几种植物中的过氧化物酶同工酶分析

过氧化物酶(E.C.1.11.1.7)是一族能够利用H_2O_2氧化供氢体的酶。它对H_2O_2的需求是非常专一的,而对供氢体的要求则较为广泛。酚类、胺类化合物、某些杂环化合物和一些无机离子等都可以作为过氧化物酶的供氢体。它们的催化反应式为: AH_2 H_2O_2(?)A 2H_2O式中AH_2为供氢体,A为氧化型产物,E为过氧化物酶。     

酿酒酵母中NAD激酶同功酶对偶数位不饱和脂肪酸β-氧化的影响

ATP-NAD激酶利用ATP,催化NAD磷酸化,生成NADP,而ATP-NADH激酶则催化NAD和NADH发生磷酸化。酿酒酵母细胞内存在三种NAD激酶同功酶Utr1p、Pos5p和Yef1p,它们都是ATP-NADH激酶,对细胞内NADP(H)的供应起到重要作用。酵母偶数位双键不饱和脂肪酸的β-氧化依赖于过氧化物酶体基质内的NADPH。通过构建NAD激酶基因的单、双基因缺失株,并验证它们和对照菌株对不饱和脂肪酸的氧化、利用能力,证实NAD激酶同功酶,尤其是Pos5p,对过氧化物酶体基质内NADP(H)的供应起着重要作用,并推测NADP可以从过氧化物酶体膜外转运至过氧化物酶体基质内。     

一种具有热滞活性的女贞叶质外体过氧化物酶

采用浸出离心法从女贞叶中分离的质外体蛋白,约占叶片可溶蛋白的1.63%,其中的质外体过氧化物酶占叶过氧化物酶(POD)总酶活性的3.14%.以凝胶过滤和离子交换层析分离纯化得到一分子量为62 kDa的质外体过氧化物酶,其对H202的表观km值为1.3 mmol-L-1,表观Vmax值为189.33 U·mg-1(蛋白);对愈创木酚的表观Km值为1.78 mmol-L-1,表观Vmax值为215.26U·mg-1(蛋白).在蛋白质浓度为10mg·mL-1时,其热滞活性为0.332℃.此种蛋白的酸性氨基酸含量和亲水性氨基酸含量较高,类似于沙冬青和黑麦的抗冻蛋白.     

大鼠肝细胞过氧化物酶体的提取

:采用蔗糖密度梯度离心法 ( 950 0 0× g,2 h)提取大鼠肝细胞过氧化物酶体 ,所得过氧化物酶体形态完整 ,纯度与肝匀浆相比提高了 2 6倍 ,仅有少量 ( 0 .5%～ 0 .9%)的微粒体和线粒体污染 ,回收率为 1 2 %。为研究过氧化物酶体提供了有效的分离方法。此法还可将过氧化物酶体、微粒体、线粒体同时进行分离。     

稻瘟病菌过氧化物酶体产生与降解的关键基因

过氧化物酶体(peroxisomes)是真核细胞中一类单层膜包被的细胞器,参与多种生化代谢.过氧化物酶体起源于内质网,过氧化物酶体形成相关的蛋白称为Peroxin,其编码基因通常写作PEX.细胞中过氧化物酶体的选择性消解称为过氧化物酶体自噬(pexophagy).参与细胞自噬(autophagy)的基因(ATG)大多参与过氧化物酶体自噬.近年来,丝状真菌中过氧化物酶体形成与降解机制的研究进展迅速,相关基因不断被鉴定.本文对相关研究进行了简要评述,并以稻瘟病菌为例,对丝状真菌基因组中可能的PEX和ATG基因进行了检索.发现稻瘟病菌中存在除PEX15,PEX17,PEX18,PEX21,PEX22,ATG19,ATG25,ATG30和ATG31之外的大多数PEX和ATG基因;同时,还存在多个丝状真菌特有的基因.说明过氧化物酶体的产生与消解在酵母、丝状真菌与哺乳动物之间相对保守,同时又各具特性.     

