新生儿科病房产ESBLs分离株耐药基因分型

目的了解我院新生儿科病房产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的流行情况及基因型特点。方法采用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的表型确证方法,对分离自广东省妇儿医院新生儿科病房的50株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测。应用PCR法分别扩增产酶菌的TEM、SHV和CTX-M基因,并进行DNA测序及分型。结果50株细菌中,检出ESBLs阳性菌22株,检出率为44%,其中大肠埃希菌5株,肺炎克雷伯菌17株。5株大肠埃希菌中,3株同时检出CTX-M-14和TEM-1,1株检出CTX-M-14,1株3种基因均未检出。17株肺炎克雷伯菌中7株同时检出CTX-M-14型和SHV-12,9株只检出SHV-12,1株只检出CTX-M-14。结论SHV-12型ESBLs是新生儿科病房最常见的ESBLs,其次为CTX-M-14。     

血流感染大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因分型

目的 了解深圳市人民医院致血流感染大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率及基因型特点.方法 收集来自临床血液培养标本中的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌115株,采用ESBLs表型确证试验检测菌株的ESBLs,应用PCR扩增产ESBLs菌株TEM、SHV和CTX-M基因,并对阳性扩增产物进行DNA测序分型.结果 115株菌中共检出ESBLs阳性38株,检出率为33.0％;其中大肠埃希菌阳性25株,肺炎克雷伯菌阳性13株.25株产酶肠埃希菌中18株检出CTX-M-14基因,3株检出CTX-M-9基因.13株产酶肺炎克雷伯菌均检出SHV型基因,其中SHV-12阳性10株,SHV-2阳性2株,SHV-59阳性1株;该13株产酶菌中10株同时被检出含CTX-M-14或CTX-M-13基因.结论 该院致血流感染大肠埃希菌产ES-BLs以CTX-M-14为最主要基因型,肺炎克雷伯产ESBLs最常见为SHV-12和CTX-M-14型.     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌呼吸道分离株的基因分型及耐药性分析

目的了解深圳市人民医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌呼吸道分离株超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型特点及耐药性。方法采用临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的表型确证试验筛选出该院呼吸道分离株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共78株。应用PCR及DNA测序法分析产酶株的TEM、SHV及CTX-M3种β-内酰胺酶基因,用琼脂稀释法测定细菌最低抑菌浓度(MIC)。结果 37株产ESBLs大肠埃希菌中,28株(75.7%)检出CTX-M-14基因,4株(10.8%)检出CTX-M-9基因,其他型较少见。41株肺炎克雷伯菌中,25株(61.0%)检出SHV-12基因,4株(9.8%)检出SHV-11基因,其他SHV型较少。20株(48.8%)检出CTX-M-14基因,5株(12.2%)检出CTX-M-3基因,其他型较少。产ESBL菌株均对亚胺培南敏感,对氨苄西林/舒巴坦的耐药率最高(90%),对其他抗生素有不同程度耐药。结论深圳市人民医院呼吸道分离的产ESBLs大肠埃希菌以CTX-M-14型为主,产酶肺炎克雷伯菌以SHV-12和CTX-M-14型为最常见。     

泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌基因分型

目的 了解深圳市人民医院临床泌尿系感染标本中产ESBLs大肠埃希菌的基因型特点.方法 收集近几年深圳市人民医院临床尿液标本中非重复的产ESBLs大肠埃希菌43株,PCR分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,阳性株进行DNA测序分型.结果 43株产ESBLs大肠埃希菌中40株CTX-M基因阳性,分别为CTX-M-14型36株,CTX-M-9型2株,CTX-M-15型2株,其中17株CTX-M-14型菌株检出TEM-1基因;所有菌株均未检出SHV基因.结论 本地区致泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌中,CTX-M-14型为主.     

产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性基因型分析

检测我院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性和基因型。表型确定临床分离产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌56株,应用PCR基因扩增技术及双脱氧DNA测序方法,分别对TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2和CTX-M-9编码基因进行分析。产酶菌株对亚胺培南、美洛培南、阿米卡星、头孢吡肟耐药性较低,对其他16种抗生素耐药性较高。在56株菌株中有50株为CTX-M型,占89%,34株为TEM型(60.7%),20株SHV型(35.7%);其中CTX-M-9型共计39株占78%,CTX-M-1型19株占38%,CTX-M-2型16株占32%。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性值得关注,主要临床流行基因型是CTX-M型。     

