ELISA法检测HBeAg假性结果原因分析

目的:探讨ELISA法检测HBeAg假性结果原因方法:用ELISA法检测乙肝血清标志物,对HBsAg阳性而HBeAg阴性的标本以及HBeAg阳性的标本用ELISA法和电化学发光法复查。结果:136例HBsAg阳性而HBeAg阴性的标本经稀释复查后检出10例HBeAg阳性标本。23例溶血标本引起HBeAg假阳性。结论:钩状效应和标本溶血是引起HBeAg假阴性和假阳性的重要原因。必要时应加以复查,以减少HBeAg的错检和漏检。     

乙肝病毒标志物在胎儿和胎盘组织中的表达及其与 HBV母婴传播关系的研究

目的通过对乙肝阳性产妇外周血、胎儿及胎儿附属物进行乙肝病毒标志物的检测,探讨HBV宫内感染发生的机制。方法通过ELISA法及实时荧光定量PCR法检测血清标本中HBV标志物及HBV DNA水平;通过对组织标本的免疫组织化学染色检测组织中HBV标志物的表达。结果胎儿脐血HBV DNA水平与母血HBV DNA水平相关,母血HBV DNA高水平(≥107copy/mL)时脐血HBV DNA阳性率明显增高,P<0.05。胎儿脐血HBV DNA水平显著低于母血HBV DNA水平,P<0.05。胎盘组织可见HBsAg免疫组织化学染色阳性,但未发现HBcAg染色阳性。在引产胎儿胎肝和胎肾组织中发现HBsAg和/或HBcAg免疫组织化学染色阳性细胞。结论母亲HBV DNA高水平是发生HBV宫内感染的高危因素。脐血HBV DNA阳性是判断HBV宫内感染的相关指标;HBV可能通过胎盘感染的途径由母体进入胎儿体内,并可能在胎儿体内定位和复制,这可能是导致HBV宫内感染的原因。     

用ELISA法和核酸电泳法检测牛轮状病毒

本文用ELISA、核酸电泳法检测腹泻病牛粪便标本。21例中检出轮状病毒抗原有4例为阳性,占19.05%。ELISA法与核酸电泳法结果相符,前者被认为是最值得推广的方法。本研究在江西省首次证明了引起牛腹泻的牛轮状病毒的存在,为防治牛腹泻病采取有效手段提供了病原学依据。     

明胶颗粒凝集试验联合ELISA法在梅毒检测中的应用价值

目的分析明胶颗粒凝集试验(TPPA)联合酶联免疫吸附试验(ELISA)在梅毒检测中的应用价值。方法选择我院2015年1月至2018年12月收治的128例疑似梅毒患者为研究对象,将其中43例临床确诊患者纳入梅毒组,余下85例为非梅毒组,全部受试者均接受ELISA法联合TPPA检测,比较单独ELISA法和ELISA联合TPPA检测的结果。结果梅毒组患者中ELISA法诊断阳性35例,阴性8例;ELISA联合TPPA诊断阳性42例,阴性1例;ELISA法假阳性率14.63%(6/41),明显高于ELISA联合TPPA法的2.33%(1/43),差异有统计学意义(χ~2=4.163,P=0.041)。ELISA联合TPPA诊断梅毒的特异性、敏感性、阴性预测值及阳性预测值分别为98.82%、97.67%、98.82%、97.67%,均显著高于单独ELISA检测的92.94%、81.40%、90.80%、85.37%,差异均有统计学意义(χ~2=143.650、6.081、5.575、4.163,P0.001、=0.014、=0.018、=0.041)。结论 ELISA适用于大批量梅毒筛查,TPPA法的特异性及敏感性高,可作为梅毒血清抗体检测的确认试验。二者联合检测能够提高梅毒诊断效能,具有较高的应用价值。     

大肠杆菌合成的HBcAg转化为HBeAg的研究及其应用

37℃用1％β-巯基乙醇处理大肠杆菌HBcAg2小时,可使其全部转化成HBeAg。以常规ELISA方法不能检出HBcAg活性。该制品能被抗-HBe阳性血清特异中和。4℃以液体形式存放稳定,-20℃经过冻融活性下降。HBcAg转化成HBeAg后聚丙烯酰胺凝胶电泳行为有所改变。分别用转化的大肠杆菌HBeAg和血浆HBeAg作为酶联反应的诊断试剂,检测35份HBsAg阳性乙肝病人血清标本的抗-HBe,符合率为91.4％。同用Abbott-HBe(RIA)试剂盒测定的17份HBsAg阳性血清标本的试验结果比较,符合率为100％。说明转化的大肠杆菌HBeAg可代替血浆HBeAg作为检测抗-HBe的诊断试剂应用。     

