红树林内生细菌的分离及拮抗菌筛选

红树林内生细菌及拮抗菌分离筛选结果表明:各品种红树体内均有大量的内生细菌,不同红树品种及部位内生细菌的数量不同,其中以红海榄体内的含量最高,达4．225×104cfu／g(fw),其它依次为木榄、桐花树、秋茄和白骨壤等;不同部位以茎组织体内内生细菌的含量最多,达1．649×104cfu/g(fw),其次为根和叶。获得的内生细菌中约有43．53％的内生细菌菌株对枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、炭疽病菌(Colletotrichum sp．)等病原真菌及番茄青枯病菌(Ralstonia solanaceance)具有较强拮抗作用。对番茄生长测定发现,13株菌株中有9株(69．23％)表现为促进生长效果,4株(30．77％)表现为抑制生长作用。经初步鉴定,上述拮抗细菌均为芽孢杆菌(Bacillus sp．)。     

甘草内生细菌的分离及拮抗菌株鉴定

从乌拉尔甘草健康植株的根茎叶中共分离到内生细菌98株,经初步鉴定芽孢杆菌属（Bacillus sp.）为优势种群,约占30%;从不同生长年份甘草的根、茎、叶组织中分离内生细菌种群密度从5.0×10⁴ cfu/g～2.9×10⁷ cfu/g鲜重不等。采用平板对峙方法筛选出6株对植物病原菌有明显体外拮抗活性的菌株,通过菌落、菌体形态观察、生理生化反应及16S rDNA序列分析,同时结合Biolog细菌自动鉴定系统验证,鉴定这6株拮抗菌分属萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、Paenibacillus ehimensis。     

北京市五大水系水体浮游细菌的数量特征研究

为掌握水域浮游细菌数量分布特征及其变化情况,采用荧光显微镜细菌计数法（AODC）于2016年6月至2018年9月研究了北京市五大水系浮游细菌的数量特征。结果表明,各水系浮游细菌密度分别为潮白河水系（0.24～28.46）×104 cell/mL,大清河水系（1.34～64.00）×10⁴ cell/mL,永定河水系（0.17～6.77）×10⁴ cell/mL,北运河水系（0.24～64.00）×10⁴ cell/mL,蓟运河水系（0.80～112.00）×10⁴ cell/mL。SPSS相关分析表明,各水系浮游细菌密度与水体理化因子间的相关性存在明显差异,大清河水系细菌密度与TN（P<0.05）呈显著正相关,与TP（P<0.01）和ADP(P<0.01)呈极显著正相关;永定河水系细菌密度与TAN（P<0.05）和TP(P<0.05)呈显著正相关,与ADP（P<0.01）呈极显著正相关;蓟运河水系细菌密度与Chl-a（P<0.05）呈显著正相关;潮白河水系及北运河水系细菌密度则与各理化因子均无显著相关性。从浮游细菌数量来看,各水系水质均较好,其中永定河水系水质最优。     

