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细胞周期蛋白(cyclin)D在鼻咽癌中的表达及功能初?… 总被引:1,自引:0,他引:1
探讨了细胞周期蛋白(cyclin)D在EB病毒(Epstein-Barr virus)潜伏膜蛋白1(latent membrane protein,LMP1)阳性和阴性表达的鼻咽癌细胞5系中的表达特征,利用流式细胞仪同时从DNA及蛋白质水平初步分析了cyclin D1在鼻咽癌细胞系中的功能。Western印迹的结果发现cyclinh D1在CNE-LMP1中过表达,在HNE1中表达较弱;Cycli 相似文献
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Tet调控的EB病毒LMP1基因导入鼻咽癌细胞系表达的研究 总被引:12,自引:2,他引:10
本文利用Tet-on基因表达系统建立了一株可诱导EB病毒LMP1基因表达的鼻咽癌细胞株。首先将Tet-on基因调控系统的调节质粒pTet-on导入鼻咽癌细胞系HNE2中,用rtTA反应性芝光素酶报道基因pTRE-luc挑选高诱导、低背景的克隆,第二轮转染将构建的反应质粒pTRE-LMP1导入得到稳定转染的阳性克隆,对各克隆用Western印迹方法进行强力霉素诱导效应检测,其中L7对Dox具有良好的 相似文献
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本文报道以人Epstein-Barr病毒的潜伏膜蛋白基因BNLF-1作为目标基因,插入至逆转录病毒载体pZipNeoSV(x)的克隆位点上,由此获得重组逆转录病毒载体pZipNeoSV(x)-LMP及其反义载体pZipNeoSV(x)-anti-LMP,通过质粒DNA的电转染和G418培养基筛选,然后对10个抗性克隆进行基因整合分析,获得6个含MLV-LTR/BNLF-1融合基因的阳性克隆,采用Northern杂交及Western印迹证明,在克隆细胞中表达了2.6kb的mRNA片段及相应的蛋白质分子,这是由BNLF-1基因的EDL1启动子表达的产物。 相似文献
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利用DNA重组技术,将转录因子NF-κBp50基因片段插入pGEX-2T质粒载体,经DNA序列分析证明克隆的正确性.将重组的pGEX-2T/p50转化入大肠杆菌JM109,表达出pGEX-2T/p50融合蛋白.经WesternBlot检测证实表达产物对抗p50c的抗体呈特异性反应,表明克隆的正确性,并成功地应用纯化的p50蛋白制备了免疫血清.为进一步对NF-κB的功能进行研究打下了良好的基础 相似文献
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以Epstein-Barr病毒(EBV)DNA聚合酶为抗原,建立了简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌诊断方法。构建原表达载体pRSET-DNA聚合酶及其亚克隆PRSET-A1和BL21(DE3)中表达的产物,经Western-blot检测其抗原性并用于检测鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)病人血清中的抗体。在DPC病人血清中存在抗EB病毒DNA聚合酶的IgG抗体,并证明 相似文献
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Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白(LMP)基因在哺乳动物传代细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
EB病毒潜伏膜蛋白(LMP)是由病毒编码的主要的与病毒致宿主细胞潜伏感染有关的蛋白之一。我们用基因重组技术,把含有LMP基因(BNLF1)3个外显子(exon)开放阅读框架(ORF)的长1.80kbp的DNA片段,和能分解HygromycinB的含有SV40早期启动子和HgryomycinB磷酸转移酶全基因(长1025bp)的DNA片段(长1.60bp),同时重组于亚克隆载体pBluescriptSK(pBS)中,并使该重组质粒pBS-LMP-Hyg(长5767bp)在乳地鼠肾传代细胞(BHK)中获得表达。BHK细胞在经此重组质粒转染后,LMP阳性细胞是2%,在HygromycinB的持续压力下,LMP表达细胞率可达20%。3个月后,LMP表达细胞逐渐减少。5个月后,不能测到LMP表达细胞。经免疫荧光和蛋白印迹(Westemblot)实验证实,人鼻咽癌、风湿性关节炎和正常人血清中不含有抗LMP抗体。 相似文献
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以 P R R S V 弱毒株膜蛋白( M) 和核衣壳( N) 蛋白基因为模板,设计的一对含有 Eco R I 和 Bam H I酶切位点的引物,通过 R T P C R 扩增出一约900 bp 的 M N 基因片段,将此基因片段成功克隆于高效表达载体p B V220 ,构建成重组质粒p B V M N,导入大肠杆菌 D H5α,经温敏诱导,成功地表达了 M N 基因。表达产物经 S D S P A G E 电泳和 Western blot 印迹分析,其分子量约34 k D,与兔抗 P R R S V 高免血清发生反应,经光密度扫描分析,表达产物量占菌体总蛋白的12 % 。该研究为 P R R S 基因诊断抗原的研制奠定了基础 相似文献
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MKP—1在血管紧张素Ⅱ导致心肌肥大反应中的调控作用 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究主要从丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)角度,研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在血管紧张素Ⅱ介导的新生大鼠心肌细胞肥大反应中的作用及调控机制。实验以心肌细胞蛋白合成速率、蛋白含量及细胞表面积作为心肌肥大反应的指标,以凝胶内MBP原位磷酸化测定MAPK活性,以免疫印迹法(Western boltting)分别测定MKP-1及磷酸化p44MAPK、p42MAPK蛋白表达。结果发 相似文献
