合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布与耐药性分析

目的了解安徽省合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布和耐药状况,以期筛选出菌苗株和指导临床合理用药。方法对46份疑似大肠埃希菌病病料进行细菌分离培养、生化编码鉴定和致病性测定。采用玻片凝集试验对分离到的46株致病性大肠埃希菌进行血清型鉴定。同时分别采用K-B纸片琼脂扩散法和双纸片增效法检测致病性大肠埃希菌的耐药性和ESBLs阳性菌株。结果46株致病性大肠埃希菌中,除7株细菌未能定型外,其余39株细菌分布于10个血清型,O127：K63血清型为优势血清型,占定型菌株的33．33％。46株致病性大肠埃希菌对21种抗菌药物均呈现不同程度的耐药性,15个ESBLs阳性菌株表现为多重耐药,对各种抗菌药物的耐药率均高于ESBLs阴性菌株。结论O127：K63血清型为优势血清型,可作为菌苗株。合肥地区动物源性大肠埃希菌耐药性较为严重,尤其是产ESBLs大肠埃希菌多重耐药更为突出。     

重症监护病房产ESBLs菌的基因分型

目的了解深圳市人民医院重症监护病房分离菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检出率及其基因型分布情况。方法收集来自重症监护病房大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分离株48株,采用CLSI推荐的表型确证方法筛选出ESBLs株,并利用PCR及DNA测序法分析产酶菌株的ESBL基因型。结果（1）48分离株菌中共检出产ESBLs菌24株,阳性率为50.0%。（2）产酶菌中93.8%（15/16）的大肠埃希菌和87.5%（7/8）的肺炎克雷伯菌分别检出CTX-M基因;其中72.7%（16/22）为CTX-M-14。6株肺炎克雷伯菌检出SHV基因,其中3株为SHV-11型,另3株为SHV-12型,6株含SHV基因的肺炎克雷伯菌中5株合并CTX-M基因。而所有大肠埃希菌株均未检出SHV基因。所有产酶菌中,分别有10株大肠埃希菌和2株肺炎克雷伯菌检出TEM-1基因,其中1株大肠埃希菌只检出TEM-1基因,未检出SHV型或CTX-M型基因。结论重症监护病房分离菌ESBLs检出率高,以CTX-M-14为主要基因型。     

大肠埃希菌耐药性水平传播实验研究

目的研究重症监护病房（ICU）患者标本中分离的大肠埃希菌的耐药情况以及耐药性水平传播的实验研究。方法采取双纸片法（K-B）检测细菌的耐药性;产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌为供体菌,耐利福平大肠埃希菌（对其他抗生素敏感）作为受体菌进行接合实验;采用聚合酶链反应（PCR）技术扩增整合子和耐药基因。结果30株大肠埃希菌中产ESBLs菌株检出率为46．7％;接合培养后,接合菌携带23kb和25kb大质粒,而无供体菌中一系列小质粒;供体菌和接合菌均携带I型整合子。结论大肠埃希菌耐药性严重,且呈多重耐药性;产ESBLs菌株可通过质粒和整合子将耐药基因转移给敏感菌,导致耐药性传播。     

新生儿病区产ESBLs大肠埃希菌整合子及其耐药性分析

目的 了解新生儿病区产ESBLs大肠埃希菌整合子的携带情况及其耐药性.方法 采用K-B琼脂扩散法对56株产ESBLs大肠埃希菌进行药敏试验;应用PCR法检测Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子;以肠杆菌科重复序列-聚合酶链式反应(ERIC-PCR)进行基因分型.结果 56株产ESBLs大肠埃希菌的Ⅰ类整合子检出率为60.7％,未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子;菌株对庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明、头孢唑林、氨曲南、头孢他啶的耐药率差异有统计学意义(P＜0.05),阳性菌株的耐药率高于阴性菌株;56株大肠埃希菌分为45种基因型.结论 Ⅰ类整合子广泛存在于新生儿病区产ESBLs大肠埃希菌并与其耐药性相关.     

泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌基因分型

目的 了解深圳市人民医院临床泌尿系感染标本中产ESBLs大肠埃希菌的基因型特点.方法 收集近几年深圳市人民医院临床尿液标本中非重复的产ESBLs大肠埃希菌43株,PCR分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,阳性株进行DNA测序分型.结果 43株产ESBLs大肠埃希菌中40株CTX-M基因阳性,分别为CTX-M-14型36株,CTX-M-9型2株,CTX-M-15型2株,其中17株CTX-M-14型菌株检出TEM-1基因;所有菌株均未检出SHV基因.结论 本地区致泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌中,CTX-M-14型为主.     

