临床分离肺炎克雷伯菌Ⅰ整合子分布及其与qnr基因关系研究

目的 了解临床分离肺炎克雷伯菌中qnr基因和Ⅰ类整合子基因的分布及其耐药特征.方法 采用PCR法对45株耐环丙沙星肺炎克雷伯菌进行qnrA、qnrB、qnrS基因筛查并测序,用PCR法检测qnr阳性菌株Ⅰ类整合子基因,并采用SPSS 13.0和Whonet 5.4软件分析药敏结果及比较.结果 45株肺炎克雷伯菌中,24株(51.1％)细菌检出qnrS基因,未检出qnrA和qnrB基因.20株qnr阳性菌株同时携带Ⅰ类整合子基因.qnr阳性菌株Ⅰ类整合子基因携带率显著高于阴性菌株,qnr阳性菌株对阿米卡星、妥布霉素、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦及头孢哌酮舒巴坦的敏感性较高.结论 肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类抗菌药物耐药主要由qnrS引起,qnr阳性株同时携带Ⅰ类整合子,导致呈现多重耐药性,加强临床耐药监测对控制多重耐药传播有着重要的意义.     

凝溶胶蛋白对植物微丝的调节作用及在花粉中的定位

以植物花粉为实验材料, 研究了来源于动物的凝溶胶蛋白对植物肌动蛋白丝的作用及凝溶胶蛋白在植物细胞中的定位. 利用离心沉淀丝状肌动蛋白及电子显微镜负染的实验结果显示, 花粉纯化肌动蛋白丝及粗提液中肌动蛋白丝可被凝溶胶蛋白剪切, 而且这种剪切作用依赖于Ca²⁺. 另外, 利用免疫沉淀测定凝溶胶蛋白与花粉肌动蛋白单体结合的实验表明, 当溶液中有Ca²⁺. 存在时, 花粉肌动蛋白与凝溶胶蛋白的摩尔比值约为2.0 ± 0.21; 用EGTA去除Ca²⁺. 后, 该比值有所降低, 减至1.2 ± 0.23; 而加入PIP2后, 这种结合比值又降至0.8 ± 0.10, 表明植物肌动蛋白与凝溶胶蛋白的结合有类似于动物肌动蛋白的特性, 受到Ca²⁺. 和PIP2的调节. 花粉中凝溶胶蛋白的免疫鉴定及免疫荧光定位实验结果表明, 花粉中存在凝溶胶蛋白, 在未萌发的花粉粒中凝溶胶蛋白主要集中在萌发沟处, 而在萌发2 h的花粉管中, 花粉管胞质内均可看到荧光分布, 但花粉管顶端荧光较强, 推测凝溶胶蛋白可能参与花粉的萌发和花粉管的生长.     

雄激素非依赖性前列腺癌细胞中差异甲基化基因的初步筛选

应用全基因组DNA甲基化芯片(Illumina Infinium HumanMethylation27 BeadChip)杂交技术以及转录组RNA测序技术,检测了雄激素依赖性前列腺癌(androgen-dependent prostate cancer,ADPC)细胞株LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌(androgen-independent prostate cancer,AIPC)细胞株LNCaP-AI(androgen independent)中的差异甲基化基因。发现与LNCaP细胞株相比,LNCaP-AI细胞株有990个CpG位点表现为高甲基化,涉及855个基因;2 305个CpG位点表现为低甲基化,涉及1 970个基因。结合转录组mRNA表达结果,筛选出6个超甲基化基因:FAM111B、RAB36、PCDH7、COL6A2、IGF1R、GULP1;8个低甲基化基因:EPHA3、TM4SF1、IGFBP5、FAM105A、RASD1、ITPR2、CYP27B1、UBE2E3。这些差异甲基化基因涉及钙离子信号通路、Wnt信号通路等多个信号通路,参与了细胞的基因表达、信号传导、细胞通讯、细胞运动、细胞黏附以及血管生成等功能,为探讨这些差异甲基化基因在前列腺癌雄激素非依赖性转化过程中发挥的作用奠定了基础。     

海水中组胺菌的分离及其理化性质分析

目的:对海水中的组胺牛成菌进行生化实验和功能酶检测,进而对海水中组胺菌的存在提供可参考数据.方法:利用组氨酸肉汤培养液,对海水中的组胺生成菌进行筛选.然后通过生物化学实验和形态学实验,进而对组胺生成菌进行分析.结果:分离得到2株细菌.结论:依据两种组胺菌的特征和生理生化特征,分离菌可能分别属于奈瑟氏菌属、黄杆菌属.     

金枪鱼肉中组胺菌的分离及其理化性质分析

目的：对金枪鱼肉中的组胺生成菌进行生化实验和功能酶检测,进而对鱼肉中组胺菌的存在提供可参考数据。方法：利用组氨酸肉汤培养液,对金枪鱼肉中的组胺生成菌进行筛选,然后通过生物化学实验和形态学实验,进而对组胺生成菌进行分析。结果：分离得到2株组胺菌,菌种Ⅰ在5℃~30℃的培养温度范围内,随温度升高,组胺生成量逐渐增加,在30℃有最高组胺生成量,约2 700ppm。菌种Ⅱ在25℃有组胺最高生成量约为2 400ppm。结论：依据两种组胺菌的特征和生理生化特征,分离菌可能分别属于弧菌属、埃希氏菌属。     

