酸溶辅助超声波法提取类球红细菌类胡萝卜素条件优化

通过单因素和正交试验,对类球红细菌3757产类胡萝卜素的提取条件进行了研究。先采用超声波法、酸溶法、研磨法、冻融法、酸溶辅助超声波法和冻融辅助超声波法优化了从类球红细菌3757菌株中提取类胡萝卜素的方法,然后开展了酸溶辅助超声波法的单因素和正交实验,最后进行了重复性实验。结果表明,酸溶辅助超声波法是较优的提取方法,丙酮是较好的提取溶剂。最佳提取条件为料液比110、超声波处理总时间20 min、酸浓度3 mol/L、酸溶时间25 min、超声波振幅40%、超声工作/间隔时间2 min/1 min、酸溶温度27℃,实验重现较好。优化后类胡萝卜素的提取率较优化前提高了74.8%,为其产业化创造了条件。     

Mn-SOD与抗癌胚抗原单链抗体基因的融合及高效表达

将Ｍｎ－ＳＯＤ与抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因（Ｓｃ－Ｆｖ ｇｅｎｅ）融合,重组到含Ｔ７启动子的表达载体ｐＥＴ－２２ｂ（＋）中,构建表达质粒ｐＥＴＭｎ－ＳＯＤ－ＳｃＦｖ,并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,进行高效表达,表达物占菌体可溶性总蛋白的２４％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质和迹图谱显示表达物分子量为４５ｋＤ与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在大肠杆菌中为泌型表达有利于纯化。ＲＩＡ测定表     

植物对二氧化硫的反应和抗性研究——Ⅱ.质膜透性的变化和二氧化硫伤害

质膜透性的改变和二氧化硫伤害密切相关。当二氧化硫浓度超过伤害阈值时,叶组织的离子渗漏大量增加。渗漏越多,以后出现的可见伤害症状亦趋严重。如二氧化硫浓度在阈值之下,则膜透性基本不变。质膜受损表现为伤害的前奏,膜透性增加引起离子平衡的破坏可能是二氧化硫伤害的一个原因。接触二氧化硫时透性的变化可作为不同种和品种抗性强弱的指标。     

类球红细菌发酵生产类胡萝卜素条件优化

本文对类球红细菌3757产类胡萝卜素进行了发酵条件优化,结果得到了较优的培养基组成:葡萄糖2%,苹果酸钠0.5%,酵母浸粉1.3%,硫酸铵0.9%,磷酸氢二钾0.09%,磷酸二氢钾0.06%,生长因子溶液1%,p H 8.0;其中,生长因子溶液配方:维生素B1 0.1%,烟酰胺(VPP)0.1%,生物素0.0016%。较优培养条件为:接种量5%,转速200 r/min,种龄24 h,发酵温度32℃,发酵时间40 h。优化后类胡萝卜素产率较优化前提高了76.2%。     

抗癌胚抗原嵌合重链与核心链霉亲和素基因的融合及 …

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单克隆抗体的重链可变区与人的恒定区（Ｃγ３）连接,制备抗癌胚抗原嵌合重链用于放免治疗及其他导向治疗,可减少人抗鼠抗体反应（ＨＡＭＡ）。为纯化及核素标记抗体,将嵌合重链基因与核心链霉亲和素基因融合。融合基因在大肠杆菌得到高效表达,表达量占菌体总蛋白的２４％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为７０ｋＤ,与其基因编码蛋白质的理论推算值相符。以ＨＲＰ标记的生物素作为     

类球红细菌类胡萝卜素抗氧化活性研究

研究了研磨法、超声波法、酸溶辅助超声波法和菌体浓度对类球红细菌类胡萝卜素抗氧化活性的影响。结果表明,不同提取方法和固液比条件下,类球红细菌类胡萝卜素均具有清除DPPH自由基能力、抗脂质过氧化能力和还原能力。酸溶辅助超声波法提取的类胡萝卜素产率最高、抗氧化活性最好。类球红细菌类胡萝卜素具有一定的抗氧化活性,其抗氧化活性随菌体浓度的增加而增加。     