金属离子抑制细菌整合子捕获耐药基因盒的机制研究

【目的】探索金属离子对整合子捕获耐药基因盒的影响及其相关机制。【方法】在大肠埃希菌中构建一个1类整合子捕获耐药基因盒的体内模型。通过实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)测定不同浓度银(0.3、0.9、1.5 μg/mL的Ag⁺)和铜离子(5、50、100、150、210 μg/mL的Cu²⁺)干预后实验组和无金属离子干预对照组整合子整合频率,并用表型筛选法验证。利用质谱法测量细菌吸收的金属离子浓度,并进一步通过转录组测序方法分析银离子抑制细菌整合子捕获耐药基因盒的分子机制。【结果】qPCR和表型筛选法的结果表明,0.9 μg/mL银离子组整合频率为9.42×10^‒5 (6.49×10^‒5,1.44×10^‒4),1.5 μg/mL银离子组整合频率为7.29×10^‒5 (4.45×10^‒5,9.03×10^‒5),与对照组2.59×10^‒4 (2.24×10^‒4,3.33×10^‒4)相比整合频率明显降低,差异有统计学意义(P<0.001)。而不同浓度铜离子组与对照组没有明显差异。转录组测序方法对银离子作用前后大肠杆菌基因表达水平进行对比分析,通过GO功能和KEGG通路富集发现,差异表达基因与甲基半乳糖苷转运(methylgalactoside transport)、麦芽糖转运(maltose transport)、磷酸烯醇式丙酮酸-甘油磷酸转移酶活性(phosphoenolpyruvate-glycerone phosphotransferase activity)和甘油激酶活性(glycerone kinase activity)等功能有关以及涉及氨基酸糖和核苷酸糖代谢(amino sugar and nucleotide sugar metabolism)、鞭毛组装(flagellar assembly)、阳离子抗菌肽(CAMP)耐药性[cationicantimicrobial peptide (CAMP) resistance]、果糖和甘露糖代谢和磷酸糖转移酶系统[phosphotransferase system (PTS)]等代谢通路。通过蛋白互作网络筛选出前12个枢纽基因(ptsG、malE、lamB、lacZ、malK、basR、ais、ugd、nagE、metN、malQ和malF)。【结论】一定浓度银离子可以抑制整合子整合耐药基因盒。铜离子对整合频率影响不明显,因此不是所有具有杀菌性的金属离子都能对整合频率产生影响。银离子抑制细菌整合子捕获耐药基因盒可能是通过影响麦芽糖转运和碳分解代谢来调控。然而,碳分解代谢和麦芽糖转运过程很复杂,需要进一步研究。目前尚无细菌整合子转录组学相关研究,这为解决细菌耐药性问题提供了一个新的途径。     

响应面法优化赤红球菌HDRR2Y发酵培养参数

通过响应面法对硝化菌——赤红球菌（Rhodococcus ruber）HDRR2Y的发酵培养参数进行优化,以提高其活菌数。首先通过单因素实验筛选出赤红球菌HDRR2Y的最优碳、氮源,并采用Plackett-Burman实验得到影响活菌数的显著因素,然后进行响应面实验,经最陡爬坡及回归分析得出最佳培养参数,最后以摇瓶实验检验其合理性。结果显示,赤红球菌HDRR2Y的最优碳、氮源分别为乙酸钠和酵母膏+蛋白胨+氯化铵（1：1：1,质量比）,显著影响活菌数的因素有碳、氮源及温度,经回归分析得到的最优培养参数为乙酸钠5.48 g/L、酵母膏+蛋白胨+氯化铵4.96 g/L、温度29.24 ℃、pH 7.0、转速200 r/min、MgSO₄ 0.2 g/L, KH₂PO₄ 0.5 g/L, NaCl 9 g/L, CaCl₂ 0.5 g/L, MnSO₄ 0.025 g/L, FeSO₄ 0.05 g/L, C₅H₉NO₄ 0.002 g/L、接种活菌数1×10⁴ cfu/mL、装液量40%(体积分数)、培养时间36 h。优化后的实际活菌数为1.54×10⁹ cfu/mL,远高于优化前的活菌数（1.8×10⁸ cfu/mL）(P<0.01)。因此,采用响应面法优化赤红球菌HDRR2Y的发酵培养参数能大幅提高其发酵活菌数,为硝化菌剂的工业化生产提供数据参考。     