双通道TaqMan实时荧光PCR应用于别嘌呤醇不良反应相关基因HLA-B*58:01的检测与验证

摘要 目的：建立一种双通道TaqMan实时荧光PCR方法,应用于别嘌呤醇不良反应相关基因HLA-B*58:01的快速基因检测,并验证该方法的灵敏度、特异性、重复性及可靠性等性能指标。方法：针对HLA-B*58:01 等位基因序列设计引物和Taqman 探针,建立一种双通道TaqMan实时荧光PCR检测方法,收集陕西省人民医院、浙江大学医学院附属第二医院、浙江大学医学院附属邵逸夫医院三家医院收治的1158例临床诊断为痛风或血清尿酸高患者的外周血标本,采用双盲对照实验,分别采用双通道TaqMan实时荧光PCR法与已获审批的商业试剂盒共同检测所有标本,对比两种方法的检测结果进而评价该TaqMan实时荧光PCR方法的临床性能。结果：双通道TaqMan实时荧光PCR法特异性高,稳定可靠,可检测低至1 ng/?滋L的阳性样本;采用双通道TaqMan实时荧光PCR法与已获审批的商业试剂盒在1158份患者标本中检出的HLA-B*58:01阳性及阴性标本均相同,阳性标本147例,阴性标本1011例,该组患者HLA-B*58:01基因携带率为12.69%,两种方法符合率为100%（1158/1158）,两组实验结果数据采用SPSS分析P=1.000,差异无统计学意义。所有受检者HLA-B* 58:01携带率为12.69 % （147 /1158）。结论：双通道TaqMan实时荧光PCR可以作为一种快速、特异、灵敏的HLA-B*58:01的基因检测方法,用于别嘌呤醇用药前的相关不良反应风险评估。     

前S1蛋白作为慢性乙型肝炎患者病毒复制标志物的价值

目的 探讨乙型肝炎患者病毒血清前S1蛋白(PreS1)作为慢性乙型肝炎病毒复制标志物的价值.方法 对210例慢性乙型肝炎患者和67例健康体检者进行HBV-DNA、PreS1、HBeAg测定;采用荧光定量-多聚酶链反应技术(FQ-PCR)对HBV-DNA进行定量检测,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对PreS1和HBeAg进行检测.结果 210例慢性乙型肝炎患者中,以HBV-DNA＞1×103拷贝/ml作为HBV复制的金标准,PreS1和HBeAg与HBV-DNA的总符合率为74.8%和57.6%.177例HBV-DNA阳性患者中,PreS1阳性135例,HBeAg阳性88例,2种检验标志物间差异存在显著性(x2=26.8,P＜0.01).PreS1、HBeAg和PreS1/HBeAg联合检测作为病毒复制标志的敏感性分别为76.3%、49.7%和87.6%,特异性分别为66.7%、100%和66.7%,准确性分别为74.8%、57.6%和84.3%,阳性预测值分别为92.5%、100%和93.4%,阴性预测值分别为33.3%、100%和50%.结论 PreS1与乙型肝炎病毒的复制密切相关,PreS1作为乙型肝炎病毒复制的标志物优于HBeAg.PreS1和HBeAg联合检测更能较好反映HBV病毒感染和复制状态,有利于乙肝病情监测和疗效评估.     

Regulation of gelsolin to plant actin filaments and its distribution in pollen

The effect of plasma gelsolin on plant microfilaments and its localization in plant cells were investigated. The results by using ultracentrifugation and electron microscopy showed that plant microfilaments could be severed into shorter fragments by gelsolin in a Ca2+-dependent manner. By measuring the binding ability of plasma gelsolin to pollen actin using the method of immunoprecipitation, it was shown that pollen actin could bind gelsolin at a ratio of 2.0±0.21 in the presence of Ca2+. Addition of EGTA could disassociate the actin-gelsolin complexes, reducing the ratio to 1.2±0.23, and the addition of PIP2 could further reduce the ratio to 0.8±0.1. The results indicate that plant actin has similar binding properties with plasma gelsolin as that of animal actin. By Western blotting we identified the existence of gelsolin in lily pollen. The results of immunolo-calization of gelsolin in pollen and pollen tube showed that gelsolin was mainly localized at the germinal furrow in pollen grains and at the cytoplasm in pollen tube, especially in the tip region.     

Regulation of gelsolin to plant actin filaments and its distribution in pollen

The dynamics of the actin cytoskeleton depends upon the unique constellation of ac- tin-binding proteins (ABPs), as well as their spatial distribution and local activation. However, the identification and characterization of actin-binding proteins in plant cells are still limited. At pre- sent, only a few plant ABPs have been identified in plant tissues, including profilin, ADF/cofilin, fimbrin, villin and several myosins. Compared with that in animals, there is still a long way for us …     

雄激素非依赖性前列腺癌细胞雄激素受体靶基因的筛选与初步鉴定

采用染色质免疫共沉淀技术在全基因组水平筛选雄激素非依赖性前列腺癌细胞LNCaP-AI的雄激素受体结合位点,行高通量测序及生物信息学分析共得到2 876个peak（pvalue〈1×10–5）,peak平均长度为673 bp;将peak序列定位到Hg19基因组,共有1 865个靶基因,其中fold enrichment≥10的基因有425个。对peak相关基因进行GO分析发现,与细胞、细胞组分、细胞过程、结合、细胞器相关的基因位列前五位;对peak相关基因进行通路分析发现,与黏着斑、代谢通路、癌症中的转录错误调控、嘌呤代谢等信号通路相关的基因占大多数。筛选出7个候选AR靶基因,采用Real-time qPCR技术分析它们在LNCaP-AI细胞和雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP中对DTH刺激的反应性,发现DHT刺激可改变7个候选AR靶基因在LNCaP-AI细胞中的表达,为进一步研究雄激素依赖性前列腺癌向非依赖性前列腺癌发展的过程中雄激素受体及其调控的下游靶基因功能起着至关重要的作用。