血流感染大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因分型

目的 了解深圳市人民医院致血流感染大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率及基因型特点.方法 收集来自临床血液培养标本中的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌115株,采用ESBLs表型确证试验检测菌株的ESBLs,应用PCR扩增产ESBLs菌株TEM、SHV和CTX-M基因,并对阳性扩增产物进行DNA测序分型.结果 115株菌中共检出ESBLs阳性38株,检出率为33.0％;其中大肠埃希菌阳性25株,肺炎克雷伯菌阳性13株.25株产酶肠埃希菌中18株检出CTX-M-14基因,3株检出CTX-M-9基因.13株产酶肺炎克雷伯菌均检出SHV型基因,其中SHV-12阳性10株,SHV-2阳性2株,SHV-59阳性1株;该13株产酶菌中10株同时被检出含CTX-M-14或CTX-M-13基因.结论 该院致血流感染大肠埃希菌产ES-BLs以CTX-M-14为最主要基因型,肺炎克雷伯产ESBLs最常见为SHV-12和CTX-M-14型.     

医院与社区获得性感染大肠埃希菌耐消毒剂基因比较分析

目的 比较在本地区医院感染与社区获得性大肠埃希菌中耐消毒剂基因的流行情况.方法 收集从临床标本中分离出的大肠埃希菌112株,根据感染途径不同,将其分为医院与社区获得性两组,用PCR方法检测耐消毒剂基因qacE△1,并进行组间检出率比较.结果 本地区医院与社区获得性感染大肠埃希菌耐消毒剂基因的携带率分别为58.1％(43/74)和23.7％ (9/38),组间比较差异有统计学意义(P ＜0.05);74株医院获得性大肠埃希菌中,产ESBL率为71.6％(53/74),38株社区获得性大肠埃希菌中,产ESBL率为39.5％ (15/38).医院与社区获得性产ESBL大肠埃希菌耐消毒剂基因qacE△1检出率分别为64.2％(34/53)与6.7％(1/15),组间比较差异亦有统计学意义(P＜0.01).结论 医院获得性感染大肠埃希菌耐消毒剂基因的携带率高于社区获得性大肠埃希菌,产ESBL阳性菌株的携带率显著高于产ESBL阴性菌株,这可能是由于医院环境中消毒剂选择压力和/或携带耐消毒剂基因的菌株在医院内水平传播速度较快的结果.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药性分析

目的:了解产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌在泌尿系统感染中的流行情况及对12种常用抗菌药物的耐药性,为临床合理使用抗生素提供必要依据.方法:采用K-B纸片扩散法,测定128株大肠埃希菌对12种抗菌药物的耐药性,同时使用E-test方法筛选超广谱β-内酰胺酶阳性菌株.结果:从128株大肠埃希菌中共检出ESBL 26株,产ESBL细菌阳性率为20.3%.在12种抗菌药物中,亚胺培南的体外抗菌活性最好,敏感率为100%,其次为阿米卡星(90.5%).结论:产ESBL细菌多重耐药现象严重,只有正确使用抗生素才能降低ESBL的发生,而对于产ESBL菌株感染的治疗,亚胺培南应作为首选药物.     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs检测及耐药性分析

由细菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）引起的细菌耐药性一直是临床相关感染性疾病治疗中的棘手问题。从不同病区患者标本中分离了96株大肠埃希菌和80株肺炎克雷伯菌,分剐采用双纸片协同试验和药物敏感试验检测了上述菌株产生ESBLs情况及对17种抗生素的耐药性。结果发现,27．1％（26／96）的大肠埃希菌株和22．5％（18／80）肺炎克雷伯菌株产ESBLs。ICU病房分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌株ESBLs总阳性率（46．0％）与介入科病房和烧伤科病房分离菌株ESBLs总阳性率（28．6％和25．0％）无显著性差异（P〉0．05）,但明显高于呼吸科、骨科、其他病房及门诊部分离菌株ESBLs总阳性率（6．3％～14．3％,P〈0．01）。不产ESBLs大肠埃希菌株和肺炎克雷伯菌株对17种抗生素耐药率明显低于产ESBLs菌株。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对氨曲南均敏感,对氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／棒酸、阿米卡星耐药率仅为15．8％-23．4％。上述实验结果提示,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床菌株中有较高的ESBLs阳性率,不同病区患者感染的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs阳性率有很大差异,氨曲南、氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／棒酸、阿米卡星可作为治疗产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌感染性疾病的首选药物。     

