簇生沿丝伞粗多糖的抗肿瘤活性研究

应用传统多糖提取方法从簇生沿丝伞中获得粗多糖,初步纯化后进行了抗癌活性的体外及体内实验。结果表明,簇生沿丝伞中多糖成分具有很好的抗肿瘤活性,对MCF-7细胞体外细胞增殖抑制率达22.4%,体内抗肝癌抑瘤率达33.79%。     

甘遂根提取物对人上皮样肝癌BEL-7402的体外实验研究

通过体外培养人上皮样肝癌BEL-7402细胞,分别以加入PBS液为对照组,加人5-FU(10ug/mL)为阳性对照,加入甘遂根提取物(浓度分别为0.1、1.0、10.0、50.0、100.0ug/mL)为实验组,采用台盼蓝染色法、MTT比色法、克隆形成法以及流式细胞仪进行检测分析,以明确甘遂根提取物对BEL一7402细胞的抑制作用.结果显示,几种方法测定的结果一致,甘遂根提取物对BEL-7402细胞的生长抑制率随处理浓度的增高呈上升趋势,其中台盼蓝染色法测定的抑制率分别为71.9%、81.3%、84.4%、86.8%、100%;MTT比色法测定的抑制率分别为50.8%、52.4%、55.6%、57.1%、74.6%;克隆形成实验对克隆形成抑制率分别为44.9%、53.9%、58.1%、79.6%、86.8%.流式细胞仪测定的凋亡率分别为0、24.3%、26.5%、32.9%、100%.实验表明,甘遂根提取物对人上皮样肝癌BEL-7402细胞生长具有显著的抑制作用,而且抑制效果随提取物浓度的增加而递增.     

白花蛇舌草豆甾醇对肝癌细胞的体内外抑制作用及对其增殖周期、凋亡的影响

目的:研究白花蛇舌草豆甾醇(stigmasterol from Hedyotis diffusa willd.,SHD)对人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7402的体外抑制作用,对肝癌H22的体内抑制作用及对其增殖周期、凋亡的影响。方法:MTT法评价SHD对人肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7402的抑制率变化规律。昆明雄性小鼠60只,随机取10只为正常对照组,余接种H22瘤株,随机分为模型对照组、5-FU阳性对照组(30mg/kg)和高中低剂量SHD给药组(剂量分别为15、30、60mg/kg),腹腔给药10 d后,比较各组瘤重抑制率、H22细胞周期分布、凋亡率。结果:SHD对SMMC-7721、BEL-7402细胞具有体外抑制作用;SHD显著抑制H22肿瘤,增加G0-G1期细胞比例,降低G2/M期细胞比例,促进肿瘤细胞凋亡。结论:SHD在体外、体内均具有抑制肝癌细胞的作用,此作用与阻滞肿瘤细胞增殖周期,促进肿瘤细胞凋亡有关。     

马尾松树皮提取物体外诱导人肝癌细胞凋亡的一过性检测分析

目的研究马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract, PMBE)对人肝癌细胞BEL-7402的体外诱导凋亡作用.方法运用"一过性细胞处理法",从形态、生化和分子水平检测细胞凋亡与否.结果 160μg/ml PMBE处理BEL-7402细胞24h后,凝胶电泳呈现DNA ladder,荧光镜检发现"核皱缩、边集或碎裂",流式细胞分析可见明显"凋亡峰".结论 PMBE能明显诱导体外培养的BEL-7402细胞凋亡;"一过性细胞处理法"能快速鉴定"凋亡"并测定"凋亡率",实现了定性与定量的统一.     

利用稻瘟霉分生孢子筛选抗肿瘤放线菌

利用稻瘟霉分生孢子萌发时菌丝形变为指示,从150余株放线菌中筛选到一株抗肿瘤活性很强的菌株JXJ-0108,并从其发酵液中纯化到一个抗肿瘤活性较强的化合物JXJ-0108-1,该化合物在治疗胃癌和肝癌的药物研制中具有潜在的价值。四氮唑盐酶还原法(MTT)体外研究表明,JXJ-0108-1对人肝癌细胞BEL-7402和人胃癌细胞BGC-823的IC50分别为1.63和0.95 ug/mL;流式细胞仪分析表明,分别从0.50和0.30 ug/mL的化合物作用浓度开始,与空白对照组相比,肝癌细胞BEL-7402和胃癌细胞BGC-823的G0/G1、S和G2/M期细胞比例有极显著差异,其中G0/G1和S期细胞比例降低,G2/M期细胞比例上升。本文为抗肿瘤放线菌的筛选及活性成分的跟踪分离提供了一个快速简便的有效方法。     

酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402细胞钙稳态影响的实验研究

目前寻找有效的药物仍是治疗肿瘤的关键环节之一. 酪丝亮肽为中国新近研发并具有自主知识产权的三肽化合物. 观察了酪丝亮肽的抗肝癌作用, 并研究了其对肿瘤细胞钙稳态的影响, 以初步探讨它的抗肿瘤作用机制. 结果发现, 酪丝亮肽能显著抑制人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤的生长, 160 mg/(kg·d)治疗组肿瘤生长抑制率可达41.34%, 电子显微镜观察发现酪丝亮肽可引起移植瘤细胞的坏死和凋亡, 细胞器线粒体和内质网损伤, 并出现钙沉积. 应用激光扫描共聚焦显微镜及流式细胞仪观察发现, 10 mg/mL酪丝亮肽在400 s内可引起体外培养BEL-7402细胞胞浆钙离子浓度迅速升高, 最高幅度可达239.13%; 持续作用1 h后BEL-7402胞浆钙离子维持在高水平, 作用2 h后胞浆钙离子浓度开始下降, 4和24 h时的胞浆钙离子水平均低于对照, 相同剂量的药物对人正常肝细胞株Chang氏肝无明显影响; 酪丝亮肽还可使体外培养的BEL-7402细胞线粒体跨膜电位明显下降, 提示其抗肝癌机制可能是通过影响肿瘤细胞的钙稳态, 诱导其发生坏死或凋亡.     

文蛤糖肽MGP0501的分离纯化及性质鉴定

文蛤粗提液经超滤、层析等纯化得到分子量为15.878×103、纯度为96.42%、糖和蛋白质含量各占约55.18%和44.82%的糖肽MGP0501。MTT法和流式细胞术检测证实MGP0501对A549细胞具有体外抗肿瘤活性,对小鼠移植瘤S180的体内抗肿瘤实验检测亦证实其对小鼠移植瘤S180具有体内抑制作用,表明MGP0501是一种具有抗肿瘤作用的糖肽。     

金樱子提取物中多糖的体外抗肿瘤活性研究

多糖是药用植物金樱子所含有的数种主要生物活性物质之一,其具有多种生物活性,厘清该成分的作用效应具有重要意义。本文通过将黔产金樱子制备为金樱子粉末、分离纯化得到活性成分金樱子多糖;采用磺酰罗丹明染色法测定其对人肝癌细胞BEL-7402以及人正常肝细胞HL-7702增殖的影响并比较。发现金樱子提取物中所存在的多糖类化合物对体外培养的人肝癌细胞BEL-7402的增殖具有一定抑制作用,其半数抑制浓度为(12.43±1.95)μmol/L;且对体外培养的人正常肝细胞HL-7702的毒性较低,其半数抑制浓度为(31.04±3.68)μmol/L。初步证明金樱子提取物中含有的多糖类化合物具有一定的体外抗肿瘤活性,作为低毒性的天然提取物,具有广阔的抗肿瘤前景。     

海胆黄多糖SEP对S180的体内抑制作用

研究海胆黄多糖SEP对S180肉瘤的抑制作用及初步机制。MTT法检测SEP对体外培养的S180细胞生长的抑制作用;建立小鼠S180肉瘤模型观察SEP抗肿瘤活性;检测SEP协同ConA/LPS刺激小鼠脾淋巴细胞增殖作用;同时,考察SEP对NK细胞和杀伤性T淋巴细胞(cytotoxic T lym-phocyte,CTL)活性的影响;碳粒廓清检测SEP对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响。研究表明,海胆黄多糖SEP高中低剂量(16、8、4 mg/kg)显著抑制小鼠180实体瘤生长,增加小鼠脾指数和胸腺指数,协同ConA/LPS刺激小鼠脾淋巴细胞增殖,提高小鼠NK细胞和CTL活性,增强小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能,通过免疫调节提高小鼠免疫功能达到抑制S180作用。     

TCR基因修饰淋巴细胞体内抗肿瘤作用的研究

建立荷人肝癌细胞BEL-7402的SCID小鼠模型,用脂质体介导进行基因转染,流式细胞术检测TCRVβ7.1基因表达,分别以尾静脉注射,肿瘤周围皮下注射以及腹腔注射三种方式给予荷瘤免疫缺陷小鼠(SCID鼠)转染TCRVβ7.1基因的人外周血淋巴细胞,24h后处死小鼠取各组织用免疫组化方法来检测淋巴细胞在小鼠体内的分布的情况.通过检测瘤重、肿瘤体积大小,并计算肿瘤抑制率,观察该基因对SCID荷瘤小鼠的抑瘤作用,为该基因用于肿瘤的临床治疗提供动物实验数据.     

