强迫游泳建立慢性应激模型,用免疫组化法检测PCNA、C-fos蛋白表达水平;TUNEL法检测细胞凋亡情况;尼康图像分析软件测量各指标阳性细胞数量。结果：应激组与对照组比较,可见少量PCNA表达阳性细胞、大量c-fos表达阳性细胞,阳性细胞的体积明显缩小。实验组与应激组比较,可见PCNA表达阳性细胞增多、C-fos表达阳性细胞明显减少,TUNEL阳性细胞数量减少,核浓缩现象较应激组明显减轻,染色也明显变淡,上述差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：慢性应激可影响大鼠额叶皮质神经细胞PCNA、C-fos蛋白表达水平,促进细胞凋亡,西酞普兰可调控额叶皮质神经细胞PCNA、C-fos蛋白表达水平,拮抗细胞凋亡,这可能是西酞普兰预防和治疗慢性应激引起的精神心理疾病的机制之一。     

川芎嗪、丹参和地塞米松对大鼠肺气肿碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响

采用免疫细胞化学及原位杂交方法观察川芎嗪、丹参和地塞米松对木瓜蛋白酶所致大鼠肺气肿形成中肺组织碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF) m RNA表达和肺泡 型上皮细胞增殖细胞核抗原 (PCNA )表达的影响。 Wistar大鼠随机分为正常对照、肺气肿 7天、 15天、 30天、川芎嗪、丹参和地塞米松治疗组 ,共 7个组。用一次气管内注入木瓜蛋白酶复制大鼠肺气肿模型 ,取肺组织作 b FGF m RNA原位杂交 ,分离肺泡 型上皮细胞作 PCNA免疫组织化学染色 ,用图像分析定量。结果显示注药后第 7天大鼠肺组织 b FGF m RNA表达至高峰 ,第 15天后表达逐渐减少 ,川芎嗪、丹参和地塞米松治疗 30天组 b FGF m RNA表达减少 ,但仍高于正常对照组 (P<0 .0 1)。肺泡 型上皮细胞 PCNA表达与肺组织 b FGFm RNA表达呈正相关 (r=0 .78,P<0 .0 1)。川芎嗪治疗组 PCNA表达明显降低 ,但仍高于正常对照组。结果表明川芎嗪在肺气肿发病过程中有一定治疗作用     

骨髓单个核细胞移植对大鼠溃疡性结肠炎的作用

目的:探讨同种异体骨髓单个核细胞(BM-MNCs)移植大鼠溃疡性结肠炎模型的作用。方法:将DAPI标记的同种异体大鼠骨髓单个核细胞(BM-MNCs)经尾静脉注射移植到大鼠溃疡性结肠炎(UC)模型体内(模型组),以尾静脉注射等量PBS的UC大鼠作为对照组。光镜观察大鼠结肠组织病变改变,荧光显微镜观察标记DAPI的BM-MNCs在结肠组织中的定植及分布情况,免疫荧光检测BM-MNCs中CK19、CD34的表达情况。结果:移植组大鼠结肠组织可见新生黏膜上皮及腺体,黏膜下有新鲜至成熟肉芽组织生成,明显优于对照组;移植14天,大鼠结肠组织中可观察到DAPI标记的BM-MNCs细胞;DAPI标记的细胞可表达血管内皮细胞特异性表达蛋白CD34或黏膜上皮细胞特异性表达蛋白CK19。结论:BM-MNCs可向受损病变部位结肠组织迁移和定植,且分化为血管内皮细胞和黏膜上皮细胞。     

全反式维甲酸通过γ-氨基丁酸途径促进小鼠胚胎腭板间充质细胞的凋亡

维甲酸(RA)是一种能够诱导腭裂发生的致畸物．研究显示γ-氨基丁酸(GABA)在腭板的发育过程中发挥重要作用．而GABA是否参与了RA诱导的腭裂发生还不清楚．本研究以小鼠胚胎腭板间充质细胞(MEPM)为研究对象,观察全反式维甲酸(atRA)(0.2、0.67、2.0和 6.7 μmol/L)对MEPM细胞增殖和凋亡的影响,并探讨GABA信号通路在其中的可能作用．结果显示,atRA(2.0 μmol/L和6.7 μmol/L)显著性抑制了MEPM的增殖,并促进了细胞凋亡．atRA(0.67、2.0和 6.7 μmol/L)显著性降低了GABA合成的关键酶谷氨酸脱羧酶(GAD67)mRNA和蛋白质的表达,但对γ-氨基丁酸A型受体-β3(GABAAR-β3)mRNA和蛋白质的表达没有影响．1.0 μmol/L的GABA逆转了atRA(6.7 μmol/L)对MEPM细胞增殖和凋亡的影响．以上结果表明,atRA通过下调GAD67的表达,减少GABA的产生,抑制MEPM的增殖和促进MEPM的凋亡,从而可能影响腭板的发育,诱导腭裂形成．     

促肾上腺皮质激素引起大鼠肾上腺c—fos原癌基因表达的免疫…

采用冰冻切片免疫组化法观察了注射促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ,７５Ｕ／ｋｇ）,胰岛素及正常对照大鼠中肾上腺务部分ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达产物Ｆｏｓ蛋白的出现和分布特点。结果表明注射ＡＣＴＨ后９０ｍｉｎ,大鼠肾上腺皮质网状带出现Ｆｏｓ蛋白染色阳性细胞,阳性染色物集中于细胞核,肾上腺皮质束状带仅见少数Ｆｏｓ蛋白染色阳性细胞,肾上腺髓质则未见Ｆｏｓ蛋白染色阳性细胞。与注射ＡＣＴＨ相反,注射胰岛素引起肾上腺髓