产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性基因型分析

检测我院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性和基因型。表型确定临床分离产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌56株,应用PCR基因扩增技术及双脱氧DNA测序方法,分别对TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2和CTX-M-9编码基因进行分析。产酶菌株对亚胺培南、美洛培南、阿米卡星、头孢吡肟耐药性较低,对其他16种抗生素耐药性较高。在56株菌株中有50株为CTX-M型,占89%,34株为TEM型(60.7%),20株SHV型(35.7%);其中CTX-M-9型共计39株占78%,CTX-M-1型19株占38%,CTX-M-2型16株占32%。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性值得关注,主要临床流行基因型是CTX-M型。     

Coastal Seawater Bacteria Harbor a Large Reservoir of Plasmid-Mediated Quinolone Resistance Determinants in Jiaozhou Bay, China

Diversity and prevalence of plasmid-mediated quinolone resistance determinants were investigated in environmental bacteria isolated from surface seawater of Jiaozhou Bay, China. Five qnr gene alleles were identified in 34 isolates by PCR amplification, including qnrA3 gene in a Shewanella algae isolate, qnrB9 gene in a Citrobacter freundii isolate, qnrD gene in 22 Proteus vulgaris isolates, qnrS1 gene in 1 Enterobacter sp. and 4 Klebsiella spp. isolates, and qnrS2 gene in 1 Pseudomonas sp. and 4 Pseudoalteromonas sp. isolates. The qnrC, aac(6')-Ib-cr, and qepA genes could not be detected in this study. The 22 qnrD-positive Proteus vulgaris isolates could be differentiated into four genotypes based on ERIC-PCR assay. The qnrS1 and qnrD genes could be transferred to Escherichia coli J53 Azi(R) or E. coli TOP10 recipient strains using conjugation or transformation methods. Among the 34 qnr-positive isolates, 30 had a single point mutation in the QRDRs of GyrA protein (Ala67Ser, Ser83Ile, or Ser83Thr), indicating that cooperation of chromosome- and plasmid-mediated resistance contributed to the spread and evolution of quinolone resistance in this coastal bay. Eighty-five percent of the isolates were also found to be resistant to ampicillin, and bla(CMY), bla(OXY), bla(SHV), and bla(TEM) genes were detected in five isolates that also harbored the qnrB9 or qnrS1 gene. Our current study is the first identification of qnrS2 gene in Pseudoalteromonas and Pseudomonas strains, and qnrD gene in Proteus vulgaris strains. High prevalence of diverse qnr genes in Jiaozhou Bay indicates that coastal seawater may serve as an important reservoir, natural source, and dissemination vehicle of quinolone resistance determinants.     

临床分离肺炎克雷伯菌Ⅰ整合子分布及其与qnr基因关系研究

目的 了解临床分离肺炎克雷伯菌中qnr基因和Ⅰ类整合子基因的分布及其耐药特征.方法 采用PCR法对45株耐环丙沙星肺炎克雷伯菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因筛查并测序,用PCR法检测qnr阳性菌株Ⅰ类整合子基因,并采用SPSS 13.0和Whonet 5.4软件分析药敏结果及比较.结果 45株肺炎克雷伯菌中,24株(51.1％)细菌检出qnrS基因,未检出qnrA和qnrB基因.20株qnr阳性菌株同时携带Ⅰ类整合子基因.qnr阳性菌株Ⅰ类整合子基因携带率显著高于阴性菌株,qnr阳性菌株对阿米卡星、妥布霉素、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦及头孢哌酮舒巴坦的敏感性较高.结论 肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类抗菌药物耐药主要由qnrS引起,qnr阳性株同时携带Ⅰ类整合子,导致呈现多重耐药性,加强临床耐药监测对控制多重耐药传播有着重要的意义.     

