逆转录套式PCR检测粪便样本中的SARS冠状病毒

为了观察SARS冠状病毒在SARS患者粪便中的存在规律,建立了检测SARS冠状病毒RNA的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,并应用该方法检测了241份SARS患者粪便样本。部分PCR产物应用测序技术进行验证。RT-PCR的灵敏度为10^-10稀释度的病毒原液(原液为10^8TCID50／ml)。241份粪便样本的总体检出率为24．1％(58／241),其中发病后的前10d和20d的检出率均为50．0％。随着发病时间的延长,阳性检出率呈下降趋势。应用RT-PCR从粪便中检测SARS冠状病毒是可行的,在发病50d以后仍有17．0％左右的阳性检出率,提示SARS恢复期患者具有排毒的可能性,给后续的卫生防疫措施提供了一定的参考数据。     

应用ELISA法检测SARS-Ab

探讨对SAPS病毒进行临床诊断,分析ELISA法检测SARS-Ab的情况。结果显示对照组检测均为阴性,测试组发病12d前、后阳性检出率分别为2．7％、92％,总检出率为94．7％。29例疑似病人阳性检出率为31％。提示该方法敏感性、特异性强,但12d以前检出率低,而13-16d以后阳性率明显提高。     

血清CEA、NSE、CYFRA21-1 联合支气管活检在周围型肺癌诊断鉴别中的应用

目的:探讨血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)联合经纤维支气管镜肺活检(TBLB)在周围型肺癌诊断鉴别中的应用价值。方法:选择2012年9月到2014年9月在我院临床确诊的402例周围型肺癌患者。检测所有患者的血清CEA、NSE和CYFRA21-1的浓度及分析TBLB检测结果,分析不同病理类型和不同病灶直径大小时各项检测指标及联合检测的阳性检出率。结果:所有肺癌患者中,血清CEA、NSE、CYFRA21-1和TBLB的阳性检出率分别为51.74%,35.07%,41.79%和60.70%。四项指标联合检测的阳性检出率为89.05%,明显分别高于四项指标的阳性检出率(均P0.05)。腺癌、鳞癌、小细胞肺癌及其他类型肺癌组四项联合检测的阳性检出率明显高于四项单独检测(均P0.05)。病灶直径为2 cm、2-6 cm和6 cm时,四项联合检测的阳性检出率明显高于四项单独检测(均P0.05)。结论:血清CEA、NSE、CYFRA21-1联合TBLB检测周围型肺癌较单项检测,阳性检出率高,值得在临床上推广应用。     

血中检测SARS冠状病毒N蛋白在SARS实验室早期诊断中的作用

为明确严重急性呼吸综合症(SARS)冠状病毒N蛋白在SARS实验室早期诊断中的作用,通过微量中和试验及酶联免疫方法、间接免疫荧光法检测疑似病人恢复期血清(大于28天)中SARS-IgG抗体,确诊SARS患者。同时收集发病不同时期SARS及普通发热病人血清,利用酶联免疫方法检测SARS-CoVN蛋白,并与荧光定量PCR早期诊断方法相比较。共检测：广州地区2003年12月～2004．年1月新发4例确诊SARS患者不同时期的血液和咽漱液标本;恢复期血清SARS-CoV中和抗体阳性病人不同时期的血清46份;广州地区2003年1月～4月临床确诊SARS患者159例的血清和56例疑似患者血清;非SARS普通发热病人血清97份;正常人体检血清100份。结果：4例新发SARS患者的不同时期标本中,3例患者急性期血均检出N蛋白,优于常用的荧光定量PCR检测方法。46份SARS-CoV中和抗体阳性的血清标本,N蛋白检出率为100％。159例临床确诊病例中,发病早期5天以内SARS-CoVN蛋白的检出率为92．3％,随后呈现逐步下降的趋势,在发病第18天仍可检出。56例临床疑似患者发病早期也有23．2％检出率。而97例普通发热病人及100份正常人血清中均未能检测出SARS-CoVN蛋白。表明在血清中检测SARS冠状病毒N蛋白的方法敏感性和特异性都好,对SARS实验室早期诊断具有重要作用。     

