芽殖酵母细胞周期的检查点调控

芽殖酵母是研究真核细胞的模式菌。细胞周期检查点是确保细胞周期正常运行的一种调控机制。就芽殖酵母细胞周期检查点调控加以介绍。     

酿酒酵母S期检查点通路上web2基因与rad53基因的位置关系

为探讨酿酒酵母(S.cerevisiae)S期检查点通路上,web2(wants E1A badly2,web2)基因与rad53基因的上下游位置及相互作用关系,利用羟基脲(hydroxyurea,HU)分别阻断web2突变株和野生株细胞的DNA合成.采用pHA- rad53质粒救助实验测定质粒源性Rad53蛋白是否能救助web2突变株对羟基脲的敏感性;Western印迹及免疫共沉淀反应检测Rad53蛋白表达及磷酸化.结果显示,pHA-rad53质粒可以救助web2突变株的存活;Western印迹检测到web2突变株内质粒源性Rad53蛋白表达增强而且至少Rad53部分蛋白为磷酸化蛋白.说明在HU作用下,过表达并磷酸化的质粒源性Rad53蛋白可以救助web2突变株的S期检查点功能缺陷,在酿酒酵母S期检查点通路上web2基因位于rad53基因上游,可能直接参与将检查点信号传递至Rad53蛋白.     

从Staphylococcus aureus 307株分离的三个质粒在Bacillus subtilis Ki-2和168株中的表达和特性

Staphylococcus aureus 307株是临床分离的一多重耐药株,其中包括抗氯霉素(Cm~R),抗卡那霉素(Km~R)和抗四环素(Tc~R)。实验结果表明,这三种抗药性是分别为三个质粒所决定的。我们把它们分别称为pC307、pK307和pT307。通过转化把三个质粒引入Bacillus subtilis Ki-2和168株,获得Cm~R Km~R Tc~R转化体。本文研究了这些质粒所携带的抗药基因在Ki-2和168株中的表达,以及质粒在新宿主中的相容性和稳定性。     

插入CpG序列的汉坦病毒S基因真核表达载体的构建及表达

肾综合征出血热(HFRS)是一类由汉坦病毒引起的以发热、出血和急性肾功能损伤为特征的急性病毒性传染病.     

两株具有广谱抗菌性的缓征链球菌的安全性评价

目的通过动物实验对分离于健康儿童口咽部的2株缓征链球菌菌株4-2、4-19进行安全性评价,为呼吸道益生菌的制备提供安全依据。方法对SPF级昆明种小鼠灌胃给予含有菌株4-2和4-19的菌液,观察实验动物是否出现死亡、急性毒性体征、体质量变化、采食量变化、血清淀粉样蛋白A变化和细菌移位生长情况,并对结果进行统计学分析。结果给药后,未发现实验小鼠死亡及急性毒性体征,未观察到细菌移位生长情况,给予菌株4-2后雌性和雄性剂量组与对照组间差异没有统计学意义(F=0.697 0,P=0.567 0;F=1.289 0,P=0.312 0)。给予菌株4-2的1 d后,雌性小鼠低、中剂量组较其他组别体质量变化量小(F=4.402 0,P=0.019 0),雄性小鼠高、中、低剂量组体质量变化量小于对照组(t=-0.800 0,P=0.035 0;t=1.000 0,P=0.011 0;t=-0.800 0,P=0.035 0);给予菌株4-19的1 d后,雌性、雄性小鼠体质量变化量与对照组差异无统计学意义(F=2.024 0,P=0.151 0;F=2.507 0,P=0.096 0)。给予菌株4-2的7 d内,雌性小鼠中剂量组和低剂量组采食量大于对照组(t=0.171 4,P0.001 0;t=1.276 1,P=0.001 0),雄性小鼠剂量组与对照组采食量差异无统计学意义(F=0.327 0,P=0.806 0);给予菌株4-19的7 d内,低剂量组采食量大于对照组(t=2.137 5,P=0.036 0),雄性小鼠剂量组与对照组采食量差异无统计学意义(F=2.631 0,P=0.073 0)。结论菌株4-2、4-19在为期7 d的急性毒性动物实验中,未发现毒性表现,可用于呼吸道益生菌菌株的选择。     

沈阳市某三甲医院呼吸重症监护室病原菌分布及其耐药性

目的 分析沈阳市某三甲医院呼吸重症监护室（RICU）患者相关样本病原菌分布及其耐药性,为呼吸重症患者感染的治疗提供参考。方法 回顾性分析该院2021年6月至2022年6月收治的253例RICU患者的病例数据,通过API菌种鉴定系统及纸片扩散法药物敏感性试验检测送检的体液和组织标本中病原菌分布及其药敏情况。结果 RICU患者检出阳性标本共147例,阳性率58.10%;检出革兰阳性细菌39株（11.24%）、革兰阴性细菌206株（59.37%）、真菌102株（29.39%）。占比排名前5位的病原菌为鲍曼不动杆菌（21.90%）、白假丝酵母菌（12.10%）、肺炎克雷伯菌（10.37%）、热带假丝酵母菌（7.49%）、铜绿假单胞菌（5.19%）。病原菌耐药性分析显示,鲍曼不动杆菌对常见抗生素均耐药;白假丝酵母菌对常用的抗生素均表现为敏感,但热带假丝酵母菌对伏立康唑和氟康唑的耐药率超过50.00%;相比痰液,尿液中肺炎克雷伯菌的耐药率较高;铜绿假单胞菌对亚胺培南、替卡西林/克拉维酸的耐药率均超过50.00%。结论 该院RICU患者主要是以革兰阴性细菌和真菌感染为主,其中鲍曼不动杆菌和白假丝酵母...     