大肠埃希菌临床分离株CTX—M型超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的了解我院临床分离大肠埃希菌产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因型分布情况。方法收集我院临床分离大肠埃希菌200株,按美国临床和实验室标准协会2006年制订的标准确定ESBLs表型。PCR扩增CTX—M耐药基因,扩增产物测序,测序结果与GenBank比对,确定CTX．M基因型。结果200株大肠埃希菌中有94株ESBLs阳性,其中92株CTX-M基因扩增阳性。测序结果表明,大肠埃希菌CTX．M基因型以CTX．M14为主,占67．4％,同时CTX—M3占27．2％,5株未分型。结论大肠埃希菌中产CTX．M型ESBLs的检出率较高,其基因型以CTX．M14和CTX．M3型为主。     

Occurrence of qnr-positive clinical isolates in Klebsiella pneumoniae producing ESBL or AmpC-type beta-lactamase from five pediatric hospitals in China.

The plasmid-mediated quinolone resistance qnr genes in clinical isolates in adults have been described in different countries; however, the frequency of their occurrence has not been detected in pediatric patients. A total of 410 clinical isolates of Klebsiella pneumoniae, identified as producers of an extended-spectrum beta-lactamase (ESBL), or AmpC beta-lactamase, were collected from five children's hospitals in China during 2005-2006. The isolates were screened for the presence of the qnrA, qnrB, and qnrS genes, and then the harboring qnr gene isolates were detected for a bla gene coding for the TEM, SHV, CTX-M, and plasmid-mediated ampC gene by a PCR experiment. Ninety-two isolates (22.7%) were positive for the qnr gene, including 10 of qnrA (2.4%), 25 of qnrB (6.1%), and 62 of qnrS (15.1%). Eighty-one of the 92 (88.0%) qnr-positive isolates carried at least one bla gene for TEM, SHV, CTX-M, or DHA-1. The ciprofloxacin resistance increased 16-256-fold and oflaxacin resistance increased 2-32-fold in transconjugants, respectively. These results indicated that the plasmid-mediated qnr quinolone resistance gene was qnrS, followed by qnrB and qnrA. Most of the isolates also carried a bla gene coding ESBL or ampC gene coding DHA-1 among Klebsiella pneumoniae isolated from Chinese pediatric patients.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌Ⅰ类整合子检测与耐药性关系

目的了解I类整合子在产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌中分布状况,分析I类整合子在细菌多重耐药中的作用。方法用PCR方法扩增I类整合酶基因,经电泳后检测扩增产物。用2χ检验进行统计学分析,P<0.05为差异有显著性。结果105株大肠埃希菌检出I类整合子46株,检出率为43.8%。I类整合子在产ESBLs菌的检出率为53.4%,明显高于非产ESBLs菌(31.9%),2χ检验,P<0.01。I类整合子阳性菌株多重耐药率为68.8%(33/48),明显高于阴性菌株(33.3%),P<0.05。I类整合子阳性菌株和产ESBLs菌均对青霉素类、喹诺酮类、磺胺类抗生素表现出较高的耐药率。所有菌株均对亚胺培南敏感。结论I类整合子携带与产ESBLs菌株耐药有关,I类整合子阳性菌株对多种抗生素的耐药率大于整合子阴性菌株。     

大肠埃希菌连续分离株氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解临床分离的大肠埃希菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因的存在状况。方法测定临床分离的60株大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性,采用PCR技术检测氨基糖苷类修饰酶基因。结果60株大肠埃希菌呈现多重耐药,氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰb、aac（6′）-Ⅱ、ant（3′′）-Ⅰ、ant（2′′）-Ⅰ的阳性率分别为36.7%、18.3%、0%、10%、1.6%。携带1种或1种以上基因的菌株有33株（55%）。结论临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重,氨基糖苷类修饰酶基因携带率较高。     

肺炎克雷伯杆菌对氟喹诺酮耐药的机制研究

目的研究肺炎克雷伯杆菌对氟喹诺酮类药物（FQNs）的耐药机制。方法筛选临床分离的对环丙沙星耐药的肺炎克雷伯杆菌共10株,采用微量肉汤稀释法检测菌株对5种氟喹诺酮类药物的MIC值;采用PCR方法检测菌株染色体和质粒携带的喹诺酮耐药基因（gyrA基因、parC基因和qnr基因）并测序;质粒接合试验验证qnr基因的转移性。结果 10株肺炎克雷伯杆菌对5种氟喹诺酮类药物均产生耐药性。扩增产物经测序发现10株肺炎克雷伯杆菌染色体的gyrA基因和parC基因均有突变;有2株菌株（K79和K107）携带qnrA基因,这2株菌的接合菌对喹诺酮抗菌药的MIC值上升了5～30倍;未检测到qnrB阳性的菌株。结论 gyrA和parC基因突变是肺炎克雷菌对氟喹诺酮类产生耐药机制的主要原因,质粒上qnrA基因的存在,也是产生喹诺酮耐药的一个重要因素。     

