基因表达转录分析中内参基因的选择

目前基因表达的转录分析多采用单一看家基因作为内参来校正目标基因的表达量.实验中以人肝癌BEL-7402细胞为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术,观察了新型三肽化合物酪丝缬肽作用后RPL13A、UBC、EIF4A、B2M、GAPDH和ACTB共6个看家基因mRNA水平的表达情况.经过geNorm程序统计学分析处理,结果表明,这6个看家基因的表达存在差异,确定了RPL13A、UBC2个看家基因用于校正目标基因的表达量.基因表达转录分析中内参基因选择的必要性在实验中得以证明,更重要的是为各种实验因素影响下(尤其是新物质作用下)内参基因的选择介绍和提供了一种行之有效的方法.     

酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402细胞钙稳态影响的实验研究

目前寻找有效的药物仍是治疗肿瘤的关键环节之一. 酪丝亮肽为中国新近研发并具有自主知识产权的三肽化合物. 观察了酪丝亮肽的抗肝癌作用, 并研究了其对肿瘤细胞钙稳态的影响, 以初步探讨它的抗肿瘤作用机制. 结果发现, 酪丝亮肽能显著抑制人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤的生长, 160 mg/(kg·d)治疗组肿瘤生长抑制率可达41.34%, 电子显微镜观察发现酪丝亮肽可引起移植瘤细胞的坏死和凋亡, 细胞器线粒体和内质网损伤, 并出现钙沉积. 应用激光扫描共聚焦显微镜及流式细胞仪观察发现, 10 mg/mL酪丝亮肽在400 s内可引起体外培养BEL-7402细胞胞浆钙离子浓度迅速升高, 最高幅度可达239.13%; 持续作用1 h后BEL-7402胞浆钙离子维持在高水平, 作用2 h后胞浆钙离子浓度开始下降, 4和24 h时的胞浆钙离子水平均低于对照, 相同剂量的药物对人正常肝细胞株Chang氏肝无明显影响; 酪丝亮肽还可使体外培养的BEL-7402细胞线粒体跨膜电位明显下降, 提示其抗肝癌机制可能是通过影响肿瘤细胞的钙稳态, 诱导其发生坏死或凋亡.     

大黄素影响巨噬细胞升高[Ca2+]i 和释放TNF-α的作用特征

为了研究大黄素（emodin)对正常的和细菌脂多糖（LPS）刺激的大鼠腹腔巨噬细胞（PMφ）释放肿瘤坏死因子α（TNF－α）和升高[Ca^2 ]i的影响,应用L929细胞系和MTT法检测TNF－α量,同时用激光共焦扫描显微术检测单细胞[Ca^2 ]i变化动力学。结果显示大黄素能轻度促进正常PMφ释放TNF－α,并发现大黄素诱发PMφ[Ca^2 ]i变化呈振荡波模式。大黄紫显著抑制LPS刺激PMφ过度释放TNF－α和升高[Ca^2 ]i,10^-5mol/L大黄素抑制了10mg/L LPS刺激的TNF－α峰值的50％和[Ca^2 ]i峰值的68％。LPS诱发MPφ[Ca^2 ]i变化呈现高幅值的“平台期”,大黄素使之转变为低幅值的波动变化。以上结果说明,大黄素对PMφ释放TNF－α和升高[Ca^2 ]i表现出的双向调节作用之间有一定的相关性,大黄素对LPS诱发的[Ca^2 ]i升高的调制,可能是抑制LPS刺激PMφ释放TNF－α的信号传导通路中的重要环节。     

大黄素影响巨噬细胞升高[Ca~(2+)]_i和释放TNF-a的作用特征

为了研究大黄素(emodin)对正常的和细菌脂多糖(LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞(PM准)释放肿瘤坏死因子琢(TNF-琢)和升高[Ca2+]i的影响,应用L929细胞系和MTT法检测TNF-琢量,同时用激光共焦扫描显微术检测单细胞[Ca2+]i变化动力学。结果显示大黄素能轻度促进正常PM准释放TNF-琢,并发现大黄素诱发PM准[Ca2+]i变化呈振荡波模式。大黄素显著抑制LPS刺激PM准过度释放TNF-琢和升高[Ca2+]i,10-5mol/L大黄素抑制了10mg/LLPS刺激的TNF-琢峰值的50%和[Ca2+]i峰值的68%。LPS诱发PM准[Ca2+]i变化呈现高幅值的“平台期”,大黄素使之转变为低幅值的波动变化。以上结果说明,大黄素对PM准释放TNF-琢和升高[Ca2+]i表现出的双向调节作用之间有一定的相关性,大黄素对LPS诱发的[Ca2+]i升高的调制,可能是抑制LPS刺激PM准释放TNF-琢的信号传导通路中的重要环节。     

酪丝亮肽荧光标记物的合成及其在肿瘤治疗靶点研究中的应用

酪丝亮肽是一种具有抗肿瘤活性的小分子三肽，它可以诱导造成肝癌细胞发生凋亡坏死，从而杀伤肿瘤细胞，但是酪丝亮肽在肝癌细胞的亚细胞定位尚不十分明确．为了达到对酪丝亮肽进行示踪进而观察其亚细胞定位的目的，使用荧光物质（5（6）－羧基叫甲基罗丹明琥珀酰业胺酯，5（6）－TAMRASE）对酪丝亮肽进行丫标记，应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管电泳和荧光分光光度法对标记酪丝亮肽进行纯化和鉴定．并在激光扫描共聚焦显微镜下观察了荧光标记酪丝亮肽在人肝癌BEL－7402细胞中的分布．结果显示，合成的酪丝亮肽荧光标记物性质稳定，标记的酪丝亮肽在人肝癌BEL－7402细胞的胞浆中呈聚集分布．