柑橘内生真菌的分离鉴定及其发酵产物对柑橘溃疡病菌的抑制活性

本研究从柑橘抗病品种的健康植株不同组织中分离纯化和鉴定内生真菌,并测定其发酵产物对柑橘溃疡病菌的抑制活性,以明确柑橘抗病品种中内生真菌的组成及其产抗柑橘溃疡病菌活性代谢产物的潜力,为柑橘溃疡病抗菌剂的开发奠定基础。该研究通过组织培养法分离内生真菌,采用形态学和分子生物学方法对其进行鉴定; 基于前期的拮抗预试验结果,选取代表性菌株进行发酵培养,通过乙酸乙酯浸提、真空抽滤、旋转蒸发浓缩制备粗提物; 采用带毒平板涂布法测定不同菌株发酵产物乙酸乙酯提取物对柑橘溃疡病菌的抑制活性。结果表明:(1)共分离得到72株内生真菌,归为2门(Ascomycota、Basidiomycota)、14个属,其中优势属为刺盘孢属(Colletotrichum)、球座菌属(Guignardia)、链格孢属(Alternaria)和镰刀菌属(Fusarium)。(2)不同柑橘品种中内生真菌多样性指数为温州蜜柑(桂林)>沙糖桔(桂林)>沙糖桔(梧州)。(3)不同组织中内生真菌多样性变化因地理位置差异而有所不同,采自桂林的温州蜜柑和沙糖桔均为叶片中的内生真菌的多样性高于枝条,而采自梧州的沙糖桔为叶片中的多样性低于枝条,并且采自梧州的柑橘样品与采自桂林的柑橘样品中的内生真菌相似性低。(4)测定了30株内生真菌乙酸乙酯提取物对柑橘溃疡病菌的抑制活性,其中29株菌株表现出不同程度抑制活性。不同柑橘品种中的优势属的MIC介于0.312 5～10 mg·mL^-1之间,特有属的MIC介于0.156～5 mg·mL^-1,共有属镰刀菌属的MIC介于0.312 5～2.5 mg·mL^-1之间。研究结果表明柑橘抗病品种中内生真菌具有丰富多样性,并且其发酵提取物普遍对柑橘溃疡病菌具有抑制作用。特有属抑菌活性总体优于优势属,共有属镰刀菌属在不同柑橘抗病品种中均具有显著抑菌效果。     

光枝勾儿茶内生真菌多样性及抑菌活性研究

为探索贵州苗药光枝勾儿茶内生真菌类群特征、分布部位及其抑菌活性,该研究采用传统方法对贵州省贵阳市和黔西市光枝勾儿茶内生真菌进行分离,并基于分子生物学及统计学对其分类地位进行鉴定及多样性评价,最后通过微量肉汤倍比稀释法筛选具有抑菌活性的菌株。结果表明:(1)从光枝勾儿茶中分离到191 株内生真菌,隶属于3 个门5 个纲10 个目15 个科19 个属,优势属为叶点霉属(Phyllosticta)、间座壳属(Diaporthe)、葡萄座腔菌属(Botryosphaeria)和刺盘孢属(Colletotrichum)。(2)黔西光枝勾儿茶内生真菌香农-维纳多样性指数(H''_Q=2.112)较贵阳(H''_G=1.801)高,索伦森相似性指数Cs_G-Q为0.923,不同组织香农-维纳多样性指数为茎(H''_S=2.004)>根(H''_R=1.764)>叶(H''_L=1.654)>果实(H''_F=1.473),茎和叶内生真菌的索伦森相似性最高(Cs_S-L=0.667)。(3)筛选出的21株内生真菌对供试菌大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和沙门氏菌(Salmonella enterica)具有抑菌效果,其中Diaporthe sp. QX4G6对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的最小抑菌浓度分别为12.5、6.25、12.5 mg·mL^-1,最小杀菌浓度分别为12.5、6.25、12.5 mg·mL^-1。以上研究结果揭示了光枝勾儿茶蕴藏丰富的内生真菌资源,不同地区及组织内生真菌类群组成有差异,多个分离菌株具有抗菌活性,为光枝勾儿茶内生真菌天然抗菌药物或药源研发奠定了基础。     