产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药特征和基因分型研究

目的了解广东省中医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的流行、耐药特点和基因型分布。方法对该院2001年7月至2003年8月间临床分离保存的208株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,用VITEK-32细菌鉴定仪进行细菌鉴定,用K—B法进行药敏试验,用双纸片法进行ESBLs初筛,用NCCLS1999年推荐的确证方法进行ESBLs确证。并采用PCR扩增和PCR产物测序方法对产ESBLs菌株进行基因分型。结果分离到产ESBLs细菌76株,总检出率为36．5％,其中肺炎克雷伯菌阳性率为41．9％（39／93）、大肠埃希菌阳性率为32．2％（37／115）,产酶株的耐药率明显高于非产酶株,产ESBLs细菌对青霉素类、环丙沙星及头孢菌素类耐药率较高,加酶抑制剂克拉维酸或他唑巴坦后耐药率有明显下降;PCR初步分型结果表明：TEM型42株（55．3％）,均为TEM-1型,CTX-M型27株（35．5％）,SHV型33株（43．4％）。结论产ESBLs细菌具有多重耐药的特点;CTX-M型和SHV型是该院产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中流行的基因型。     

呼吸道产超广谱β-内酰胺酶分离株耐药基因初步分型

目的了解产超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs)呼吸道分离株的主要基因型分布特点.方法用表型确证试验确定临床呼吸道标本中产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌.应用聚合酶链反应(PCR)方法扩增产ESBLs株的bla(TEM)、bla(SHV)和bla(CTX-M)基因.结果 PCR结果显示bla(TEM)、bla(SHV)和bla(CTX-M)基因的总阳性率分别为40 .7%、45.7%和75.3%,其中大肠埃希菌分别为:64.9%、2.7%和91.9%,肺炎克雷伯菌分别为:20.5%、81.8%和61.4%.67.6%的大肠埃希菌和95.5%的肺炎克雷伯菌同时携带多个基因.结论深圳市人民医院呼吸道分离的产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型为CTX-M,肺炎克雷伯菌主要基因型为SHV.大多数菌株同时携带多个基因.     

产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分析

目的 了解深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的ESBLs和头孢菌素(AmpC)酶基因型分布特点.方法 收集深圳市人民医院产ESBLs肺炎克雷伯菌临床菌株64株,PCR法分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,并进行DNA测序分型.同时应用多重PCR对其中的头孢西丁耐药株进行AmpC酶基因扩增,DNA序列确定其基因型.结果 64株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,61株(95.3％)检出至少一种ESBLs基因.其中51.6％ (33/64)检出SHV-12基因,46.9％(30/64)检出CTX-M-14基因.11株(17.2％)检出AmpC基因,其中10株为DHA-1型,1株为CYM-2型.19株(29.7％)检出2种以上的ESBLs或ESBLs合并AmpC基因.结论 该院产ESBLs肺炎克雷伯菌中,最常见的ESBLs基因型为SHV-12和CTX-M-14型;AmpC酶的主要基因型为DHA-1,菌株中同时产生多种β-内酰胺酶的较多.     

产ESBLs大肠埃希菌的AmpC基因型分析

目的 了解深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌合并产AmpC酶的状况及基因型特点.方法 从近几年深圳市人民医院产ESBLs大肠埃希菌临床菌株中,筛选出对头孢西丁耐药菌株51株,PCR分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,同时应用多重PCR检测菌株的AmpC酶基因,序列测定PCR阳性产物以确定其基因亚型.结果 51株菌中有49株至少检出一种ESBLs或AmpC基因.单ESBLs基因阳性菌株37株(72.5％),单AmpC基因阳性4株(7.8％),合并ESBLs和AmpC基因阳性的8株(15.6％).共有41株(80.4％)含CTX-M-14基因,4株含CTX-M-15,其他基因型ESBLs较少.2株检出两种ESBLs基因;一株同时检三种ESBLs基因.检出AmpC基因的菌株12株,其中10株为DHA-1型,2株为CMY-2型;其中6株DHA-1型及2株CMY-2型菌同时检出CTX-M-14基因.结论 该院头孢西丁耐药产ESBLs大肠埃希菌中大多数为单产ESBLs菌,主要为CTX-M-14型;少数同时产生ESBLs和AmpC酶,AmpC酶以DHA-1型为最常见.     