过氧化物同工酶谱带染色条件的探讨

研究了过氧化氢浓度在过氧化物同工酶电泳分析中对染色时间及酶带颜色深浅的影响,和相同的酶液在测定酶活性时过氧化氢浓度对测定结果的影响,以及两者之间的相关性。研究表明,过氧化氢的浓度在染色中对染色的时间和酶带的颜色深浅有明显的影响,在一定的范围内随着底物过氧化氢浓度的升高,酶的活性降低,染色时间变长,酶带颜色变浅。这种相关性与供氢体无关,它可指导酶带染色中过氧化氢的用量。     

过氧化物酶体降解与疾病

过氧化物酶体是细胞中一种参与脂肪酸代谢、缩醛磷脂合成和氧化应激等功能的细胞器,其数量会根据细胞和细胞所处微环境的不同而发生变化,这种变化又与过氧化物酶体本身的降解密切相关。虽然一直以来,过氧化物酶体都被线粒体的光芒所掩盖,但是近年来,随着过氧化物酶体研究的逐渐增多,人们对于过氧化物酶体的降解也有了更全面的了解。本文主要对哺乳动物过氧化物酶体的降解过程及其与疾病的关系作一综述,重点阐述过氧化物酶体自噬的基本过程,以加深对过氧化物酶体降解及其在疾病中作用的认识。     

酵母过氧化物酶体的形成机制

过氧化物酶体是细胞中一种重要的细胞器。过氧化物酶体在细胞功能的发挥和人体健康方面有着重要作用。目前,以酵母过氧化物酶体为模型,研究过氧化物酶体的形成机制是研究热点。从过氧化物酶体起源、生成方式介绍最新研究进展,总结在酵母细胞中参与过氧化物酶体形成的必需基因(pex),及其编码Peroxin蛋白在过氧化物酶体形成过程中的作用,阐述酵母过氧化物酶体的形成途径和形成机制,展望了研究前景。     

植物过氧化物酶研究进展

过氧化物酶 [peroxidase,POD,EC1 .1 1 .1 .7(X) ]是广泛存在于各种动物、植物和微生物体内的一类氧化酶。催化由过氧化氢参与的各种还原剂的氧化反应 :RH2 H2 O2 →2 H2 O R。植物过氧化物酶的研究可追溯到 1 80 9年用愈创树脂为底物进行的颜色反应。但直到一个世纪之后才开展此酶的分离和命名。已知的催化反应底物超过 2 0 0种 ,以及多种过氧化物和辅助因子。迄今被研究最深入的应首推辣根过氧化物酶 (horseradish pero-xidase,HRP)。早在 1 94 0年 ,Thorell即用电泳方法从部分纯化的辣根组织中区分出 2种不同的 HRP,之后此酶…     

含氢HTK液对大鼠供心保存中心肌细胞凋亡的影响

目的:研究合氢HTK液对供心保存过程中心肌细胞凋亡的影响.方法:SD大鼠随机分4组:对照组(保存液为HTK液)、H1组(保存液为含氢浓度约0.8mM的HTK液),H2组(含氢浓度约0.4mM的HTK液),H3组(含氢浓度约0.2mM的HTK液).采用Langendorff离体大鼠心脏灌注法,心脏分别在各组保存液中冷保存(4℃)6h,Tunel染色测定心肌细胞凋亡率,荧光定量实时PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA表达,分光光度法检测心肌组织中Caspase-3活性.结果:供心冷保存(4℃)6h后,H1、H2、H3组凋亡指数明显低于对照组.H1、H2、H3组的Bcl-2mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.01或P<0.05);对照组的Bax mRNA水平明显高于H1、H2、H3组(P<0.01或P<0.05),对照组caspase-3活性明显高于H1、H2、H3组(P<0.01).结论:舍氢HTK明显抑制供心保存时大鼠心脏心肌细胞凋亡.     

毕赤酵母过氧化物酶体吞噬的研究进展

过氧化物酶体吞噬是生物体的一种重要自我调控方式。过氧化物酶体吞噬是多种吞噬相关蛋白的共同作用,而且吞噬相关蛋白质之间的作用具有严格的时序性。由于毕赤酵母有两种吞噬方式、全基因组序列已知、基因操作技术成熟,所以毕赤酵母是研究过氧化物酶体吞噬的良好素材,也是目前研究的热点。本文对近年来毕赤酵母过氧化物酶体吞噬的启动、两种吞噬类型的形成、过氧化物酶体在液泡中降解的研究进行梳理,为毕赤酵母过氧化物酶体吞噬的进一步研究奠定基础。     