HBcAg表达菌株的筛选、初步鉴定与DNA顺序分析

为提高HBcAg(乙型肝炎核心抗原)在大肠杆菌体内表达水平,将有HBcAg的基因片段用核酸外切酶从两端消化,插入载体质粒pUR222的EcoRI酶切位点,转化Ecoli BMH71—18,用菌落原位酶联免疫法由275个转化子筛选到7株阳性克隆,用ELISA比较了它们的表达水平,表达水平最高者为M2066菌株,P/N=2.0时菌体裂解液的稀泽度为1:33000’比表达最低者M2098高8,000倍,比第一代菌株M206高15,000倍,DNA顺序分析结果表明与mRNA起始密码上游的发卡结构去除有关。用SDS-PAGE和聚乙烯簿膜复印法检测菌体裂解液中HBcAg的分子量为21000,42000及63000,呈单体和聚合物形式存在,比由病人肝脏和血液中提取的HBcAg(19000)分子量大,为融合蛋白。经琼脂免疫双扩散与ELISA阻断试验未发现与β半乳糖苷酶有免疫学交叉反应。用ELIDA法,M2066-HBcAg与肝-HBcAg同时检测40份血清标本的抗-HBc,二者符合率95％。     

用改进的ELISA法检测腺病毒抗原

用改进的ELISA法检测94份咽拭子标本中的腺病毒抗原,标本先接种人肾细胞,使病毒有一定程度的增殖,同时与传统的病毒分离作对比,结果表明,腺病毒分离阳性的18例,ELISA法检测全部阳性,76例分离阴性(盲传3代)者ELISA法也全都阴性,两者完全相符,ELISA法检测增殖24、48、72小时的细胞培养物腺病毒抗原的阳性率分别为16.7％,72.2％和83.3％,本法特异、可靠、判断客观、可用来检测腺病毒抗原。     

不同疗程小剂量干扰素对慢性乙型肝炎病毒标志物的影响

本文应用小剂量干扰素,从1个月至6个月不同疗程治疗97例HBsAg阳性伴HBeAg阳佳60例慢性乙型肝炎病人,以HBsAg、HBeAg、抗-HBe、HBcAg、DNAP和HBV-DNA 6项作为抗病毒指标,经1个月疗程97例,6项指标均无明显改善,经2个月疗程77例,只有DNAP阳性率下降和HBeAg阳性下降明显,经3个月疗程60例,5项病毒指标(除HBV-DNA外)均有统计学意义的下降,经6个月疗程42例,5项病毒指标阳性率稳定下降,下降缓慢的HBV-DNA(从73.24％下降为23.1％)和HBsAg(从100％下降为50％)也明显下降。这些病毒指标中以DNAP和HBeAg最敏感,次为HBcAg,再为HBV-DNA,最不敏感是HBsAg。本结果表明小剂量干扰素有抑制乙肝病毒复制怍用,长疗程(3个月以上)优于短程。     

中和试验和ELISA法检测育龄妇女血清麻疹抗体的比较

目的:研究中和试验和ELISA两种麻疹抗体检测方法结果的相关性,并初步探讨新生儿对麻疹易感的原因.方法:采集本院住院的85例小于9月龄麻疹患儿母亲血清,同时采集13位幼年患过麻疹的育龄妇女血清作为对照.通过细胞培养测定血清中和抗体滴度,同时使用ELISA诊断试剂定量检测麻疹IgG抗体,统计学分析比较两种检测结果的相关性.结果:98例血清ELISA法和中和试验法两者均阳性89例,总符合率为90.82%,两者结果不符合主要见于抗体浓度较低的标本;两种检测方法麻疹抗体检测结果具有正相关性(R=0.8285,P＜0.001).当中和抗体滴度大于1:16时,ELISA抗体浓度均高于200 mIU/ml;而当ELISA抗体浓度均高于700 mIU/ml,中和抗体均阳性.患儿患病时,其母亲麻疹ELISA抗体平均水平633 mIU/ml,平均中和抗体滴度1:37,而幼年有麻疹史的同龄妇女麻疹ELISA抗体平均水平为1498 mIU/ml,中和抗体滴度为1:182;两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:中和试验和ELISA麻疹抗体检测结果具有良好的相关性;ELISA麻疹抗体浓度高于700mIU/ml是麻疹中和抗体阳性的可靠指标.婴幼儿麻疹易感性增加与其母亲麻疹抗体低下有关.     

