“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验的改进及操作建议

分析DNA和RNA在细胞中的分布状况;针对实际教学中存在的问题进行剖析,推测实验失败的原因,通过对教材实验步骤、材料的适当改进和验证,证明了改进后的实验方案切实可行。     

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”的实验反思

按照人教版必修1生物学教材"观察DNA和RNA在细胞中的分布"的实验步骤进行操作,实验效果不理想,学生提出质疑。教师引导学生查阅资料,采用不同的处理方法设计实验步骤并分组进行实验,通过比较观察,找出最佳实验方案,获得理想实验效果。     

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验的改进

"观察DNA和RNA在细胞中的分布"在实际教学中实验效果不理想。通过探究实验发现Triton X-100可以作为代替盐酸解离作用的透膜剂,避免盐酸解离过度影响甲基绿对DNA的染色,取得了非常好的实验结果。Triton X-100在本实验中最适使用浓度为0.1%～1%,最适透膜时间为5 min。系统地总结了前人对"观察DNA和RNA在细胞中的分布"实验的改进,提出一套稳定且行之有效的实验操作方案。     

关于"观察DNA和RNA在细胞中的分布"实验的改进建议

人教版高中新课标教材“分子与细胞”中“观察 DNA和RNA在细胞中的分布”这一实验效果不理想, 即细胞核内的DNA很难被染料染成实验预期中的绿色。笔者反复重做该实验后得出以下结论:实验失败的关键在于实验前的酸处理对染色效果的影响以及酸对DNA的结构的影响。     

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”的实验教学组织

对“观察DNA和RNA在细胞中的分布”这个实验中的试剂配制及实验步骤做了适当的改进,并分析了该实验的教学组织过程.实验结果表明:细胞核能很好地被染成绿色,细胞质被染成淡红色,改进后的方法使实验操作更简单,实验效果更明显.     

磁珠法快速提取基因组DNA的实验研究

针对临床标本基因组DNA的提取方法缺乏广泛适用性,提取步骤繁琐,需要进行离心操作,并且提取过程中会用到苯酚、氯仿等有机试剂,会对操作人员有一定的危害性等不足,本研究拟建立一种适用于临床标本的基因组DNA快速提取方法。在传统的基因组DNA提取试剂和方法的基础上,本研究采用二氧化硅修饰的超顺磁珠设计了一种基因组DNA快速提取方法;探讨磁珠用量、裂解液p H、盐酸胍浓度等因素对基因组DNA提取效率的影响并采用凝胶电泳实验进行验证。当磁珠用量在50~100μg/100 mg样品,裂解液p H约为6,盐酸胍的浓度为6 mol/L时基因组DNA提取效果好、效率高,且磁珠的用量与吸附表面积成正比,但达到一定用量后不会增加提取量,对于100 mg肺组织,适宜的磁珠用量为80μg。此基因组DNA提取方法高效省时,简便快捷,性价比高,适用临床大量样本基因组DNA提取。     

双向凝胶电泳缺陷胶及其原因

双向凝胶电泳是蛋白质组学研究中的关键技术之一,涉及较多的实验步骤和试剂,常出现缺陷胶而导致实验失败。从数千张电泳胶图中选取了21张典型的缺陷胶图,对它们进行了归类和总结,分析和讨论了形成缺陷胶的多种原因,提出了实验改进的方法和注意事项。     

盐酸催化水解槐角异黄酮的研究

利用盐酸甲醇溶液对槐角总异黄酮进行水解制备染料木黄酮。采用高效液相色谱法检测槐角异黄酮水解率。探讨水解时间、盐酸浓度和水解温度对异黄酮水解率的影响,并通过响应面法确定最佳水解条件。实验结果表明最佳水解条件为:水解时间3.8 h、盐酸浓度2.59 mol/L、水解温度78.5℃。在此工艺下,槐角异黄酮水解率达93.38%。     

盐酸催化蔗糖水解中反应速率常数和盐酸浓度等温关系式

酸催化水解蔗糖生产果葡糖浆要求在盐酸存在下蔗糖水解生成葡萄糖和果糖。盐酸的浓度和反应温度是影响蔗糖水解速率常数的最重要的两个因素。为了达到理想的恒温效果,本文对旋光仪组装了恒温系统;首次通过测定不同盐酸浓度条件下蔗糖水解速率常数拟合出盐酸浓度对蔗糖水解速率常数的新的等温式。实验证实,拟合所获得的等温式具有K=a0 a1CH a2expCH 的形式,这个拟合公式比logK=Ka log(d-c)-(5670/T)-pH文献公式氢离子浓度适用范围更大;比K=K0 KH .CnH 文献公式对数据的拟合更好。     

仿刺参基因组DNA提取方法改进

开发了利用仿刺参管足活体取样提取基因组DNA的方法。按照传统方法提取仿刺参基因组DNA需要杀死实验对象并剖取体腔内纵肌(通常100mg)作为实验材料,并且实验过程中常常因为仿刺参的生物学性状而影响最终实验效果。以仿刺参在生活状态下拔取少量管足(10～20mg即可)作为取样源,在保持仿刺参的生活力不受影响的同时提高了取样效率。对仿刺参基因组DNA的提取方法进行了改进优化,并在常规海洋动物基因组DNA提取方法的基础上增加了部分操作步骤。与常规的基因组DNA提取方法相比,改进后的方法获取的基因组DNA完全符合后续实验要求。而且可随时根据即时效果(中间检测)和后续实验要求调整实验步骤,更增加了实验的可操作性。     

