抗FGF2人鼠嵌合抗体在HEK293T细胞中的表达优化

目的：FGF2是肿瘤血管新生过程中最重要的因子之一,因此通过制备抗FGF2人鼠嵌合抗体中和其发挥作用,以达到抑制肿瘤生长的目的。方法：利用分泌抗FGF2抗体的杂交瘤细胞株IgG9B9和人B淋巴细胞,分别克隆抗体轻链可变区V_L、重链可变区V_H和人重链恒定区C_H基因,从pComb3λ载体中扩增出人λ 链恒定区C_L基因,通过重叠PCR,将V_L,V_H和C_L,C_H片段分别连接形成嵌合抗体的轻链L和重链H,将L/H链以单独构建或串联于同一载体的方式,构建抗FGF2嵌合抗体表达载体,并通过调控元件WPRE优化载体、共转染促生长因子aFGF以及调整表达温度等方式提高嵌合抗体在真核细胞中的表达。结果：成功构建了优化表达载体PLexm-WPRE、PLexm-aFGF;L、H链基因也成功构建,并以L、H或L-F2A-H（2A连接肽将L和H连接起来）的方式分别成功连接到PLexm,PLexm-WPRE载体中。转染细胞上清的ELISA鉴定结果表明,L/H链单独构建要比串联构建的方式具有更高的表达水平,WPRE能有效促进抗体的表达而aFGF并不能促进其表达,与31、37℃相比,33℃时抗体的表达量最高,同时嵌合抗体表现出了很好的结合活性及中和活性,竞争IC50=6.25μg/ml。通过亲和层析获得了高纯度的抗FGF2嵌合抗体。结论：在33℃下,人鼠嵌合抗体基因在WPRE存在下表达量最高,且与抗原FGF2有很好的结合活性及中和活性,为临床应用奠定了基础。     

SOX18在胃腺癌中的表达及临床意义

目的探讨SOX18在胃腺癌中的表达与临床病理特征的关系,分析其在胃腺癌中的作用。方法利用免疫组织化学SP法检测60例胃腺癌及其相应(15例)远端正常胃黏膜组织中SOX18的表达。结果胃腺癌中SOX18的阳性表达率为76.7%(46/60),显著高于正常粘膜组织中的30.0%,差异具有统计学意义(P0.05)。胃腺癌中SOX18蛋白的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P0.05),与患者年龄、性别、Lauren组织学分型及肿瘤分化程度均无关(P0.05)。结论 SOX18在胃腺癌中的高表达可能与胃癌的发生、发展和淋巴结转移密切相关。     

溶氧测定装置测定水果蔬菜中抗坏血酸含量的方法

TheMethodforMeasuringContentofAscorbicAcidinFruitsandVegetablesUsingEquipmentforDetermingDissoivedOxygenWANGJin－Shengu（DepartmentofBasicCourse,ShanxiAgriculturalUniversity,Tajgu030801）CHENGYU－Xiang（JinzhongMedicineSchool,Taigu030800）目前有多种测定抗坏血酸的方法,如2,4-二硝基苯肼法[2]、还原高铁法[8,9]、紫外吸收法[7]、Folin-酚试剂法[5]等。但在果蔬样品抗坏血酸含量的测定中,人们最常用的是2,6,二氯酚靛酚滴定法[3]。该方法设备简单,操作方便,但缺点是当样品液中有干扰色素时,会影…     

过氧化物同工酶谱带染色条件的探讨

研究了过氧化氢浓度在过氧化物同工酶电泳分析中对染色时间及酶带颜色深浅的影响,和相同的酶液在测定酶活性时过氧化氢浓度对测定结果的影响,以及两者之间的相关性。研究表明,过氧化氢的浓度在染色中对染色的时间和酶带的颜色深浅有明显的影响,在一定的范围内随着底物过氧化氢浓度的升高,酶的活性降低,染色时间变长,酶带颜色变浅。这种相关性与供氢体无关,它可指导酶带染色中过氧化氢的用量。     

医学微生物学实验技术教学体系的建设与实践

《医学微生物学及实验技术》是医学实验技术专业的一门重要专业主干课程,该课程的实验技术部分是学生必须掌握的基本技能。经过数年的教学实践,本着培养应用型人才的目标和重实践教学的教学理念,引入企业实践教学,逐步形成了"医学微生物学实验技术"教学体系,由基础性实验、综合性实验、企业实践三部分组成,并初步建立和实施了形成性考核评价体系。教学实践表明,学生较为全面地掌握了医学微生物学实验技术,对全面提高学生的实验实践能力和综合素质有所助益,有效提高了医学微生物学实验技术教学效果。     

β-catenin在食管鳞癌中的异常表达及临床意义

目的探讨β-catenin基因在食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及其意义。方法免疫组化法检测65例ESCC及20例因ESCC手术切除的远切端正常食管黏膜组织中β-catenin的表达及定位,分析其与临床病理学参数的关系;RT-PCR检测31例新鲜ESCC及相应的远切断正常食管黏膜组织中β-catenin mRNA的表达。结果免疫组化结果显示:在20例因ESCC手术切除的远切端正常食管黏膜组织中,β-catenin主要位于胞膜;在65例ESCC组织中,β-catenin的胞质积累阳性率为63.1%,胞核积累阳性率为30.8%;β-catenin的胞质/核积累与淋巴结转移相关(P=0.005),但与患者的年龄、性别、肿瘤的分化程度及浸润深度等无关。RT-PCR结果显示:在31例ESCC及相应的远切端正常食管黏膜组织中,均检测到β-catenin mRNA的表达,与相应的远切端正常食管黏膜组织比较,癌组织中β-catenin基因mRNA的表达水平明显升高(P=0.037),其中表达升高的21例,占67.7%,表达无明显差异的8例,占25.8%,表达降低的2例,占6.5%。结论在ESCC中存在β-catenin mRNA表达水平的升高以及β-catenin蛋白的异常胞质/胞核积累,并与淋巴结转移有关。     

增产菌对棉花苗期病害的抑制效果及其机制的研究

在棉田覆膜栽培和温室盆栽条件下,对增产菌抑制棉苗病害的效果和机制进行了研究。增产菌处理过的田块,棉苗根病减轻8.8—9.2％,复合死苗率减轻43.4％。其机制为:根际微生物群落发生变化,导致害菌减少益菌增加,而且植株体内的过氧化物酶活性及其同功酶活性增强,同功酶还出现二条新谱带;再者根际土壤酶活性也增强,提高了土壤速效养分的供应。     

NOB1在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的研究NOB1基因在食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的表达及临床意义。方法利用免疫组织化学SP法检测59例ESCC及其相应（50例）的远端正常食管黏膜组织中NOB1的表达。结果 ESCC中NOB1的阳性率为71%,正常食管黏膜鳞状上皮中的阳性率为26%,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。NOB1的表达与ESCC的分化程度及淋巴结转移相关,与患者的性别,年龄以及肿瘤浸润深度无关。结论 NOB1在ESCC中表达升高,可能在ESCC发生发展过程中起重要作用。