多株功能菌种混合培养条件的响应面优化及其生长关系

对3种具有土壤中多种重金属污染修复和病虫害防治功能的光合细菌（Photosynthetic bacteria,PSB,包括Rhodobacter sphaeroides H菌株、Rhodopseudomonas palustris N菌株和Rhodospirillium rubrum M菌株）、枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis, BS）和植物乳酸杆菌（Lactobacillus plantarum, LP）进行混合培养,利用单因素和响应面试验优化培养基配方以及培养条件。确定功能菌混合培养的最佳条件：以光合细菌培养基为基础培养基,外加碳源为10 g/L蔗糖、氮源为1.25 g/L硫酸铵、培养温度为31.5 ℃、初始pH值为7.1、接种量为接种后的初始培养活菌数1.90×10⁹cfu/mL、培养时间为28.0 h。通过功能菌的加性模型法、生长动力学以及混合培养的生长关系分析表明,光合细菌、枯草芽胞杆菌和植物乳酸杆菌的生长均存在互惠互利关系。     

人肌型特异烯醇化酶放免分析法及初步应用

建立了人肌型特异烯醇化酶(hMSE)的放免分析法,抗血清的亲和常数为5.1×10⁹L/mol,采用改良的BHR法制备了 ¹²⁵I-hMSE,后者非特异结合率为3%,与抗血清(1∶10³)结合率达50.16%;批内和批间CV分别为8.6%和13%.回收率为95%-105%.标准曲线范围为5-320μg/L.最小检出率为5μg/L.最佳反应条件:0.1mol/LpH7.4PBS(含5mmol/L MgSO₄,0.1%吐温-20,0.1%NaN₃);反应温度和时间:37℃反应0.5h和4℃,0.5h,作为快速测定;或选用4℃反应24h.65例健康人血清hMSE浓度为23.9±10.9μg/L(x±s).hMSE超过57μg/L(x+3s).为阳性值.测定了AMI和肌病患者,血清hMSE明显升高.     

Isolation and genetic characterization of streptomycin and chloramphenicol resistant mutants in the mossPhyscomitrella patens

Summary Mutant strains of the mossPhyscomitrella patens that were resistant to the antibiotics streptomycin and chloramphenicol were isolated following UV irradiation. Mutants resistant to streptomycin at 1.7×10⁻⁴ M showed both dominant and recessive Mendelian and inheritance patterns. Mutants resistant to streptomycin at 1.7 ￠ 10⁻⁴ M and to chloramphenicol at 3.1×10⁻⁴ M were, with one exception, cytoplasmically inherited.     

基于高通量测序的稀释平板计数细菌群落变化研究

【目的】明确平板计数法中不同稀释梯度对土壤细菌数量和组成的影响规律,比较稀释平板计数法和高通量测序研究土地利用方式变化下土壤细菌群落的差异。【方法】针对不同土地利用方式下的4种土壤(次生林、健康蕉园、发病蕉园和水稻土),设置5个土壤悬液10^-1-10^-5稀释梯度开展平板计数,获得平板上可培养细菌富集物并提取总DNA;同时直接提取原位土壤微生物总DNA,高通量测序细菌富集物DNA和土壤总DNA中的16S rRNA基因,研究不同土壤悬液稀释梯度下的可培养细菌群落和背景土壤细菌多样性,明确可培养细菌占土壤总细菌的比例以及多样性差异。【结果】次生林垦殖为蕉园土壤后土壤呼吸增幅最高,细菌数量降幅最高,稀释平板计数与实时荧光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR)结果一致,但其他土地利用方式变化的稀释平板计数与实时荧光定量细菌数量的结果并不完全一致。连续稀释显著降低了可培养细菌多样性。与原位土壤总细菌相比,土壤可培养细菌群落Chao 1指数降幅高达86%-98%。与土壤悬液稀释10倍(10^-1)相比,稀释100-10万倍(10^-2-10^-5)后可培养细菌群落Chao 1指数降幅高达35%-60%。连续梯度稀释也降低了物种多样性,所有稀释梯度共检测到315-401个微生物属,共有属仅为21-38个,而10^-1梯度独有属有92-210个,10^-2-10^-5梯度独有属为2-59个。4种土壤中可培养细菌占背景土壤总细菌比例范围为：16.1%-47.7% (门水平),7.4%-30.9% (属水平)。两两比较不同土地利用方式间的显著差异物种,可培养方法获得的显著增加和减少的物种数量仅为高通量直接测序原位土壤结果的9.7%和22.9%;免培养和可培养均发现了一些共同的差异物种,包括Bacillaceae、Micrococcaceae、Microbacterium、Comamonadaceae和Burkholderiales。【结论】传统稀释平板计数可培养细菌数量过程中,10^-1稀释梯度下可培养细菌比例及多样性明显高于10^-2-10^-5梯度,而10^-2-10^-5梯度之间并无明显差异。表明传统稀释平板计数过程中,遗漏了相当数量的独特微生物属,其比例范围为35.9%-99.0%。可培养法和免培养法均发现,土地利用方式变化可导致一些微生物类群显著降低,如Microbacterium。尽管可培养方法低估了不同土地利用方式间细菌群落的差异,但可培养与免培养方法发现了共同的差异细菌类群。与4种土壤中细菌本底丰度相比,固体平板显著富集Pseudomonas和Flavobacterium,增加倍数分别为2 233-5 805倍和43-4 506倍。未来应耦合分子生态学与可培养技术深入发掘复杂土壤环境中的微生物资源。     