应用基因重组Epstein-Barr病毒早期抗原P83蛋白检测鼻咽癌患者血清中的IgA/EA抗体

将pUCB质粒表达的P83蛋白应用于免疫印迹法(IB)和ELISA中,检测了85例鼻咽癌(NPC)患者和100例健康人血清,同时与免疫酶法(IE)作比较。结果表明,免疫印迹法对NPC患者血清阳性检出率为94％;ELISA法阳性检出率为88％;而IE法阳性率为64％。三种方法检测健康人血清出现低水平IgA/EA抗体的阳性率分别为4％、3％及2％。用IE法检测IgA/EA抗体为阴性的NPC患者血清,用IB法检测的阳性率达87％,ELISA法阳性检出率为77％。IB法与ELISA法之间具有较好的正相关(r=0.67,P<0.01)。     

HBcAg基因在甲醇型酵母中的表达、产物纯化及其性质的初步研究

为研究乙肝核心抗原蛋白(HBcAg)在甲醇型酵母(PichiaPastoris)中的表达和性质,用PCR方法将HBcAg基因(L)克隆到P.Pastoris胞内表达载体pPIC3k中,并利用电击和同源重组法,将重组质粒pPIC3kL转化感受态的甲醇型GS115酵母菌株。经过筛选得到阳性P.Pastoris重组子。重组菌株经甲醇诱导培养,表达产物的Western印迹结果表明,HBcAg蛋白能在甲醇型酵母(PichiaPastoris)中诱导表达,产物为一215kDa的蛋白。经蔗糖密度梯度超离心和CsCl密度梯度超离心纯化后,ELISA和密度测定结果表明重组HBcAg蛋白主要分布在密度为12576gml和13013gml的2个峰值处。电镜观察表明,该重组HBcAg蛋白能自主装配成大小不同的2种颗粒(即核心颗粒),大颗粒直径约34nm左右,小颗粒直径约30nm左右。同时,我们还观察到,该核心蛋白颗粒在体外可发生集聚现象。     

应用ELISA法检测SARS-Ab

探讨对SAPS病毒进行临床诊断,分析ELISA法检测SARS-Ab的情况。结果显示对照组检测均为阴性,测试组发病12d前、后阳性检出率分别为2．7％、92％,总检出率为94．7％。29例疑似病人阳性检出率为31％。提示该方法敏感性、特异性强,但12d以前检出率低,而13-16d以后阳性率明显提高。     

免疫-PCR法检测梅毒螺旋体特异性抗体

以梅毒螺旋体重组蛋白为抗原,应用免疫-PCR方法检测梅毒螺旋体抗体,并同常规ELISA法进行比较,探讨免疫-PCR方法检测梅毒螺旋体特异性抗体的可行性。结果免疫-PCR法敏感性是常规ELISA法的104倍,阳性检出率高于ELISA法;对照血清标本梅毒螺旋体抗体检测为阴性。表明免疫-PCR方法具有较高敏感性和特异性,有一定的临床推广价值,对梅毒患者的早期诊断及时治疗等具有重要意义。     

萧山地区524例健康献血者血清中乙肝前S1蛋白调查分析

目的了解健康献血者（指表面抗原阴性、丙肝抗体阴性、艾滋抗体阴性、梅毒抗体阴性、ALT小于25赖氏单位）血清中乙肝前S1蛋白的阳性状况。方法采用ELISA法对萧山地区524例健康献血者作前S1蛋白调查检测,同时对前S1蛋白阳性标本采用放免法,作乙肝三系检测。结果有12例前S1蛋白阳性,阳性率为2．3％,其中有1例乙肝三系核心抗体IgG阳性,其余11例乙肝三系各项指标全阴性。对12例阳性者作跟踪调查,1年后,在12例阳性者中,有4例前S1蛋白仍保持阳性,对4例阳性标本再作乙肝三系检测,除1例1年前核心抗体IgG阳性外,其余3例乙肝三系各项指标仍保持阴性。     