基因重组抗原检测梅毒螺旋体抗体研究

梅毒是一种传染性很强的性传播疾病,早期诊断是防止其传播及治疗的关键。采用基因重组的梅毒螺旋体P47和P15抗原对289份临床标本进行梅毒螺旋体抗体的检测,并与常规方法进行了比较,结果表明：重组抗原ELISA法具有较高的敏感性和特异性,并能对梅毒进行早期诊断,可以代替常规方法检测梅毒螺旋体抗体。186份现患和已治愈梅毒患者标本,重组抗原ELISA法、TPHA法和RPR法均为阳性;60份健康献血员标本,重组抗原ELISA法和TPHA法、RPR法均为阴性;17份与梅毒患者有性接触者的标本,重组抗原ELISA法有2份阳性,而TPHA法、RPR法均为阴性,1个月后复查这2份血清TPHA和RPR均为阳性;6份RPR和类风湿因子均为阳性的血清,重组抗原ELISA法和TPHA法均为阴性,;20份肝硬化患者血清,3种方法检测均为阴性。     

WEB2基因在酿酒酵母S期检查点通路上调控RNR3基因表达

WEB2基因参与酿酒酵母S期检查点调控机制,而RNR3基因位于该调控通路末端,DNA损伤或合成阻断时,S期检查点通路诱导RNR3过度表达。因此,通过确定WEB2在该检查点通路上是否参与调控RNR3基因的表达,将有助于进一步明确WEB2基因在检查点通路上的工作位点,了解WEB2基因如何发挥检查点调控功能。构建RNR3-LacZ基因融合质粒,用于检测酵母细胞内RNR3基因的诱导性。诱导性可以通过测定β-半乳糖苷酶的活性而得知。利用DNA损伤药物甲磺酸甲酯(MMS)及DNA合成阻断剂羟基脲(HU)处理酵母细胞,测定WEB2基因突变株和野生株细胞内RNR3基因的诱导性。结果,WEB2突变株细胞中诱导活性分别增加(8.27±0.38)倍和(9.55±0.24)倍,而野生株分别增加了(83.32±2.42)倍和(124.67±2.87)倍。反映RNR3基因在WEB2突变株中的诱导性低于野生株。同RAD53突变株相比,后者的RNR3基因的诱导性更低,仅为(2.37±0.18)倍和(2.91±0.13)倍。说明WEB2基因突变影响S期检查点通路的信号传递至RNR3基因,所以在酿酒酵母S期检查点通路上,WEB2工作在RNR3基因上游,参与调控RNR3的表达,但调控能力不如RAD53基因强。     

插入CpG序列的汉坦病毒S基因真核表达载体的构建及表达

To improve the effect of the gene immunization against Hantaan virus, we constructed the eukaryotic expression vector pTARGET-hans(ISS) containing Hantaan Virus S gene coding region and CpG motif by cloning S gene segment with CpG motif into eukaryotic expression vector pTARGET^TM.After conformed by enzyme analysis, the recombinant expression vector pTARGET-hans(ISS) was transferred into Vero-E6 cells by electroporation and the transient expression of Hantaan virus nucleocapsid protein was detected by indirect immunofluorescence assay(IFA). In some transferred Vero-E6, the green fluorescence was showed, thus we can conclude that the eukaryotic expression vector pTARGET-hans(ISS) was successfully constructed and expressed in vitro,which will lay a foundation for further animal vaccination.     

沈阳市夏冬季慢性阻塞性肺疾病患者 上呼吸道微生态状况

目的探讨在沈阳市夏、冬两季不同空气污染程度条件下,慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性发作期患者上呼吸道菌群的改变,了解明确暴露于不同大气污染天气下,患者口咽部、呼吸道黏膜微生物菌群的动态变化,为由大气污染引起的呼吸道感染防治提供科学依据。方法选取2017年11月-2018年1月,以及2018年7月-9月沈阳市某三甲医院呼吸科COPD急性发作期各30例患者的咽拭标本,对需养菌和厌氧菌进行分离培养、纯化、16SrDNA鉴定。结果分析沈阳市两季节COPD急性发作期65～85岁患者的咽后壁菌落,得到夏季大气污染情况较轻空气中颗粒物质较少时,需氧菌的优势菌以口腔链球菌为主,厌氧菌以微小消化链球菌为主;空气污染较重的冬季需氧菌的优势菌以灰色奈瑟菌为主,厌氧菌以韦荣球菌为主。结论相比于夏季,冬季患者咽后壁的菌群多样性更为丰富,优势菌与夏季也有不同,考虑与季节不同空气污染程度不同有关。