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实验分为白介素-1(IL-1)预处理组和非预处理组,脂质体介导反义IL-1 受体相关激酶-1(IRAK-1)寡核苷酸(ODN) 转染HepG2 细胞,用w estern 杂交分析IRAK-1 表达水平,以夹心酶联免疫吸附测定法检测NF-κB含量. 结果表明,IL-1 非预处理组反义IRAK-1 ODN不能抑制IRAK-1 表达和NF-κB活化,而预处理组IRAK-1 表达和NF-κB活化受到明显抑制. 反义IRAK-1 ODN 对NF-κB活化的抑制作用具有时间(5~24 h)和剂量(1~8 μg)依赖性. 说明IL-1 预刺激在反义IRAK-1 ODN抑制IL-1 诱导的NF-κB活化中起决定性作用. 相似文献
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殷莉群 《国外医学:分子生物学分册》2000,22(4):223-227
真核细胞枋转导因子Rel/NF-κB家族广泛调控着自昆虫至人类的免疫和炎症反应中一系列基因的表达。静息状态下,NF-κB二聚体与抑制性蛋白IκB结合而存在于胞质中,当细胞受外源性刺激哩,NF-κB活化进入核内发挥其功能。目前,外源性信号活化NF-κB的机制已初步阐明,Rel/NF-κB/IκB/IKK信号转导途径在蛋白质水平的相互调控,以及在肿瘤发生中的意义的研究也已获得一定进展。本文综述了近年来 相似文献
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将抗癌胚抗原单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTa中,在粉纹夜蛾Tn-5B1-4细胞中进行表达。SDS-PAGE分析结果表明,表达产物分子量为41kD左右,Western印迹分析结果表明,以HRP标记的生物素进行蛋白质印迹在41kD处可见表达条带,表明融合蛋白能特异性的与生物素结合,放射免疫分析表明重组杆状病毒表达产生的ScFv-CS蛋白能特异性结合癌胚 相似文献
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Epstein—Barr病毒基因组在鼻咽癌组织中转录的特征 总被引:2,自引:0,他引:2
对EB病毒基因在鼻咽癌活检组织细胞内的转录进行了较系统的探测。实验结果表明,EB病毒基因组在鼻咽癌活检组织中以附加体(Episome)形式存在,而其基因转录有如下特征:(1)EB病毒在所有鼻咽癌组织细胞中都表达EBNA-1,并且此基因转录产物由一个在BamHI-F区的启动子(Fp)驱动;(2)潜伏感染膜蛋白(Latent membrane protein,LMP)和末端蛋白(Terminal pr 相似文献
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以融合蛋白形式在大肠杆菌中表达人MCP—1 总被引:2,自引:0,他引:2
将编码人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pEX31A中,在大肠杆菌中表达出MS2/MCP-1融合蛋白,该表达产物约占菌体总蛋白的15%左右,Western blot检测表明,表达产物可与MCP-1抗体特异反应,采用琼脂糖平板法进行活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性,说明N端融合一段细菌蛋白对MCP-1有无趋化活性可能没有影响。 相似文献
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核因子-κB的研究进展 总被引:5,自引:0,他引:5
机体对损伤及微生物入侵进行防御反应时,活化的核因子-κB(NF-κΒ)可诱导细胞合成各种生物大分子。细胞处于静息状态时,NF-κB与κB抑制蛋白(IκBs)结合形成三聚体存在于细胞质内。当细胞受到外界因素刺激时,NF-κB与IκBs分离,NF-κB进入细胞核内,其亚基形成环状结构与DNA接触,启动基因转录。随后,新合成的IκBs又与NF-κB结合返回细胞质。不同的IκBs亚型发挥不同的生理功能。同时,对NF-κB的生理功能也作了介绍。 相似文献
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利用体外定点突变技术获得SypY279F,Y304F和Y546F突变的cDNA,将这些突变体和野生型Syp分别构pXM真核表达载体,转入K562细胞,经Western印迹证明,各转染K562细胞中都有Syp蛋白的表达。免疫沉淀与免疫印迹结果发现WT,Y279F,Y304F和Y546F等4种Syp在胞内均能直接与Bcr-Abl结合,体外结合实验结果表明Y304F突变导致了Syp不能与Shc结合,T2 相似文献
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重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)融合蛋白的高效表达及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)参与了许多细胞生长和分化的调控过程。本文采用重组DNA技术在大肠杆菌中高效表达了人bFGF。首先将编码人bFGF基因克隆到pXT表达载体中与其上游的一短S导肽共一阅读框架,bFGF基因的表达受强的T7启动子调控。采用BL21(DE3)大肠杆菌作为宿主菌,用IPTG诱导BL21(DE3)细菌合成的T7RNA聚合酶,后者可催化高水平的bFGF基因表达,其bFGF产量可占总菌体蛋白的42.5%。采用肝素Sepharose一步亲和层析法直接从诱导后的细菌裂解产物中得到纯化的重组人bFGF蛋白。经Western印迹分析证明该蛋白可被人bFGF特异性单克隆抗体所识别。进一步研究证明该蛋白具有刺激NR6R-3T3成纤维细胞增殖的生物学活性,并且这一活性可被人bFGF特异性中和抗体所中和。 相似文献