内蒙地区发热患者血清中冠状病毒抗体的检测

目的分析内蒙地区发热患者中冠状病毒的感染情况。方法以SARS冠状病毒感染Vero细胞涂片为冠状病毒抗原片,用间接免疫荧光法分别检测55例发热患者和68例正常人血清中冠状病毒的IgG、IgM抗体。结果发热患者血清中冠状病毒IgG抗体和IgM抗体阳性率分别为29.1%(16/55)和10.9%(6/55),而正常人血清中只检测到2.9%(2/68)的IgG抗体,且未检测到IgM抗体,2组患者的IgG和IgM抗体阳性率比较差异均有显著性;随机选取7例患者的IgG阳性血清进行SRAS冠状病毒的特异性抗体封闭实验,结果有6例血清仍为阳性,有1例血清转为阴性,说明冠状病毒IgG抗体阳性血清中85.7%为普通冠状病毒特异性,14.3%为SARS冠状病毒特异性。结论普通冠状病毒是内蒙地区发热患者的主要病原体之一,部分患者还存在SARS冠状病毒的既往感染。     

SARS冠状病毒N蛋白基因的克隆、表达及活性测定

利用PCR基因扩增法,以SARS冠状病毒全基因质粒为模板,获得N蛋白相应抗原基因,构建了表达载体pBV220／SARS-N,并在E．coli中获得高效表达。用纯化后的N蛋白抗原包被测定板,通过间接ELISA法对阴阳性血清进行活性测定,结果表明,在46份阳性血中有41份被测出,检出率为89．13％。本研究克隆并表达了SARS冠状病毒N蛋白,为进一步研制SARS病人抗体检测试剂和SARS疫苗奠定了基础。     

629例住院儿童临床七种常见呼吸道病毒分布特征

目的了解本地区七种常见呼吸道病毒临床分布特征,旨在为呼吸道病毒的预防、治疗提供帮助。方法随机选取2 001例呼吸科住院患者样本,采用直接免疫荧光法进行呼吸道病毒抗原检测。结果 2 001例患者样本中,共检测出629例阳性病毒,阳性率为31.43%,阳性率前三位的病毒依次为甲型流感病毒(FluA)、呼吸道合胞病毒(RSV)、乙型流感病毒,分别为12.14%、9.90%和3.80%,而副流感病毒II型检出率最低,为0.50%。冬、春季节为呼吸道病毒高发季节,其中一月和二月的检出率高达56.91%和43.15%;而夏、秋季节检出率相对较低,六月的检出率仅为7.00%;1岁年龄组病毒阳性检出率最高,且随年龄增大,阳性检出率明显降低。结论冬、春季节是呼吸道病毒的高发季节;FluA和RSV是呼吸道感染中最常见的病毒;1岁年龄组病毒阳性检出率最高。     

1860例阴道炎患者阴道分泌物病原体结果分析

目的了解阴道炎妇女阴道分泌物病原体感染状况。方法应用病原体培养,显微镜下直接检测等方法,对1 860例女性阴道炎患者取分泌物检测淋球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)、细菌性阴道病(BV)、念珠菌及滴虫等进行病原体感染状况调查。结果 NG阳性检出率为1.08%,CT阳性检出率为16.7%,UU阳性检出率为32.2%,BV阳性检出率为9.2%,念珠菌阳性检出率为35.0%,滴虫阳性检出率为5.8%,同时发现多种病原体混合感染模式。结论临床上应重视分泌物病原体检查,只有明确病因,患者才能得到及时有效的治疗。     

SARS冠状病毒感染恒河猴的病毒、血清学检测研究

[目的]对感染SARS-CoV的恒河猴进行病毒、血清学等指标检测及研究,确定模型动物成功感染,并为SARS发病机制,疫苗评价,药物筛选确定参考指标。[方法]SARSCo-V经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第1天开始到5、7、10、15、20、30和60天分别安乐死时,不同时间取咽拭子、血液和脏器,进行病毒分离,RT-PCR检测和抗体测定。[结果]用巢式RT-PCR在感染后每天提取的咽拭子标本中检测SARS-CoV的RNA,以细胞培养冠状病毒为阳性对照,以正常恒河猴咽拭子为阴性对照,在8只动物病毒接种第5天开始可检测到大小为797bp的目的条带,阳性检出最长可持续到第15天。进一步用病毒分离实验对PCR结果进行确证,8只动物中的5只恒河猴接种5天的咽拭子标本中,经Vero细胞培养,细胞产生了典型细胞病变(CPE),提示SARS冠状病毒能感染恒河猴并有病毒的复制和排毒。IFA方法证实为SRAS-CoV抗原存在。SARS-CoV感染恒河猴后,可以检测出免疫反应。在SARS冠状病毒接种前和接种后第5、8、11、15、19、23、26、30、34、每隔4-7天以及安乐死时采血,制备血清测定抗体,8只恒河猴接种病毒前均血清中SARS冠状病毒特异性抗体IgG为阴性,10天后安乐处死的5只感染猴在11-15天开始,至安乐死时,均为阳性。IgG阳性的5只恒河猴均有一定的中和抗体产生,且对SARS病毒感染细胞有一定的保护性。感染SARS病毒猴后与正常猴比较,其细胞杀伤效应明显增强。感染SARS-CoV的恒河猴不仅出现与SARS患者类似的临床和病理学改变,也在一定时期内排毒,出现特异免疫反应,这些指标均可作为药物筛选、疫苗评价等方面的重要参数。     

