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1.
端粒酶 (Telomerase)是一种核糖核蛋白 ,依赖酶分子中的RNA模板 ,通过逆转录合成染色体末端的端粒。近年来研究证实 ,端粒酶与细胞衰老及细胞分裂过程密切相关 ,尤其在恶性肿瘤组织中活性异常高。因此通过测定肿瘤组织、癌旁细胞及脱落细胞等端粒酶活性 ,可用于癌症的临床诊断、疗效观察、愈后及病理机制的研究。国外已经有对肾癌组织的端粒酶活性进行测定但都为定性 ,国内未见报道。本实验采用TRAP -ELISA技术对肾癌组织中端粒酶活性进行定量检测 ,现将结果报告如下。1 材料与方法1 1 样本来源 :组织标本均来自白…  相似文献   
2.
3.
蜘蛛丝蛋白天然基因的体外表达受诸多因素的限制。本研究在获得生长于中国的Nephila clavipes蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2 cDNA(Genbank Accession No. AF441245)的基础上,利用限制性内切酶双酶切反应构建含有Spidroin2 cDNA的重组表达质粒pET-28b(+)-Sp。将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞感受态菌中,以不同浓度的IPTG进行诱导,并通过诱导时间、培养温度、加入外源丙氨酸等途径提高Spidroin2 cDNA的表达量,同时利用多克隆抗体对表达产物进行Western blot检测。重组质粒pET-28b(+)-Sp的测序结果表明Spidroin2 cDNA基因以正确的阅读框插入到原核表达载体中;SDS-PAGE结果表明菌体表达蛋白中存在着大小约为31 kDa的目的蛋白带(加入外源丙氨酸条件下),Western blot检测结果进一步证实,目的基因在大肠杆菌中得到正确表达。本研究证实,蜘蛛牵引丝蛋白Spidroin2 cDNA可在原核细胞内正确表达,外源丙氨酸的加入对于提高天然蜘蛛丝蛋白基因在原核系统的表达作用明显。  相似文献   
4.
李鹏  吴东林  马鹤雯  杨焕民  张玉静 《遗传》2002,24(2):219-222
端粒酶是真核细胞体内的一种核糖核酸蛋白质复合体,是一种特殊的DNA聚合酶,具有延伸DNA末端的功能,能够维持端粒长度和功能,TERT具有反转录酶活性。在大多数体细胞和原代细胞中,端粒酶活性很低,通常检测不到,但在肿瘤细胞中,端粒酶则被广泛激活,因此认为端粒酶与肿瘤的发生具有密切的关系,本介绍了应用端粒酶阴性鼠研究端粒酶与G链悬垂和P53在肿瘤的发生过程中的相互关系。  相似文献   
5.
蜘蛛牵引丝蛋白cDNA的扩增、克隆与序列分析   总被引:4,自引:0,他引:4  
蜘蛛是一种能在同一生物体内产生具有不同功能的多种丝的生物。蜘蛛丝的本质是蛋白质。牵引丝 (Draglinesilk)是由蜘蛛的主壶腹腺 (Majorampullate ,MA)产生的 ,其较高的抗张强度 (4× 10 9N m2 )与弹性 (35 % ) [1 ,2 ] ,使之成为一种有广阔应用前景的生物材料。目前 ,国外已有实验室通过构建cDNA文库的方法获得Nephilaclavipes中的两个牵引丝蛋白Spidroin1与Spidroin2的cDNA片段[3 ,4] ;但国内尚未见有相关报道。本文介绍的工作是利用简单便捷的PCR技术对牵引丝…  相似文献   
6.
实时荧光定量PCR技术及其应用   总被引:72,自引:0,他引:72  
实时荧光定量PCR技术是一种多色荧光检测核酸定量技术,该简要介绍实时荧光定量PCR技术的原理及其应用。  相似文献   
7.
将HIV-1 p24基因插入至人工设计的复合多表位基因MEG中, 获得嵌合基因MEGp24; 将MEGp24插入到转移载体pUTA2复合启动子ATI-P7.5×20下游, 构建出鸡痘病毒重组转移质粒; 经转染和BrdU加压筛选, 以基因组PCR和Western blot法筛选出重组病毒; 将重组病毒大量制备并纯化后, 分别于0, 14, 42天肌肉注射免疫BALB/c小鼠; 第3次免疫后一周, 采集小鼠全血与脾脏, 分离血清并无菌制备脾淋巴细胞, ELISA法检测小鼠血清HIV-1抗体、脾细胞培养上清中Th1类细胞因子IFN-α和IL-2的含量, 流式细胞仪测定CD4+, CD8+ T淋巴细胞亚类数量, 乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾特异性CTL杀伤活性. 结果表明, 重组病毒刺激小鼠产生HIV-1特异性抗体, 出现T细胞亚类数量增加, 产生针对HIV-1 H-2d限制性CTL表位的特异性靶细胞杀伤作用, 同时免疫小鼠脾细胞在HIV-1抗原肽的刺激下分泌Th1类细胞因子的水平大幅增加. 研究提示多表位嵌合基因重组FPV疫苗具有良好的免疫原性, 可诱导小鼠产生HIV-1特异性细胞和体液免疫应答.  相似文献   
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