Epstein—Barr病毒BCRF1的基因重组质粒的构建及其在真核细胞中的表达

应用基因重组技术,把编码ＥＢ病毒早期蛋白ＢＣＲＦ１基因重组于真核表达载体ｐＳＧ５中,并使该基因在乳地鼠肾（ＢＨＫ）传代细胞中获得良好表达,表达率为０．５％,血清学实验证实,鼻咽癌,类风湿性关节病人和正常人血清中均不同程度地含有ＩｇＧ／ＢＣＲＦ１抗体,抗体阳性率分别主９２％,８６％和７７％,几何平均滴度（ＧＭＴ）分别是：１：１６．３５,１：１４．７２和１：１０．１５。两组病人和正常人血清中ＩｇＡ／Ｂ     

应用基因重组Epstein-Barr病毒早期抗原P83蛋白检测鼻咽癌患者血清中的IgA/EA抗体

将pUCB质粒表达的P83蛋白应用于免疫印迹法(IB)和ELISA中,检测了85例鼻咽癌(NPC)患者和100例健康人血清,同时与免疫酶法(IE)作比较。结果表明,免疫印迹法对NPC患者血清阳性检出率为94％;ELISA法阳性检出率为88％;而IE法阳性率为64％。三种方法检测健康人血清出现低水平IgA/EA抗体的阳性率分别为4％、3％及2％。用IE法检测IgA/EA抗体为阴性的NPC患者血清,用IB法检测的阳性率达87％,ELISA法阳性检出率为77％。IB法与ELISA法之间具有较好的正相关(r=0.67,P<0.01)。     

人嗜T淋巴细胞白血病病毒I型(HTLV-Ⅰ)核心蛋白(p24)基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

人嗜Ｔ淋巴细胞白血病病毒Ｉ型（ＨＴＬＶ－Ⅰ）核心蛋白（ｐ２４）基因的克隆及在大肠杆菌中的表达段震峰,滕志平,纪志武,陈国敏,张永利,曾毅（中国预防医学科学院病毒学研究所,北京１０００５２）关键词人嗜Ｔ淋巴细胞白血病病毒Ｉ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）,聚合酶链反...     

人精液对RAJI细胞中EPSTEIN-BARR病毒早期抗原的诱导

在大戟科、瑞香科、豆科和其它科植物中,发现有些植物含有能诱导人伯基特淋巴瘤细胞——Raji细胞中EB病毒早期抗原的物质,并已证明其中有的是很强的促癌物质,如12-0-十四烷酰巴豆醇-13乙酸酯(TPA)、桐油提纯的HHPA、芫花和黄芫花等。某些人的精液也含有能激活EB病毒的物质。本文报告中国人的精液,以及人精液与从宫颈癌病人分离的细菌培养液,对EB病毒早期抗原的诱导作用和协同诱导作用。     

Epstein-Barr病毒诱导永生化人上皮细胞恶性转化

为了使ＥＢ病毒能直接感染人上皮细胞,将ｐＳＧ－ＣＲ２－Ｈｙｇ载体转入永生化人上皮细胞（２９３细胞）中。通过间接免疫荧光法测定发现,转化的细胞表达ＥＢ病毒受体。用ＥＢ病毒感染ＣＲ２－２９３细胞后,２３％的细胞可表达ＥＢ病毒抗原。用ＴＰＡ作用于这些细胞后,表达病毒抗原的细胞数增加。用ＰＣＲ法从ＥＢ病毒感染细胞ＤＮＡ中扩增出ＥＢ病毒ＤＮＡＷ片段。在ＴＰＡ持续作用下,ＥＢ病毒感染细胞的形态特征发生改变。把ＥＢ病毒感染细胞接种在裸鼠皮下,每周注射ＴＰＡ,可诱导细胞在裸鼠体内形成肿瘤。经组织病理检查确诊,肿瘤为低分化上皮细胞癌。杂交试验证明,肿瘤组织细胞中有ＥＢ病毒ＥＢＥＲｓ存在。上述结果表明,ＥＢ病毒在ＴＰＡ协同作用下,可诱导永生化上皮细胞恶性转化。     

利用脊髓灰质炎病毒5＇NCR和RNA聚合酶基因可提高外源基因表达

将含脊髓灰质炎病毒(PV)RNA聚合酶的不同长度基因片段克隆到载体pSG5质粒上,分别构建了4个表达RNA聚合酶的质粒.体外转录实验证明,pSG5-POL1.99和pSG5-POL2.03质粒转染细胞的提取物促进了特异的RNA转录,表明两质粒可表达RNA聚合酶.将PV的5＇NCR序列插在载体pGREEN LANTERN-1的CMV启动子下游,构建了pGREEN LANTERN-1-5＇NCR质粒;用LacZ基因替换GFP基因分别插入到PGREEN LANTERN-1和pGREEN LANTERN-1-5＇NCR质粒上,构建成 pLacZ LANTERN-1和pLacZ LANTERN-1-5＇NCR质粒.表达RNA聚合酶的质粒与pLacZ 5＇NCR调控表达报告基因的质粒共转染,明显提高了报告基因的表达水平,表明PV的表达调控元件和RNA聚合酶基因可用于构建外源基因高效表达载体.     

用重组Epstein-Barr病毒早期蛋白P83为抗原检测鼻咽癌病人血清中IgA抗体

以重组EB病毒早期蛋白P83为抗原,用Western blot检测了135份鼻咽癌病人和100份正常人血清中IgA/P83抗体,阳性率分别为96％和0,以常规的间接免疫酶法检测这两种血清中IgA/EA抗体,阳性率分别为71％和0。IgA/P83抗体的几何平均滴度较IgA/EA高4倍以上。这表明,用Western blot查IgA/P83敏感、特异,可替代用间接免疫酶法查IgA/EA用于鼻咽癌的早期诊断。     

Epstein-Barr病毒旱期抗原P138和P54基因的重组与表达

应用基因重组技术,将EB病毒早期抗原(EA)P138两个抗原部位的基因片段和早期抗原P54的完整基因重组,构建成质粒pUC B,转化大肠杆菌JM109获得高效表达。其产物为分子量83kD的P83。经Western blot检验证实,P83能与鼠抗P138和鼠抗P54两种单克隆抗体产生特异性反应。用P83检测30份鼻咽癌病人血清IgA类抗体100％阳性,30份正常人血清全部阴性。