同时产多种基因型ESBLs肺炎克雷伯菌的分析

目的分析汕头大学医学院第一附属医院临床分离的肺炎克雷伯菌同时产多种基因型ESBLs的情况。方法采用PCR扩增对产ESBLs的肺炎克雷伯菌初步分型,然后PCR扩增阳性产物克隆测序分析,脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型;用浓度梯度法检测10种抗菌药物对同时产多种基因型ESBLs的肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度（MIC）。结果83株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中,发现9株同时产TEM、SHV和CTX-M型,测序结果为CTX-M-3、TEM-1及多种SHV型（SHV12及SHV28）。将这9株细菌作PFGE分析,结果共被分成7个型。药敏结果表明,9株菌除对亚胺培南敏感外,对氨曲南、头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶、丁胺卡那和四环素均高度耐药,对哌拉西林／三唑巴坦、头孢吡肟、环丙沙星极少菌株敏感。结论发现CTX—M-3超广谱-及多种SHV型超广谱-和TEM-1广谱β-内酰胺酶基因同时存在该院临床分离的肺炎克雷伯菌中,耐药十分严重,应引起重视。     

生物被膜肺炎克雷伯菌产ESBLs的耐药性和基因型分析

目的检测临床分离的肺炎克雷伯菌在体外形成生物被膜后产超广谱β-内酰胺酶（Extended-Spectrum β-Laetamases,ESBLs）的情况,分析及研究其耐药性和耐药基因的分型情况。方法采用改良平板法在体外建立肺炎克雷伯菌生物被膜模型,用三维试验确认产ESBLs菌株,用K-B法进行药敏试验,用聚合酶链反应（Polymerase chain reaction,PCR）进行blaSHV、blaTEM和blaCTX—M基因扩增,产物分别克隆人pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型。结果临床筛选出的60株ESBLs阴性肺炎克雷伯菌有46株在体外成功建立了生物被膜模型,并有9株产生了ESBLs表型。产酶后菌株的耐药性明显高于产酶前。PCR结果显示9株细菌均携带SHV基因,有4株同时携带TEM基因,没有检出携带CTX-M基因的菌株。9株细菌的SHV基因分别属于SHV-5、SHV-12和SHV-28亚型。4株携带TEM基因的细菌均为TEM-1亚型。结论生物被膜的形成能够诱导肺炎克雷伯菌产生ESBLs。本实验中检出的产ESBLs的基因型都是由SHV-1突变产生的。生物被膜的形成和产生ESBLs的协同作用是生物被膜肺炎克雷伯菌耐药性增强的主要原因之一。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌blaCTX-M基因的检测

目的了解产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs) 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌在深圳市人民医院的分布情况.方法应用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的表型确证试验,从2000年6月～2003年8月该院临床标本分离株中筛选出不重复的产ESBLs菌株215株,其中大肠埃希菌151株,肺炎克雷伯菌64株,应用聚合酶链反应(PCR)检测所有产ESBLs株的bla(CTX-M)基因.结果 PCR结果显示,大肠埃希菌bla(CTX-M)基因阳性率为92.1%(139/151),肺炎克雷伯菌的阳性率为65.6%(42/64).bla(CTX-M)基因阳性菌株主要来源于临床送检尿和痰标本,并广泛分布于20多个临床科室.结论该院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生的ESBL大多数为CTX-M型,该类酶广泛分布于各临床科室,需引起重视.     

Predominant characteristics of CTX-M-producing Klebsiella pneumoniae isolates from patients with lower respiratory tract infection in multiple medical centers in China

From February 2010 to July 2011, 183 of 416 presumptive Klebsiella pneumoniae isolates with reduced susceptibility to third-generation cephalosporins from patients with lower respiratory tract infection were collected from seven tertiary hospitals in China. Phenotypic and genotypic methods were employed to characterize 158 extended-spectrum β-lactamase (ESBL)-producers. Among the 158 isolates analyzed, 134 (84.8%) harbored bla(CTX-M) , within which the most predominant ESBL gene was CTX-M-14 (49.4%), followed by CTX-M-15 (12.0%) and CTX-M-27 (10.8%). Also, 120 (75.9%) harbored bla(SHV) . One novel SHV variant, bla(SHV -142) with T18A and L35Q substitutions, was identified. Ninety-one isolates carried bla(TEM-1). An isolate containing bla(TEM-135) was first identified in Klebsiella spp. bla(KPC)-2) was detected in 5 isolates. More than one ESBL combination was detected in 18 isolates (11.4%). Fifty-four (34.2%) isolates demonstrated the multidrug resistant (MDR) phenotype. Seventy-four sequence types (STs) were identified, which showed large genetic background diversity in ESBL-producing K. pneumoniae isolates from the six areas. This is the first report on the high prevalence of CTX-M-27 in China with the possible transmission of a single clone (ST48). The correlated surveillance of organisms with MDR phenotype should be investigated in future.     