野生地参多糖对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖和血脂的影响

为了研究野生地参多糖对四氧嘧啶(ALX)致糖尿病小鼠血糖和血脂的影响,利用四氧嘧啶(ALX)建立糖尿病小鼠模型,分别灌胃低(100 mg/(kg.d))、中(200 mg/(kg.d))、高(400 mg/(kg.d))剂量地参多糖溶液及阳性对照药盐酸苯乙双胍,正常对照组及糖尿病模型对照组则给等体积生理盐水。结果表明:连续给药14 d后,地参多糖对正常小鼠血糖无明显影响,100、200和400 mg/(kg.d)地参多糖均能明显降低ALX所致糖尿病小鼠高血糖,与糖尿病模型对照组相比,P<0.01;同时,相同剂量的地参多糖还能极显著降低ALX致糖尿病小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P<0.01)。中、高剂量地参多糖使糖尿病小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)显著回升(P<0.05),但低剂量地参多糖对糖尿病小鼠血清HDL-C则无明显影响(P>0.05)。地参多糖能明显降低ALX致糖尿病小鼠高血糖及高血脂。     

4-PA对BEL-7402细胞的生长调控和诱导凋亡作用的研究

应用ＭＴＴ、流式细胞术研究了新型肿瘤诱导分化剂４－ ＰＡ 对人肝癌细胞系ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞的生长调控、诱导凋亡作用。结果表明： ４ － ＰＡ 对ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞增殖抑制的ＩＣ５０ 为４ －９ｍ ｍｏｌ／Ｌ,随着作用时间的增加,ＩＣ５０ 增加。作用效果迅速,在０ ．５ 小时就有效地抑制了细胞增殖,抑制率随４－ ＰＡ 浓度的增加和作用时间的延长而增加,在达到最大抑制率后出现饱和。流式细胞仪对细胞周期和细胞凋亡的分析发现：４ － ＰＡ 对细胞增殖期（Ｓ期、Ｇ２ 期） 有较强的抑制和逆转作用,使细胞群截止在Ｇ１ 期。随着作用时间的延长和４ － ＰＡ 浓度的增加,细胞凋亡的比例增加,凋亡细胞多来自于细胞增殖期（Ｓ 期、Ｇ２ 期） 。诱导凋亡和使细胞截止于细胞静息期是４ － ＰＡ 抑制细胞增殖的主要途径。     

4-PA对BEL-7402细胞的生长调控和诱导凋亡作用的研究

应用ＭＴＴ、流式细胞术研究了新型肿瘤诱导分化剂４－ＰＡ对人肝癌细胞系ＢＥＬ－７４０２细胞的生长调控、诱导调亡作用。结果表明：４－ＰＡ对ＢＥＬ－７４０２细胞增殖抑制的ＩＣ５０为４－９ｍｍｏｌ／Ｌ,随着作用时间的增加,ＩＣ５０增加。作用效果迅速,在０．５小时就有效地抑制了细胞增殖,抑制率随４－ＰＡ浓度的增加和作用时间的处长而增加,在达到最大抑制率后出现饱和。流式细胞仪对细胞周期和细胞调亡的分析发现：４     

Cytotoxic and apoptosis-inducing properties of auriculoside A in tumor cells

The C21-steroidal glycoside auriculoside A (1), recently isolated from the roots of Cynanchum auriculatum, was found to inhibit the growth of several human tumor cell lines and to induce apoptosis in human breast cancer (MCF-7) cells. Compound 1 was evaluated for its in vitro cytotoxicity against MCF-7, HO-8910, and Bel-7402 cells, and for its in vivo antitumor effects on implanted sarcoma-180 (S180) tumors in mice. It showed significant, concentration-dependent inhibition of the cancer cells, both in vitro and in vivo. MCF-7 Cells exposed to 1 displayed typical morphological apoptosis characteristics such as cytoplasm contraction and nuclear-chromatin condensation. Flow-cytometric analysis showed that the MCF-7 cell cycle was arrested at the G0/G1 phase. When treated with 40 microg/ml of 1 for 24, 48, and 72 h, respectively, the apoptotic rates of the cells were ca. 5, 8, and 18.5%, respectively.     