产志贺毒素大肠埃希菌的分子生物学鉴定和耐药性分析

为了解产志贺毒素大肠埃希菌 (Shigatoxin producingEscherichiacoli ,STEC)stx1,stx2 ,eaeA ,hlyA 4种毒力基因的分布情况 ,以及分离株对 18种抗生素的敏感性 ,采用多重PCR(multiplexPCR ,mPCR)法对分离株进行毒力基因的分子生物学鉴定 ;用WHO推荐的K B法对分离株进行抗生素的敏感性测定。产志贺毒素的大肠埃希菌共有 4 6株 ,其中 2种毒素均产生的有 2 2株 (4 7.8% ) ;单纯产生stx1的有 16株 (36 .9% ) ,stx2 的有 8株 (17.4 % ) ;4种毒力基因均存在的有 19株 (4 1.3% ) ,血清型为O15 7∶H7,而非O15 7∶H7血清型的菌株 (2 3/46 )中 ,4种毒力基因同时存在的仅有 3株 (6 .6 % ) ,但有 13株 (5 6 .9% )hlyA基因阳性。全部STEC对复方新诺明耐药 ,对链霉素耐药率为 2 8.3% ,氨苄西林为 30 .4 % ,红霉素为 6 9.6 % ,而且有 5株对至少 4种以上抗生素多重耐药 ,耐药谱为复方新诺明 链霉素 红霉素 氨苄西林。非O15 7型STEC耐药菌次为 12 2 ,而O15 7型为 6 3。可见 ,mPCR法可以快速检测STEC特征性毒力基因 ,以判定其致病性能。非O15 7型STEC对抗生素较易形成耐药性。     

质粒介导的大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药机制的研究

目的了解临床分离的耐环丙沙星的大肠埃希菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因的携带情况,并进行相关耐药机制的分析。方法采用VITEK-2全自动微生物检测系统鉴定细菌,用K-B法检测细菌对16种常用抗生素的敏感性,采用聚合酶链反应检测喹诺酮类耐药基因qnrS、qnrA、qnrB、qepA和aac（6′）-Ib,并对阳性的aac（6′）-Ib结果进行测序分析。结果 30株耐环丙沙星的大肠埃希菌中,2株（6.67%）检出qepA基因,8株（26.67%）检出aac（6′）-Ib基因,经测序证实其中6株为aac（6）′-Ib-cr（20.0%）。未检出qnrS、qnrA和qnrB基因。结论对环丙沙星耐药的大肠埃希菌携带aac（6′）-Ib-cr和qepA基因,引起质粒介导的对喹诺酮类抗菌药物的低水平耐药。     

Isolation and characteristics of sorbitol-fermenting Escherichia coli O157 strains from cattle

Cattle can be a reservoir of sorbitol-fermenting Escherichia coli O157 (SF E. coli O157) and a source of human diseases. In this study, six strains of SF E. coli O157 were isolated and characterized from cattle using an immunomagnetic separation procedure. PCR analysis of the SF E. coli O157 virulence markers showed that all six isolates tested positive for sfpA, rfbE and eaeA, and negative for terA, ureA, katP and espP. Two of the isolates contained the stx genes. Four isolates tested positive for enterohemorrhagic E. coli hlyA (EhlyA) by PCR but were nonhemolytic on the blood agar. Five isolates tested positive for the cdtA gene. The possession of these virulence factors was an indication of their pathogenic potential. The random amplified polymorphic DNA patterns, which were generated by the arbitrarily primed PCR of the SF E. coli O157 isolates from the cattle, were significantly different from those of the non-sorbitol-fermenting E. coli O157 (NSF E. coli O157) strains originating from cattle or humans. GelCompar analysis showed that the SF E. coli O157 isolates had only a 57% genetic similarity with the NSF E. coli strains. The minimal inhibitory concentration assay showed that imipenem inhibited the growth of the six isolates at a concentration of <4 microg/ml.