A preliminary survey of extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli in Japan

We conducted a survey of extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) among 16805 Escherichia coli and 9794 Klebsiella pneumoniae clinical isolates recovered from 196 separate medical institutions during the period January 1997 to January 1998. Using the criteria for minimal inhibitory concentrations (MICs) of oxyimino-cephalosporins of >/=8 microg ml(-1) and confirmation by double-disk test, we detected 15 E. coli and 34 K. pneumoniae isolates producing ESBLs. Genotypes of ESBLs determined by PCR with type-specific primers included one TEM-derived and 24 SHV-derived ESBLs, in addition to 24 Toho-1-type ESBLs, one of the major types of ESBLs reported in Japan. Nucleotide sequence analysis of SHV-specific PCR products revealed that SHV-12 was the dominant type of SHV-derived ESBL. In addition, we also identified TEM-26 and SHV-2. This is the first report characterizing TEM- and SHV-derived ESBLs in Japan.     

Diversity of extended-spectrum and plasmid-mediated AmpC β-lactamases in Enterobacteriaceae isolates from portuguese health care facilities

A group of 124 Enterobacteriaceae isolates resistant to third generation cephalosporins, and collected in distinct health care facilities of different Portuguese regions was analysed. The great majority of the isolates were also resistant to fourth generation cephalosporins (83.9%), monobactam (96%), amoxicillin plus clavulanic acid (85.5%), and piperacillin plus tazobactam (66.9%). Overall, 84.7% (105/124) were multidrug resistant. Molecular methods enabled us to identify 86.3% (107/124) extended-spectrum β-lactamases (ESBL) producers, revealing a diversity of class A β-lactamases from different families, like TEM (TEM-1, TEM-10, TEM-24, and TEM-52), SHV (SHV-1, SHV-12, and SHV-28), CTX-M (CTX-M-1, CTX-M-9, CTX-M-14, CTX-M-15, and CTXM-32), and GES (GES-1). We have also detected class C enzymes like plasmid-mediated AmpC β-lactamases (PMAβs, DHA-1, and CMY-2) and chromosomal AmpCs in Enterobacter and Citrobacter spp. The PMAβ genetic context mapping suggests association with mobile elements, plasmid importation and the potential emergence of these β-lactamases. The most prevalent β-lactamase detected was CTX-M-15 (66.1%) and in 41.1% of the isolates it was associated with TEM-, OXA-type β-lactamases and Aac(6)?Ib-cr, which might indicate that the respective genotype has settled in our country. Indeed, CTX-M-15 was distributed amongst distinct clinical settings of several health care facilities (93.5%) from various regions. We provide evidence of a concerning clinical situation that includes vast occurrence of ESBLs, the settling of CTX-M β-lactamases, and the report of plasmidic and chromosomal AmpC in Portugal.     

blacCTX-M基因与氨基糖苷类抗生素耐药水平的相关性

目的分析β-内酰胺类耐药基因在肺炎克雷伯菌中的分布并评估这些基因对抗生素耐药水平的影响。方法选择76株肺炎克雷伯菌临床分离菌株,用K—B纸片法和MIC法检测抗生素的耐药性;用PCR法检测肺炎克雷伯菌株中β－内酰胺类抗生素的相关基因,RT—PCR的方法检测13-内酰胺类基因的表达。结果76株肺炎克雷伯菌中,ESBLs相关基因主要为SHV（45／76,59．21％）、TEM（27／76,35．53％）和CTX—M（38／76,50．00％）;携带SHV基因菌株对阿米卡星的耐药率（37．78％）明屁高于非携带SHV基因菌株（16．13％）（P〈0．05）。携带CTX—M基因（76．32％）和TEM基因（70．37％）的菌株对庆大霉素的耐药率明显高于不携带CTX—M基因（34．21％）和TEM基因（46．94％）的菌株（P〈0．05）。RT—PCR的结果显示,阿米卡星和庆大霉素耐药株的CTX—M基因mRNA的表达率均明显高于敏感株。结论β-内酰胺类基凶与氨基糖苷类抗生素的耐药相关,CTX—M基因与肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素的耐药水平相关。