Synthesis of novel dibenzoxanthene derivatives and observation of apoptosis in human hepatocellular cancer cells

We have synthesized dibenzoxanthene derivatives 2a-2i via nucleophilic substitution of methoxyl group and evaluated underlying antitumor molecular mechanism of target compounds. Compounds showed high cytotoxic activities against BEL-7402, A549, HeLa and MG-63 cancer cells in the µM range. These compounds inhibited the cell growth of BEL-7402 cells at S or G2/M phase. The compounds 2a-2i also induced the apoptosis of BEL-7402 cells. In addition, compounds enhanced the level of intramolecular ROS and decreased the mitochondrial membrane potential. Western blot analysis showed caspase-3 were activated and the expression of Bcl-2 and Bcl-xl was down-regulated. According to given results, these dibenzoxanthenes exhibited a broad spectrum of antiproliferative effects on various tumors and therapeutic efficacy. Molecular mechanism indicated that induction of apoptosis was associated with DNA fragmentation, ROS generation, mitochondria dysfunction. Compounds induced apoptosis in BEL-7402 cells through the intrinsic ROS-mediated mitochondrial pathway.     

PER1对人肝癌细胞BEL-7402辐射敏感性的影响

本文通过X射线照射SMMC-7721、BEL-7402和HepG2三种肝癌细胞后,以克隆形成试验检测其存活分数,结果显示在梯度剂量X射线0、2、4、6、8、10 Gy照射下SMMC-7721、BEL-7402、HepG2三种细胞克隆存活分数逐渐下降,其中SMMC-7721在三种肝癌细胞系中对辐射最敏感,BEL-7402辐射抗性在三种肝癌细胞系中最高。Western blot检测发现PER1在SMMC-7721中的表达水平明显显著高于BEL-7402和HepG2(P<0.05)。过表达PER1蛋白以后,BEL-7402接受5 Gy X射线照射后凋亡明显增多,同时,western blot和RT-qPCR试验结果发现,X射线照射过表达PER1的BEL-7402细胞,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低,凋亡执行蛋白Caspase-3断裂明显增多。研究结果表明PER1蛋白的高水平表达可以促进X射线诱导的凋亡,增强肝癌细胞的辐射敏感性。     

BIX-01294对肝癌细胞周期、凋亡及移植瘤的影响

目的:探究组蛋白甲基转移酶G9a抑制剂(BIX-01294)对肝癌细胞周期、凋亡及移植瘤的影响。方法:将SMMC-7721、BEL-7402、HL-7702原始细胞株传代培养后,分为空白对照组和不同浓度(1μM、5μM、10μM、20μM)BIX-01294处理组。应用Western-blot法检测G9a及肝癌细胞内凋亡蛋白CC3、C-PARP、Bax、Bcl-2表达水平;应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度BIX-01294处理SMMC-7721、BEL-7402细胞24、48、72、96 h后的细胞增殖情况;应用流式细胞术检测不同浓度的BIX-01294处理肝癌细胞96h后细胞周期分布情况;移植瘤试验21 d后测量裸鼠体内肿瘤体积及重量,并检测瘤体内H3K9me2的蛋白水平。结果:G9a在肝癌细胞SMMC-7721、BEL-7402中表达水平高于HL-7702细胞(P<0.05)。不同浓度的BIX-01294对SMMC-7721细胞和BEL-7402细胞增殖具有抑制作用,且具有时间依赖性和剂量依赖性(均P<0.05)。不同浓度BIX-01294处理细胞96h后,SMMC-7721细胞和BEL-7402细胞G0/G1期细胞比例增加,S和G₂/M期的细胞比例降低(P<0.05)。5μM BIX-01294处理细胞96h后能明显增加CC3、Bax、C-PARP表达水平,并降低Bcl-2的表达水平(P<0.05),与空白对照组相比,BIX-01294处理组裸鼠肿瘤体积减小,重量较低,且肿瘤组织内H3K9me2的表达水平下降(P<0.05)。结论:BIX-01294导致SMMC-7721、BEL-7402细胞发生周期阻滞和凋亡,且对肿瘤的生长具有明显的抑制作用,其可能是通过抑制G9a的表达从而降低H3K9me2的表达来抑制肿瘤的生长。     

The theaflavin monomers inhibit the cancer cells growth in vitro

The biological effects of tea and tea constituents havebeen studied and reviewed in many publications. Teaand its components have been demonstrated to inhibitchemically induced carcinogenesis in animal models,including cancers of the skin, lung, esophagus…