基因重组抗原检测梅毒螺旋体抗体研究

梅毒是一种传染性很强的性传播疾病,早期诊断是防止其传播及治疗的关键。采用基因重组的梅毒螺旋体P47和P15抗原对289份临床标本进行梅毒螺旋体抗体的检测,并与常规方法进行了比较,结果表明：重组抗原ELISA法具有较高的敏感性和特异性,并能对梅毒进行早期诊断,可以代替常规方法检测梅毒螺旋体抗体。186份现患和已治愈梅毒患者标本,重组抗原ELISA法、TPHA法和RPR法均为阳性;60份健康献血员标本,重组抗原ELISA法和TPHA法、RPR法均为阴性;17份与梅毒患者有性接触者的标本,重组抗原ELISA法有2份阳性,而TPHA法、RPR法均为阴性,1个月后复查这2份血清TPHA和RPR均为阳性;6份RPR和类风湿因子均为阳性的血清,重组抗原ELISA法和TPHA法均为阴性,;20份肝硬化患者血清,3种方法检测均为阴性。     

乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)高表达质粒的构建

我们利用了外切酶剪切,人工接头平端连接等DNA重组技术将HBcAg基因片段插入乳糖启动子下游的β-半乳糖苷酶结构基因中,获得了能高效表达HBcAg的重组质粒。ELISA方法检测表明,转化的大肠杆菌每毫升培养物含一万酶联免疫反应单位。     

抗体捕捉ELISA法检测特异性IgM在流行性乙型脑炎诊断中的应用

用抗体捕捉ELISA法(Mac ELISA)检测了临床疑似流行性乙型脑炎病人109例,75例阳性,阳性率为68.8％。经与血凝抑制试验和2-ME处理试验进行比较,结果MacELISA查出的75例阳性中,血凝抑制试验和2-ME处理试验也阳性者54例,阴性者21例,说明本法较常规方法敏感。有6例病人在发病第1天就可测到IgM抗体。第一周的阳性检出率为83.8％。对正常人、其它疾病病人和类风湿因子阳性者的血清测试结果均为阴性。 本试验底物采用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)代替OPD,使方法的敏感性提高4～8倍。用NaN_3终止反应能保持蓝色数月不变,视差明显,易于肉眼观察。     

应用纯化的重组Epstein-Barr病毒早期抗原建立检测鼻咽癌病人血清IgA/EA抗体的ELISA方法

利用凝胶和离子交换柱(Mono Q)两次层析,将大肠杆菌表达的EB病毒早期抗原P138片段多肽纯化。以此P138为抗原,增加鼠抗人IgA单克隆抗体以扩大IgA的反应,建立了三步ELISA法。用本法检查了100例鼻咽癌病人和63例正常人血清中抗EB病毒IgA/EA抗体,病人血清的阳性检出率为86％,正常人有3例阳性(4.7％)。此结果表明,三步ELISA法较常用的间接ELISA法(阳性检出率为71％)敏感。     

小剂量干扰素对慢性乙型肝炎抗病毒治疗的追踪观察

本文对40例曾经小剂量干扰素治疗、疗程达6个月的慢性乙肝患者进行治后6～20个月的追踪观察。从HBV标志物阴转率来看,抗病毒远期疗效结果为HBeAg治前19例阳性中,12例阴转(63.1％),其中6例并出现抗-HBe转阳。DNA-P治前3例阳性中,2例阴转(66.6％)。HBcAg治前2例阳性者也阴转。HBV-DNA治前3例阳性者仅一例阴转。HBsAg 39例阳性中,7例阴转(17.9％)。其中HBeAg及DNA-p阴转率较突出,分别为63.1％及66.6％。再从抗病毒综合反应来看,远期总有效率达57.5％(23/40),其中3例在治后14、15及20个月观察时:HBsAg、HBeAg、HBcAg、DNA-P及HBV-DNA均阴性。对照组20例HBsAg、HBeAg及DNA-P阴转率分别为0％、22.2％及0％。可见并非自然阴转,而是药物作用所致。由此认为小剂量干扰素对抗慢性乙肝病毒远期疗效是可取的,值得深入研究。     

应用ELISA法检测SARS-Ab*

探讨对SARS病毒进行临床诊断 ,分析ELISA法检测SARS Ab的情况。结果显示对照组检测均为阴性 ,测试组发病 1 2d前、后阳性检出率分别为 2.7%、 92 % ,总检出率为94 7%。 2 9例疑似病人阳性检出率为 31 %。提示该方法敏感性、特异性强 ,但 1 2d以前检出率低 ,而 1 3～ 1 6d以后阳性率明显提高。