不同交联方法制备的免疫毒素及其体内外特性

用三种不同的异型双功能交联剂把单抗和完整蓖麻毒素连接起来,经适当纯化获得了高活性免疫毒素(ITs),体外试验中蛋白质合成抑制50％的浓度IC₅₀达到2.7×10^-12mol/L.以二硫键连接的ITs比硫醚键连接的ITs细胞毒性高5—10倍(P<0.05),而硫醚键连接的ITs在动物体内代谢慢1倍,且其原型药物维持时间更长,稳定性更好。两类ITs在体内的代谢产物也不相同。     

重组生防菌308R(pKSH)的遗传稳定性研究*

工程菌308R(pKSH)携带有梨火疫欧文氏杆菌的hrpN基因,能产生并分泌诱导植物抗病性蛋白-Harpin。该工程菌在无选择压培养基中生长50代,带有重组质粒pKSH的细胞占总菌量的23.1%,对照菌308R(pCPP430)的细胞占4·75%。将工程菌和对照菌喷雾到番茄叶面,保湿条件下的13d内,叶面菌量维持在10⁵cfu/cm²以上,自然条件下的5d内,菌量维持在10⁴cfu/cm²以上,其间308     

用荧光分光光度法测定组织和血液中一氧化氮

利用NO^－₂对4-羟基香豆素的荧光增强效应,建立了生物样本中NO荧光分光度测定法,其检测浓度范围为2×10^-5～2×10^-8 mol/L,采用该方法检测了大鼠大脑皮层和海马组织、细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞培养上清和血清中NO含量.     

酵母完整细胞快速高效转化法

通过研究影响转化效率的诸因素,最终找到一种快速、高效酵母完整细胞转化法。整个转化步骤能在1．5h内完成。在实验中发现：小牛胸腺DNA的加入,在加入DNA后随即加入PEG4000;将42℃热冲击时间从5min延长到25min;热冲击后直接将转化混合物涂布到选择性平板上能得到高效转化效率。所用四种类型质粒的转化效率如下：Yrp;3．5—7．2×10⁴(线性pcN60／BamHⅠ：1·6×10⁵);Yep: l·7—2.6×10⁴(线性YEpl3／BarnHⅠ：8×10⁴),Ycp：3．7×10⁴;YIp5／stuI：7．6×10³。用快速法检测的7株受体菌的转化能力都达到10⁴个转化子/μg DNA。     

Efficient plantlet regeneration from protoplasts isolated from suspension cultures of poplar (Populus alba L.)