宫颈特殊染色法、液基薄层细胞学及人乳头瘤病毒检测对宫颈癌前病变的应用价值分析

目的:探讨宫颈特殊染色法(FRD)、液基薄层细胞学(TCT)及人乳头瘤病毒(HPV)检测对宫颈癌前病变筛查的应用价值。方法:选取2015年1月～2018年1月于我院行宫颈癌筛查的1794例妇女作为研究对象,所有研究对象均接受FRD、TCT、HPV检测,以经阴道镜取样活检结果为阳性标准,对比分析三种不同检测方法以及联合检测的诊断效能。结果:病理科活检检出阳性111例,检出率为6.19%;FDR检测检出阳性114例,检出率为6.35%,漏诊率为16.22%;TCT检测检出阳性115例,检出率为6.41%,漏诊率为19.82%;HPV检测检出阳性108例,检出率为6.02%,漏诊率为19.82%;FRD检测与TCT、HPV检测的检出率比较差异无统计学意义(P0.05)。FRD检测敏感度为83.78%,特异度为98.75%,阳性预测值为81.58%,阴性预测值为98.93%;TCT检测敏感度为80.18%,特异度为98.46%,阳性预测值为77.39%,阴性预测值为98.69%;HPV检测敏感度为80.18%,特异度为98.87%,阳性预测值为82.41%,阴性预测值为98.70%;FRD、TCT、HPV联合检测敏感度为93.69%,特异度为99.52%,阳性预测值为92.86%,阴性预测值为99.58%;FRD、TCT、HPV联合检测与FRD、TCT、HPV单独检测的敏感度、阳性预测值比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:FRD、TCT、HPV检测对宫颈癌前病变的诊断效能相当,而FRD、TCT、HPV联合检测的诊断效能优于各方法单独检测。     

临床应用重组SARS病毒双抗原夹心诊断试剂盒的检测效果评价

严重急性呼吸综合征(severe acute respiralory syndrome,SARS)的临床表现为非典型性肺炎.继加拿大首次完成SARS病毒株Tor2的全基因组测序后[1],世界卫生组织(WTO)宣布一种新型的冠状病毒(coronavirus)是引发SARS的病原体[2,3].由于SARS具有极强的传染性和较高的病死率(5%～15%),且早期疾病体征较难与某些非SARS病毒引起的非典型肺炎相区分[4],由此导致大量疑似病例无法确诊,以及因误诊引起的交叉感染给人们造成巨大的心理压力和社会恐慌.所以,建立快速、准确的早期诊断方法显得尤为重要.目前的实验室诊断方法中,主要有基于病毒抗体检测的免疫荧光法和酶联免疫吸附试验(ELISA),以及基于基因检测的多聚酶链式反应(PCR)和基因芯片法.其中ELISA主要是使用病毒裂解抗原,检测病毒IgG及IgM抗体的间接ELISA.由于病毒裂解抗原的复杂性,以及间接ELISA中二抗带来的假阳性结果,间接ELISA试剂在正常人群中有1.5%～2%的阳性结果.     