活性氧对巨噬细胞呼吸爆发影响及云芝多糖的保护作用

用化学发光法观察到叔丁基氢过氧化物对培养的小鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发有强烈的抑制作用。云芝多糖经腹腔注射后,能增强巨噬细胞呼吸爆发功能对叔丁基氢过氧化物损伤的抵抗力。云芝多糖处理的巨噬细胞谷胱甘肽过氧化物酶基础活力显著提高,在叔丁基氢过氧化物作用下,云芝多糖处理的巨噬细胞仍有较高的谷胱甘肽过氧化物酶活力。说明巨噬细胞的免疫功能与谷胱甘肽过氧化物酶活力有关,非特异性免疫多糖可提高细胞抗氧化能力,减轻活性氧损伤作用。     

实验性糖尿病大鼠肝过氧化物酶体脂肪酸β-氧化及D-双功能蛋白活性变化的初步研究

为研究过氧化物酶体脂肪酸β-氧化及D-双功能蛋白在糖尿病脂代谢紊乱中所起的作用,分析了链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肝脏过氧化物酶体数量和过氧化物酶体脂肪酸β-氧化及D-双功能蛋白活性的改变,并用蛋白质印迹检测过氧化氢酶和D-双功能蛋白的表达量.发现糖尿病大鼠肝脏过氧化物酶体增殖,过氧化氢酶蛋白量和酶活性显著增加,过氧化物酶体脂肪酸β-氧化增强,D-双功能蛋白含量和酶活性显著降低,脂酰CoA氧化酶、L-3-羟脂酰CoA脱氢酶活性显著增加.对过氧化物酶体脂肪酸β-氧化增强和D-双功能蛋白活性降低与糖尿病脂代谢紊乱的关系进行了初步探讨.     

口腔过氧化物酶系统研究进展

口腔过氧化物酶系统由过氧化物酶、过氧化氢 ( H2 O2 )和可被氧化的底物组成 ,是口腔中重要的非特异性防御因子 ,该系统可通过过氧化氢 ( H2 O2 )及氧化产物维持或促进口腔有益菌的生长和繁殖 ,同时抑制或杀灭致龋菌、牙周可疑病原菌及致口腔粘膜病微生物 ,调节口腔菌群的种类和数量 ,在维持口腔微生态平衡和口腔健康中起着重要的作用 ,本文拟对口腔过氧化物酶系统的组成、生物学功能及其应用作一综述。1　口腔过氧化物酶系统的组成口腔过氧化物酶系统 ( peroxidase system,PS)包括三个组份 :过氧化物酶 ( peroxidase,PO)、过氧化氢 ( H…     

微体的概念及其发展

微体是一种细胞器,其种类主要包括过氧化物酶体、糖酵解酶体和乙醛酸循环体。本文主要介绍了微体的概念及其发展,乙醛酸循环体和过氧化物酶体之间的关系,过氧化物酶体、糖酵解酶体和乙醛酸循环体的功能。     

厌氧原生动物的内共生甲烷菌及其氢酶的细胞化学研究

阿米巴鞭毛虫Psalteriomonas lanterna生活史分为鞭毛虫和阿米巴阶段。其培养液2%(V/V)氧时,细胞失去了内共生甲烷菌,继续培养在1%氧中,则鞭毛消失,小阿米巴出现。在1%氧条件下,阿米巴细胞生长较快,密度约1.2×104cells/ml,氧含量2.5%生长被抑制,超过7.5%细胞则死亡。无氧状态生长缓慢,加入甲酸甲烷杆菌(Methanobacterium formicicum Strain MsL)后,出现细胞密度增加的趋势。外萤光显微镜和电镜观察以及水洗P.lanterna后,培养液中生长的甲烷产物的事实证明;其细胞内含的萤光菌是甲烷杆菌(种类待定)。细胞化学染色法对细胞中氢酶的活性定位证实P.lanterna所含的类似微体的细胞器是氢体。染色结果:低浓度的戊二醛固定细胞,外加H2和苯异噻唑酞肼苯乙烯四唑(BspT)化合物,细胞的氢体膜周围有电子致密点生成。整个过程是在非常严格的厌氧条件下进行的。对照组以N2代替H2的细胞无上述反应。       

