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人胃癌细胞一种高表达基因的克隆及序列测定 总被引:2,自引:0,他引:2
采用DDRT-PCR法,以人胃上皮细胞GES-1为对照,从人胃癌细胞SGC-7901中克隆高表达基因,并对所克隆的基因进行斑点杂交分析, 序列测定,序列相似性分析及开放读框分析.斑点杂交分析结果表明所获克隆YA61为人胃癌细胞SGC-7901中高表达基因.序列相似性分析结果表明该基因序列为一新基因序列.GenBank收录号为AF220415.开放读框分析结果表明该基因序列有一完全开放读框. 相似文献
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乙肝病毒表面抗原preS1与人肿瘤坏死因子α融合基因的表达 总被引:6,自引:0,他引:6
用PCR法获得了HBsAgpreS1(1-65)肽段基因,将该基因融合在肿瘤坏死因子(hTNFα)之后,插入表达载体PSB-92中,使融合基因的5′端直接置于大肠肝菌PL启动子下游,采用30℃培养,42℃诱导,获得了TNF与preS1(1-65)融合蛋白的表达产物。SDS-PAGE电泳显示表达产物为25kD,约占细菌总蛋白的35%。表达产物经Westernblot验证,能分别特异地与hTNFα抗体与preS1抗体结合,稀释复性后,该融合蛋白还具有TNF的生理功能(对L929细胞的细胞毒活性)。经DNA序列测定,preS1(1-65)肽基因正确地融合在hTNFα基因之后。该结果提供了一种制备preS1的新方法,为进一步开展治疗肝癌和乙肝的导向药物打下基础。 相似文献
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冷适应大鼠脑垂体、下丘脑、脾淋巴细胞和血浆β-内啡肽及其mRNA的变化 总被引:4,自引:0,他引:4
本文采用β-内啡肽(β-EP)mRNA打点杂交,反相高效液相色谱和放免测定研究了冷适应SD雄性大鼠垂体、下丘脑、淋巴细胞(LC)和血浆β-EP及其mRNA的变化,结果为:(1)冷暴一周时垂体β-EP mRNA明显增加,从而激活细胞免疫功能。(2)免疫中枢下丘脑和LC β-EP mRNA在冷适应建立(冷暴二周)时增加。(3)血浆β-EP从冷暴二周起持续增加,增强细胞免疫功能。虽然LC和血浆β-EP产物增加,但是垂体β-EP mRNA量从冷暴二周起恢复到对照组水平,很可能是通过LC-垂体-下丘脑轴,信息反馈到中枢神经系统造成的。 相似文献
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抗人CD8单抗κ轻链可变区基因的克隆和序列测定 总被引:6,自引:0,他引:6
OK T8杂交瘤细胞株从American typecuhure collection(ATCC)获得,产生抗人CD8分子的单克隆抗体IgG2a(γ2a,κ),为了对这一鼠源性单抗进行基因工程改造,我们首先克隆了该单抗的κ轻链可变区基因,并测定了其碱基序列,现将结果报道如下: 通过计算机查找并分析了已发表的几十株抗体的轻链可变区基因序列,经比较其5’端保守序列和J区序列,设计了一对DNA引物:GTGAATTCATGGACATCCAGATGACCCA- 相似文献
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一种快速微量的双温PCR法 总被引:2,自引:0,他引:2
PCR技术能特异,直接和高效的扩增各种对象的基因.本文建立了一种快速,微量的双温度点法PCR,并探讨了该PCR法的最适条件.旨在使PCR技术常规化. 1 PCR方法 PCR特异引物为HIV-IPr和HIV-IPr_2,模板为pARV-2/7A质粒(内含HIV-1全长cDNA).反应总体积分别为10,20,50,100μ1,其中主要含有HIV-lPr_1和HIV-lPr_2各50pmol/L,dNTP为200 相似文献
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由于精胺(spermine)能特异地刺激哺乳动物tRNA~(Ile)的氨基酰化,本文用纯化的牛肝tRNA~(Ile)观察了精胺和Mg(2+)对tRNA~(Ile)CD光谱的影响。结果显示:Mg(2+)可使牛肝tRNA~(Ile)CD光谱峰向短波方向偏移2nm,波峰为263nm,峰值被增大约10%,ΔθMg(2+)=2.3×103deg·cm2/dmol;而精胺使牛肝tRNA~(Ile)CD光谱峰减少40%,Δθspermine=1×10(-4)deg·cm2/dmol;精胺和Mg(2+)对肝tRNA~(Ile)-IleRS复合物或IleRS的CD光谱基本无影响。表明Mg(2+)和精胺可影响牛肝tRNA~(Ile)的构象。实验同时以酵母tRNA(Phe)和E·colitRNA~(Ile)作为对照。 相似文献
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利用 PCR扩增出人血管生成素 (h ANG)成熟肽的基因片段 .与绿脓杆菌外毒素缺失突变体PE40的基因连接后 ,克隆入 p UC1 9载体中 .测序后克隆入表达载体 p RSETB,构建成 h ANG-PE40融合基因的表达载体 .IPTG诱导 ,表达出分子量约为 58k D的 His6- ANG- PE40融合蛋白 ,占菌体总蛋白的 8% .Ni2 +- NTA树脂纯化表达蛋白 ,SDS- PAGE结果显示纯化重组蛋白为单一条带 .鸡胚绒毛尿囊膜鉴定表明重组蛋白体外能够有效地抑制血管的形成 . 相似文献