抗癌胚抗原单链抗体基因在家蚕细胞和幼虫中的表达

将抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫＨｉｓ, 与修饰的家蚕核型多角体病毒ＢｍＢａｃＰＡＫＤＮＡ共转染家蚕细胞, 经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗ＣＥＡＳｃＦｖ 基因的重组病毒ＢｍＢａｃＳｃＦｖ。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫, 在两者中均得到了高效表达, 产物分子量为２８ｋＤ, 前者占细胞总蛋白的６ ％ , 后者为０ ．３ ｍｇ／ 蚕。目的基因在家蚕细胞和幼虫中表达产物经Ｎｉ２＋ＩＤＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和柱纯化, 前者纯度可达９０％ 以上, 后者纯度较低; 纯化后的融合蛋白具有ＣＥＡ 结合活力, 其亲和常数分别为５ ．４×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 和２．３ ×１０８／ｍｏｌ·Ｌ－１ , 略低于其亲本单抗Ｅ７Ｂ１０ ２．７ ×１０９／ｍｏｌ·Ｌ－ １ 。     

中枢神经系统靶向性Mn-SOD的克隆和在大肠杆菌中的表达研究

靶向性超氧化物歧化酶(SOD)是治疗氧自由基引起神经细胞损伤所致疾病等的有效途径.将破伤风毒素C部分（tetanus toxin fragment C,TTC）基因与编码Mn-SOD的cDNA融合克隆进pET-22b(+)载体,1 mmol/L异丙基-D-硫代半乳糖（IPTG）诱导在大肠杆菌中表达.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)图谱可见约71 ku有表达产物条带,与理论计算值相符;蛋白质印迹（Western blot）分析显示,表达产物与抗Mn-SOD及破伤风毒素的多抗有免疫反应,而且表达产物用邻苯三酚自氧化法测定具有SOD活性.融合蛋白可作为有效的试剂靶向性输送Mn-SOD到神经元细胞,这为进一步研究靶向性SOD的治疗中枢神经系统的相关疾病提供了基础.     

类球红细菌SOD发酵条件优化

本文对类球红细菌3757产SOD进行了发酵条件优化,结果得到了较优的培养基组成(g/L):苹果酸3,胰蛋白胨4,磷酸氢二钾0.9,磷酸二氢钾O.6,硫酸镁0.2,无水氯化钙0.075,硫酸亚铁0.012,EDATA 0.02,微量元素溶液10 mL,生长因子溶液10 mL,pH 7.5。其中,微量元素溶液配方(g/L):硼酸2.8,硫酸锰1.6,钼酸钠0.76,硫酸锌0.24,硫酸铜0.04;生长因子溶液配方(g/L):维生素B_1 1,烟酰胺(VPP)1,生物素0.016,对氨基苯甲酸1。较优培养条件为:接种量5%,转速150 r/min,种龄24 h,发酵温度32℃,发酵时间24 h。优化后酶活力较优化前提高了88.0%。     

镉胁迫对旱柳光合作用和内肽酶变化的影响

通过水培方法,添加不同浓度CdCl2(0、5、25、50 μmol·L^-1)处理14 d,测定叶绿素含量、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)活性、游离氨基酸含量及内肽酶活性,调查Cd对旱柳光合作用和内肽酶变化活性影响。结果发现：Cd处理降低了总叶绿素、叶绿素a、b含量; Rubisco活性随着介质中Cd浓度增加而降低;Cd抑制根和叶PEPC活性;同对照相比,根中游离氨基酸含量没有显著变化,而叶中游离氨基酸含量增加;不同浓度Cd处理降低根的内肽酶活性,高浓度Cd使叶内肽酶活力增加。这些结果表明,Cd通过降低叶绿素含量,促进叶内肽酶活性和抑制了CO₂羧化酶活性来影响旱柳光合作用。