铜绿假单胞菌检测方法的比较与优化北大核心CSCD

通过铜绿假单胞菌检测方法比较和优化以期获得一种准确度高、操作简单且对实验条件要求不高的检验方法。实验以VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统鉴定结果为参考,采用GB 8538.57-2016和GB/T7918.4-1987中铜绿假单胞菌的检测方法,对27株试验菌株进行鉴定试验。结果表明,GB 8538.57-2016方法检测结果准确度最低,假阳性检出率为29.6%,GB/T7918.4-1987假阳性检出率为7.4%。以GB 8538.57-2016铜绿假单胞菌的检测方法为例,优化后的检测方法增加了血琼脂平板培养、革兰氏染色及镜检和对血平板所有可疑菌落进行绿脓菌素试验。用改进后的GB 8538-2016铜绿假单胞菌检测方法对27株试验菌株进行验证试验,检验结果与VITEK 2 Compact一致。     

应用套式RT-PCR检测SARS患者血液样品中SARS冠状病毒

建立了套式RT-PCR方法检测SARS患血液样品中SARS冠状病毒的方法,并检测血液样品257份。同时将RT-PCR与ELISA检测IgG、IgM的方法进行了比较。结果RT-PCR方法的总检出率为72％,IgG总检出率为68％,IgM总检出率为43％。     

实时荧光定量PCR技术在SPF鸡四种垂直传播疾病监测中的应用

目的探讨荧光定量PCR检测技术对SPF鸡四种垂直传播病毒的检测应用。方法采集60份SPF鸡及70份普通鸡群蛋清、泄殖腔试子样品,提取样品核酸,分别进行ARV、REV、CAV、ALV四种病毒实时荧光定量PCR检测,根据标准曲线及溶解曲线分析判读样品病毒拷贝数。结果 SPF鸡ALV 2份阳性,检出率3.3%,其余病毒检测均为阴性;普通鸡样品REV检测2份阳性,检出率2.9%,ALV 10份阳性,检出率14.3%。结论荧光定量PCR检测方法最低可检测到100个拷贝核酸,检测灵敏度较高,有望应用于SPF鸡临床样品的病原检测。     

检测人血清中SARS冠状病毒IgG抗体的ELISA方法建立及其应用

为了建立方便、敏感和特异的SARS病毒血清学诊断方法,利用PQE30表达系统在大肠杆菌M15中分段高效表达了SARS病毒N蛋白.通过金属鏊合亲和层析纯化了目的蛋白N-1和N-2,Western blot结果显示,两个表达蛋白均具有较好的抗原性.然后将N-1和N-2蛋白共同包被,建立了检测人血清中SARS病毒IgG抗体的间接ELISA法.用此方法检测120例临床诊断为SARS的病人和244个不同年龄组正常人血清IgG抗体,结果120例SARS病人的第一份血清IgG抗体总阳性率为60.0%,发病第0～7、8～10、11～14、15～27和28天后的血清中,SARS病毒IgG抗体阳性率分别为0、11.1%、60.0%、60.5%和70.3%;而244份正常人血清检测结果均为阴性,包括100份14岁以下儿童血清也未发现假阳性.结果表明,利用大肠杆菌表达的N蛋白完全能够替代全病毒灭活抗原,所建立的间接ELISA方法简单,价格低廉,能保证生物安全,对SARS可疑病例的确诊和排除具有重要的实际应用价值,可用于SARS高危人群的血清流行病学监测,SARS疫情的控制和预防,以及SARS病毒蛋白功能的研究.     

铜绿假单胞菌检测方法的比较与优化

通过铜绿假单胞菌检测方法比较和优化以期获得一种准确度高、操作简单且对实验条件要求不高的检验方法。实验以VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统鉴定结果为参考,采用GB 8538.57-2016和GB/T7918.4-1987中铜绿假单胞菌的检测方法,对27株试验菌株进行鉴定试验。结果表明,GB 8538.57-2016方法检测结果准确度最低,假阳性检出率为29.6%,GB/T7918.4-1987假阳性检出率为7.4%。以GB 8538.57-2016铜绿假单胞菌的检测方法为例,优化后的检测方法增加了血琼脂平板培养、革兰氏染色及镜检和对血平板所有可疑菌落进行绿脓菌素试验。用改进后的GB 8538-2016铜绿假单胞菌检测方法对27株试验菌株进行验证试验,检验结果与VITEK 2 Compact一致。     

SARS冠状病毒结构蛋白在血清学诊断中潜在应用价值的比较

为了确定特异的SARS抗体检测抗原,比较了SARS冠状病毒(SARS-CoV)主要结构蛋白与SARS患者血清的反应性。从SARS死亡患者的肺组织提取的总RNA为模板,用RT-PCR技术分别扩增S、N、M和E4种结构蛋白基因,对3种S截短突变体和N、M、E的重组蛋白在大肠杆菌中进行表达。以表达的蛋白为抗原,应用Western blot跟踪检测11例SARS患者血清54份。结果显示：SARS—CoV的重组N蛋白和s蛋白有很强的抗原性,s蛋白的3个区段的抗原性强弱存在差异,S3抗原性强于S1和s2;在患病第1周、2周、3周及3周以上,N蛋白和s3蛋白抗体检出率分别为40％、65。2％、100％、100％和40％、61％、76.2％、100％;提示SARS-CoV重组N蛋白和S3蛋白在SARS的血清学诊断中有一定的应用价值。     