We developed an efficient plant regeneration system from protoplasts for poplar (Populus alba L.). Protoplasts were isolated from 4-day-old suspension cultures derived from seed-induced calli with a yield of 6.96× 10⁶ cells/g fresh weight cells and then cultured at a concentration of 2.5×10⁵ cells/ml in NH₄NO₃-free Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 5 μM 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D), 0.05 μM thidiazuron (TDZ) and 0.5 M glucose as a osmoticum. The plating efficiency of the cultured protoplasts was calculated at 26.5% at day 7 and 31.7% at day 14. Cell colonies were observed after culturing for 4 weeks. Regenerated colonies were propagated through subculture in liquid MS medium supplemented with 5 μM 2,4-D. Buds were induced from regenerated calli on MS medium containing 10 μM kinetin or 1 μM TDZ. Regenerated shoots were rooted on half-strength MS medium, and the plantlets were transplanted in soil. Randomly amplified polymorphic DNA analysis did not detect any DNA polymorphism among the regenerated plants. Received: 7 March 1997 / Revision received: 16 June 1997 / Accepted: 5 July 1997     

葡萄糖氧化酶产生菌Z—l—C的分批发酵与恒化培养

本文对葡萄糖氧化酶产生菌z—I—c的分批发酵与恒化培养进行了研究。实验发现,在以葡萄糖为生长限制性基质的恒化培养中,该产生菌的维持系数为O．04 g葡萄糖／g菌体．H,生长得率系数Y^max_G=O．714 g菌体／g葡萄糖,最大比生长速率μmax=O．385h^-1,饱和常数Ks=4．76g/L,理论最适稀释度Dm=0．260h^-1,最大酶比活(E／x)max为2．16×10³μ／mg,其值较分批发酵的最大酶比活(1．5l×10³μ／mg)提高43％。当向恒化培养的补料培养基中添加0．02％的α-甲基-D-葡萄糖时,由于该葡萄糖结构类似物的诱导作用,可使(E／x)max达3．11×10³μ／mg,较分批发酵之值提高106％。     

The production ecology of Stephanodiscus Astraea (Ehrenb.) Grun

The production ecology of Stephanodiscus astraea (Ehrenb.) Grun. is discussed with respect to other phytoplankton growths, mixing regimes and nutrient availability. Populations of Stephanodiscus were studied during 1972 and 1973 in an artificially mixed reservoir with a capacity of 3.5 × 10⁷m³. Major nutrients such as soluble reactive phosphates (60–200 μg/1) and nitrates (1–8 mg/1) were not limiting. Large amounts of silicate (approximately 10 mg/1) were utilized to support moderately large populations of S. astraea (1.3 × 10⁷ μm³/ml). Light penetration and mixing regimes strongly affected the periodicity and size of standing crops. It is suggested that heterotrophic production can interact with the mixing environment to influence the production of turbid waters.     

养殖泥螺体内细菌菌群组成及分析*

养殖泥螺样品体内需氧平板菌落数为 7 3× 1 0 5～ 2 8× 1 0 6 个 /g。从泥螺体内共分离获得 2 1 7株细菌 ,88 5 %是革兰氏阴性杆菌。优势菌属是肠杆菌科 (Enterobacteriaceae) 61株、气单胞菌属 (Aeromonas) 58株、弧菌属 (Vibrio) 2 7株和假单胞菌属 (Pseudomonas) 2 1株。结果表明 ,每批泥螺样品的细菌总数均超出卫生标准 1～ 2个数量级 ,7月和 9月样品的大肠     

葡萄糖的添加对昆虫细胞Sf21悬浮生长的影响

添加葡萄糖对昆虫细胞Sf21(Spodoptera frugiperda)悬浮生长的影响,发现补加糖量在lg／L时·能明显提高细胞生长的速度和最高密度,细胞最高密度由2．5×10⁴／ml增加到4.9×10⁶／ml; 朴加糖量在2g／L时,则有显著的抑制作用,即使增加接种密度．细胞生长的最高密度也只有2．1×10⁶／ml。当采取流加葡萄糖方法来培养细胞时,则其生长的最大密度可提高到5．2×10⁶／ml。