利用荧光蛋白标记研究稻瘟病菌有性世代的细胞结构

稻瘟病是水稻最重要的病害之一,同时稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)是植物病原真菌研究的模式生物。稻瘟病菌是异宗配合的子囊菌,但其有性世代的细胞学过程、形态结构、分子机制以及对病菌变异的贡献研究都较少,也缺乏必要的研究手段。该文利用荧光蛋白标记结合荧光染色的方法对稻瘟病菌有性世代结构进行了标记和显微观察,以期为稻瘟病菌有性生殖过程和机制研究提供方法与借鉴。将绿色荧光蛋白GFP和红色荧光蛋白m Cherry分别导入两个相对交配型的稻瘟病菌菌株Guy11(MAT1-2)和70-15(MAT1-1),各转化子及野生型按交配型组合对峙培养,观察有性世代结构中的荧光表达情况。结果表明,组蛋白H3启动子、核糖体蛋白RP27启动子和疏水蛋白MPG1启动子均可在稻瘟病菌有性孢子形成过程中高丰度表达。进一步利用这三种启动子和两种荧光蛋白对稻瘟病菌有性孢子的细胞器(细胞核、过氧化物酶体)进行标记和观察,结果表明,融合组蛋白H2B的m Cherry及融合核定位信号(NLS)的GFP均能有效标记子囊孢子细胞的细胞核,荧光集中而明亮;带有过氧化物酶体定位信号1(PTS1)的GFP可以有效地标记子囊孢子中的过氧化物酶体,每个细胞中均有数量不等的过氧化物酶体,表明子囊孢子中需要过氧化物酶体参与生化代谢。该文还利用脂肪染色剂尼罗红、BODIPY和细胞壁染色剂卡氏白结合荧光蛋白标记对子囊和子囊孢子进行组合染色。结果显示,尼罗红、BODIPY、卡氏白染色剂互不干扰,可以与不同颜色的荧光蛋白相互组合,从而更加清晰地标记子囊和子囊孢子的结构、细胞器和储藏物质。     

巨噬细胞炎症状态与过氧化物酶体增殖的相关性研究

肥胖引起巨噬细胞浸润机体组织,诱发慢性低度炎症反应,是形成胰岛素抵抗的重要诱因。因此研究影响巨噬细胞炎症状态的因素,有助于深入了解胰岛素抵抗的形成机理。该文通过免疫荧光、Real-time PCR等技术,研究巨噬细胞炎症状态与胞内过氧化物酶体数量之间的关系。结果表明,当巨噬细胞极化为炎症状态的M1型,胞内过氧化物酶体数量变化不显著;当巨噬细胞极化为抗炎状态的M2型,胞内过氧化物酶体数量显著升高。当饱和脂肪酸诱导巨噬细胞极化为炎症状态的类M1型,胞内过氧化物酶体数量变化不显著;当不饱和脂肪酸诱导的抗炎症状态的类M2型,胞内过氧化物酶体数量显著升高。此外,使用过氧化物酶体增殖缺陷型(Pex3~(–/–))巨噬细胞重复上述实验,也可以极化为M2/类M2型,呈现抗炎状态,但胞内过氧化物酶体数量无显著变化。综上所述,该研究发现巨噬细胞M2/类M2型极化能够诱导胞内过氧化物酶体增殖,但过氧化物酶体增殖不是M2/类M2型极化的必要条件。     

气候因子对三种豆科树种固氮的影响

研究了气候因子对台湾相思(Acacia confusa)、大叶相思(A．awriculaeformis)和南岭黄檀(Dalbergia balansae)根瘤固氮酶和吸氢酶活性的影响。3种树木根瘤均具有吸氢酶活性,外源H：可提高固氮酶活性,表明吸氢酶有助于固氮效率的提高。3树种根瘤的固氮活性有明显季节变化,夏秋活性较高,早春及冬季活性较低。离体根瘤固氮和吸H2活性表达的最适温度为25—30℃。光照强度及土壤湿度均显著影响根瘤固氮和吸H2活性。     

水稻CAT与逆境应答关系及酶活性分析

过氧化氢酶(catalase,CAT)是一种四聚体血红素酶,主要存在于过氧化物酶体与乙醛酸循环体及相关细胞区域内.水稻中含有CAT1、CAT2和CAT3三种主要同工酶.它们在各组织不同的发育阶段,发挥着重要作用.在本研究解析了水稻过氧化氢酶同工酶基因在NaCl、NaHCO3、Na2CO3、PEG6000、H2O2、低温等逆境处理下mRNA表达特性.结果表明在不同的逆境下过氧化氢酶同工酶在表达上存在差异性.同时利用蛋白表达系统,对水稻过氧化氢酶CAT1和CAT3蛋白进行了纯化实验,对纯化的蛋白的酶活性分析的结果表明,CAT1和CAT3的酶活性没有十分显著的差别.