驯养中缅树鼩的消化道寄生虫监测及寄生蠕虫驱虫效果

目的了解野外树鼩和驯养树鼩寄生虫感染情况及其驱虫效果。方法 随机选取野外捕获3 d和已驯1个月(未驱虫)、F1代、F2代、F3代树鼩,各五笼,每笼3～4只,用饱和食盐水漂浮法检查粪样虫卵或卵囊,根据形态学鉴定虫种。结果粪样共检获两种寄生性线虫虫卵(毛尾线虫和奇口线虫)、膜壳绦虫卵、一种球虫卵囊。野外捕获3 d和驯养1个月树鼩的线虫卵检出率最高,达100%;绦虫卵检出率分别达60%和20%;球虫卵囊检出率分别达40%和20%。驯养F1代、F2代、F3代树鼩,仅F2代1笼检出线虫卵,检出率为20%。驱虫当天粪样检出的线虫虫卵、绦虫卵和球虫卵囊与驱虫前检出结果比例一致,并收集到39条奇口线虫、3条毛尾线虫、18条长膜壳绦虫。驱虫后第2天和第3天均未收集到虫体,粪样中也未检测到线虫卵和绦虫卵,仅检测到球虫卵囊。结论为树鼩实验动物化的消化道寄生虫病的监测和控制提供基础信息。     

M蛋白分型联合本周蛋白检测在多发性骨髓瘤中的应用

[目的]探讨血清M蛋白联合尿本周蛋白检测在多发性骨髓瘤中的应用价值。[方法]选择335例多发性骨髓瘤患者,利用毛细管区带电泳-免疫消减法和免疫固定电泳分别对血清M蛋白和尿本周蛋白进行检测,分析两种方法的优势及局限性。[结果] M蛋白分型结果显示,238例为M蛋白阳性,检出率为71. 0%,其中Ig G型146例(61. 4%),IgA型55例(23. 1%),IgM型5例(2. 1%),轻链型32例(13. 4%)。尿本周蛋白结果为,208例患者结果为阳性,检出率为62. 1%。二者联合判读检出率为85. 7%。10例尿本周蛋白阳性患者尿液中还检测到了完整免疫球蛋白。97例M蛋白阴性患者中,49例为尿本周蛋白阳性。[结论]血清M蛋白联合尿本周蛋白检测可显著提高多发性骨髓瘤检出率,具有较高的临床价值。     

细菌自动培养仪厌氧培养的临床应用

目的 :探讨用细菌自动培养仪作厌氧培养的临床应用价值。方法 :选用 mini VITAL 全自动荧光血培养仪检测常见临床标本 5472份 (其中血液 4869瓶、胸腹水 2 40瓶、脓腔及组织穿刺液 175瓶、脑脊液12 2瓶、骨髓液 2 3瓶、胆汁及其引流液 2 1瓶、其他 2 2瓶 )厌氧培养结果 ,对其阳性检出率、检出细菌种类和时间、假阳性以及药敏结果进行综合分析和评估。结果 :设定收瓶时间为 5d,厌氧培养的阳性检出率为2 5.51% (其中胆汁 76.19% ,脓汁 57.14 % ,血液 2 5.2 8% ,胸腹水 14 .17% ,骨髓 13 .0 4% ,脑脊液 5.74% ) ;共检出各种感染菌 3 3属 77种 ,专性厌氧菌、微需氧菌和兼性厌氧菌的比例为 4.8∶ 1.0∶ 94.2 ;专性厌氧菌的平均检出时间为 (2 6.13± 2 0 .59) h;兼性厌氧菌的检出时间厌氧株比需氧株平均延长 -0 .54～ 4.7h;假阳性率 0 .16% ;药敏结果厌氧株的耐药率普遍较需氧株低。结论 :仪器厌氧培养简便、快速、安全、有效 ,是临床常见标本检测厌氧菌值得推荐使用的方法 ;与需氧培养配对应用可提高培养阳性检出率