Hib多糖蛋白结合疫苗中残余氰化物检测方法的建立

为了保证多糖蛋白结合疫苗的生产质量,建立了高效离子色谱和电化学检测残余溴化氰(CNBr)的方法。结果显示,该方法用于Hib多糖蛋白结合疫苗的残余氰化物检测时,在10~100μg/L的测定范围内,具有良好的专属性、灵敏度、精密度、线性和准确度。该方法操作简便,检测时间仅需要10 min。该方法也适用于以溴化氰作为多糖活化剂的其他多糖蛋白结合疫苗的质量控制。     

大鼠附睾上皮细胞的原代培养及纯化鉴定

目的建立大鼠附睾上皮细胞原代培养及纯化方法。方法利用酶消化法和组织块法对大鼠附睾上皮细胞进行原代培养,然后用胰酶两步消化法进一步纯化附睾上皮细胞,最后分别利用免疫荧光和免疫组织化学染色对原代培养的细胞及相关蛋白表达情况进行鉴定。结果酶消化法较组织块法得到的附睾上皮细胞纯度高,免疫荧光染色结果证明所得附睾上皮细胞主要是主细胞,免疫组织化学结果证明培养的附睾上皮细胞中有雄激素受体和雌激素受体α的表达。结论利用酶消化法对大鼠附睾上皮细胞进行体外培养,方法简单易行,成功率高。     

两种用于测定A/C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量方法的比较分析

为探索一个灵敏、简便、快速的定量检测A/C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量的方法,对两种化学法进行了分析和比较。两种化学方法分别采用间苯二酚显色法和苦味酸显色法。间苯二酚显色法为套用唾液酸测定法,苦味酸显色法是对乳制品中乳糖含量检测方法的改良。两种方法的相关系数均大于0.99,线性良好。用间苯二酚法测定样品的回收试验检测结果平均值和变异系数分别为100.4%和3.09%,用苦味酸法测定样品的回收试验检测平均值和变异系数分别为99.9%和1.43%。这两种方法可以初步应用于疫苗中乳糖含量检测。     

HPLC法测定A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量

建立了高效液相色谱法测定A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖的含量。样品经离心除去多糖后,采用阳离子交换柱分离,外标法定量分析。该法线性相关系数大于0.9999,回收率为98.8%,成品测定的CV值为1.2%(<2%),该法定量准确,重复性好,适于对A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量进行快速检测。     

OSF1在毕赤酵母菌中的分泌表达及其生物活性

为了研究人成骨细胞刺激因子(Human osteoblast-stimulating factor,OSF-1)的生物学活性,构建OSF-1高效毕赤酵母表达菌株并表达纯化具有生物活性的OSF-1。首先通过全基因人工合成的方法合成人osf-1基因,并克隆至毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K/osf-1,线性化后电转化酵母宿主菌GS115,构建P.pastoris GS115/pPIC9K/osf-1,经MD、G418-YPD平板和PCR法筛选,获得多拷贝转化子。阳性表达菌株在25℃,经1%的甲醇诱导表达96 h,重组蛋白的表达量达到最大。经SDS-PAGE电泳分析所表达的重组蛋白约为18 kDa,与人成骨细胞刺激因子相符。表达上清经SP-Sephadex C-50离子交换层析进行纯化,得到纯度达98%以上的OSF-1。Western blotting鉴定该蛋白对人成骨细胞刺激因子抗体具有良好的抗原性。生物活性测定表明提纯的OSF-1能促进鼠成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化。利用重组毕赤酵母高效分泌表达了有生物活性的OSF-1,为进一步开展其抗骨质疏松活性研究及产业化开发奠定了基础。     

线性文化遗产的空间格局构建——以明长城大同段为例

线性文化遗产保护的重要性和迫切性已成为共识。以明长城大同段为研究案例,综合现有文化遗产分类方法进行遗产要素分类与识别,利用空间信息技术和不同遗产价值评价体系进行资源评价与分析,并总结多级别遗产点的地理空间分布规律。基于“核心保护与多级别缓冲”保护格局,结合实际问题和相关法规文件从宏观层面提出横向层级式、纵向组团式的空间格局,最后针对不同层次的遗产区域组合,制定实操性较强的保护策略。借此为中国线性文化遗产保护的空间格局规划理论与技术研究提供经验,以完善中国文化遗产保护体系。     

园林植物三维数字模型的构建与应用探索

利用三维数字模型进行辅助设计、效果展示、施工指导和后期管护等已经成为风景园林行业发展趋势。植物是风景园林的关键组成要素,通过探讨园林植物三维数字模型构建与应用的必要性,以栾树（Koelreuteria paniculata）为例,利用三维植物建模软件PlantFactory对其进行三维数字模型构建探索,构建一个包含15种典型园林树种的小型三维数字模型库。最后,通过对园林植物三维数字模型在植物形态认知、植物景观设计表现和构建风景园林信息模型（LIM）3方面的应用,探索其适用性和有效性。     

石墨炉原子吸收法测定葡萄糖中的铅残留量

目的建立石墨炉原子吸收法检测葡萄糖中铅残留量的方法,并对该方法进行验证。方法采用石墨炉原子吸收法,确立仪器工作参数以及原子化程序;依据《欧洲药典》8.0版原子吸收法的相关规定进行方法验证,分别验证方法的线性、范围、准确度、重复性、中间精密度、检测限、定量限等;并初步应用。结果检测条件:波长A283.3 nm、氘灯背景校正技术、灯电流10 m A、狭缝宽度0.7 L、上样量20μL、基体改进剂加入量5μL、测定模式峰面积法、灰化温度1 000℃、原子化温度1 800℃;样品前处理:精密称取葡萄糖5.0 g,用0.5%硝酸溶液溶解并定容至100 m L;三次拟合的校正曲线的相关系数均在0.999以上,SD最低0.5∶SD最高2.0;范围为5~50 ng/m L(即0.1~1 mg/kg);回收率在97.8%~102.1%之间,连续3个平行结果的重复性在0.2%~1.7%之间,3个不同日期测定结果的中间精密度在1.2%~2.2%之间;检测限为0.444 ng/m L,定量限为1.48 ng/m L,按照《欧洲药典》8.0版要求的限度单位换算成mg/kg,分别相当于0.008 88 mg/kg、0.029 6 mg/kg。对3批葡萄糖进行测定,结果均为未检出。结论该方法操作简单、检测快速,且具有准确度和精密度高、灵敏度高、检测结果准确可靠等优点,可以取代《欧洲药典》8.0版采用的萃取—火焰原子吸收法和《中国药典》2015版(二部)的重金属检查法进行葡萄糖品种铅残留量项目的测定。     

疫苗中残余CDAP检测方法的建立

为了对多糖活化剂———1-氰基-4-二甲基氨基-吡啶四氟化硼(CDAP)的残余水平进行有效监控,本研究建立了基于高效阳离子交换层析的简便易行的检测方法,进行验证后的结果表明,该法具有良好的专属性、准确度、精密度,检出限可低至16μg/L,在20～100μg/L的范围内具有良好的线性。