抗腺苷酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

克隆了6株稳定分泌抗腺苷酸激酶(Adenylate kinase,AK)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并鉴定或测定了其中3株细胞所分泌抗体的亚型和分子量.通过测定抗体和固相及均相抗原的结合能力,发现McAb3D3与固定化及溶液中腺苷酸激酶的亲和常数分别为8.4×10⁸和7.0×10~4(mol·L^-1)^-1,而McAb4D8与固定化及溶液中腺苷酸激酶的亲和常数分别为9.6×10⁸和3.9×10⁶(mol·L.¹)^-1McAb3D3和McAb4D8与不同存在形式抗原之间亲和常数如此大的差别,说明这2个抗体更适合与固定化腺苷酸激酶的结合.由于蛋白质分子常因吸附在酶标板上而发生部分变性,所以用间接ELISA方法筛选出的单克隆抗体McAb3D3和McAb4D8可能是针对部分变性腺苷酸激酶分子的.这2种抗腺苷酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定为我们进一步将其用于蛋白质折叠机制的研究奠定了基础.     

Monoclonal antibody, a novel probe for protein folding

Ｈｙｂｒｉｄｏｍａａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｒｅａｐｏｗｅｒｆｕｌｔｏｏｌｆｏｒｓｔｕｄｙｉｎｇｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｏｗｉｎｇｔｏｔｈｅｉｒａｂｉｌｉｔｙｔｏｒｅｃｏｇｎｉｚｅａｎｄｂｉｎｄｔｈｅｉｒｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｎｔｉｇｅｎｓａｔｓｐｅｃｉａｌｒｅｇｉｏｎｓ(ｉ.ｅ.ｅｐｉｔｏｐｅ)ｗｉｔｈｈｉｇｈｅｆｆｉｃａｃｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ.Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ,ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｔｈｅｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｄｅｐｅｎｄｅｎ…     

单克隆抗体——研究蛋白质折叠的新探针

利用竞争ELISA的方法 ,发现溶液状态下全酶SNaseR及其 7个N -末端肽段与McAb2C9之间的结合存在差别 ,其中SNR1 2 1 ,SNR1 0 2 ,SNR79,SNR5 2及全酶SNaseR能够与抗体较好地结合 ,而SNR1 41 ,SNR1 35 ,SNR1 1 0与抗体结合很弱 .由于全酶和SNR5 2均能与McAb2C9紧密结合 ,其抗原决定簇应该包含在 - 6～5 2序列中 .因此 ,不同长度的肽段与抗体结合能力直接与抗原决定簇的可接近程度相关 .比较不同长度的肽段与单抗McAb2C9的结合能力 ,清楚地表明肽链在从N 末端向C -末端延伸的过程中 ,其构象在不断调整直至形成完整的功能蛋白 ,这一结果有力地支持邹氏新生肽链折叠假说 .单克隆抗体作为一种新型探针 ,可为蛋白质折叠机制的研究提供重要的信息 .     

Preparation and characterization of monoclonal antibodies against adenylate kinase

Six hybridoma cell lines that can continuously secrete monoclonal antibodies against adenylate kinase (AK) have been produced. The characteristics including the subclass and molecular weight of monoclonal antibodies manufactured by these strains are also determined. Further studies show that the two monoclonal antibodies McAb3D3 and McAMD8 bind easily with AK absorbed on microtitration plates, with affinity constants of 8.4 × 108 M-1 and 9.6 × 108 M-1, while their interactions to AK in solution are much weaker, with affinity constants of 7.0 × 104 M-1 and 3.9×106M-1, respectively. Thus, McAb3D3 and McAMD8 react preferentially to the immobilized AKs. Since pro-teins are often partially denatured when absorbed on microtitration plates, it is suggested that both McAb3D3 and McAMD8 are directed against non-native AK.     

怀念邹承鲁先生及我在十二室求学的日子

<正>我是1992年10—11月份通过厦门大学生物化学教研室的主任颜思旭老师的大力推荐，有幸免试录取在邹承鲁先生研究室读研究生。颜老师是知名的酶学研究专家，和邹先生及生物物理研究所生物大分子国家重点实验室其他老师有很密切的联系，经常参加也曾经组织举办全国酶学学术讨论会，申请国家实验室开放研究基金等。颜老师特别关注学生的成长，