单链DNA纯化对变性PAGE凝胶银染片段回收效率的提高

为了提高变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）银染后片段回收的效率,本实验在传统的煮沸法的基础上加入单链DNA纯化的步骤对水稻基因组CCGG为点甲基化敏感限制性酶切多态性（MSAP）分析片段进行回收,并对加入该步骤后的再扩增的效率与传统煮沸法进行了比较。实验结果显示,加入单链DNA纯化步骤后的回收效率比传统煮沸法提高了约6倍。改进后的方法可以有效地用于扩增片段长度多态性（AFLP）以及MSAP等差异显示PAGE凝胶银染DNA片段的回收。     

龙胆紫希夫氏液显示DNA染色新方法

应用龙胆紫配制成Schiff(希夫氏)试剂,在微波辐射下进行Feulgen染色,结果使正常及良、恶性肿瘤组织细胞核内DNA着紫红色,并能应用真彩色图像仪进行DNA的定量分析.其方法操作简便,便于临床病理诊断应用.现介绍如下.标本的采集:活检手术切取的肿瘤组织100余例,经甲醛固定,石蜡包埋.切片,厚5μm.染液的配制:①8.3%盐酸水溶液(HCl8.3ml、蒸馏水 91.7ml);②龙胆紫(上海试剂站)希夫氏试剂的配制同PAS方法,以龙胆紫代替碱性品红;③亚硫酸氢盐溶液(10%偏重亚硫酸钠溶液5ml、1mol/L-HCl5ml、蒸馏水90ml).染色步骤;①切片脱蜡至水—蒸馏水;②8.3%盐酸水溶液水解切片1min(微波仪5档),蒸馏水洗;③     

“DNA的分子结构和特点”单元教学设计

主要阐述"DNA的分子结构和特点"单元教学设计的依据、思路和目标表述,以及模型构建在教学过程中的应用。本单元教学通过访谈法进行学情分析,准确了解学生行为、情感和行为倾向,通过呈现科学史料,引导学生从点、线、面、体4个基本步骤构建DNA模型,并进行模型分析进而理解DNA分子的结构特点和特性。     

“DNA的粗提取与鉴定”实验的改进

"DNA的粗提取与鉴定"实验是人教版高中生物学中的一个重要实验,但教材中给出的实验方案存在一些不足。通过多次实验,从提取DNA的实验材料、提取方法、鉴定方法等方面进行了改进,取得了较好的实验效果。     

“绿叶中色素的提取和分离”实验步骤的改进

"绿叶中色素的提取和分离"实验是普通高中生物学教材中的一个经典实验,通过对这个实验的不断探究,简化了实验步骤,既降低了成本,又减少了环境污染,取得了较好的实验效果。     

DNA甲基化异常与肿瘤耐药

肿瘤耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因, 其产生机制复杂多样, 是多种因素共同作用的结果。近年来, 表观遗传改变在肿瘤耐药中的作用日益受到关注。DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰, 在调节基因表达和维持基因组稳定性中扮演着重要角色。原发性或获得性耐药的肿瘤细胞大多伴随DNA异常甲基化, 越来越多的证据显示, DNA甲基化异常是肿瘤细胞耐药表型产生的重要机制。文章就DNA甲基化异常与肿瘤细胞耐药的关系及相关作用机制进行了综述。     

基于SPE法的新型DNA提取微芯片的制作和研究

在生物医学和临床诊断中,DNA提取是关键的步骤。随着生物分析仪器的小型化和芯片化,有必要制作DNA提取芯片。固相提取法（Solid-Phase Extraction,SPE法）是近年来实验室常用的DNA提取方法,其操作简单,时间消耗少,但是基于SPE法制作的微芯片报道较少,利用硅微加工工艺制作DNA提取芯片,并使用SPE法进行PCR产物中DNA提取实验及大肠菌培养液中DNA的提取实验。此芯片可以在半个小时内完成DNA的提取,易于和别的芯片（如PCR芯片等）整合,具有很好的发展前景。     

牛乳基和羊乳基奶粉中16种氨基酸含量的测定及比较

目的：对乳粉中氨基酸分析的水解方法进行研究,比较牛乳基奶粉和羊乳基奶粉中氨基酸的含量。方法：样品用含巯基乙酸的盐酸溶液水解提取,经定容、过滤、真空浓缩、复溶、过膜后,用氨基酸分析仪测定,外标法定量。结果：应用含0.05%巯基乙酸的盐酸水解液对奶粉样品进行水解的同时有效防止了蛋氨酸的氧化,相对氧化水解方法节省前处理时间,方法的回收率为94%~97%,相对标准偏差小于3.0%。通过对牛乳基和羊乳基奶粉样品中的16种氨基酸分析,牛乳基奶粉中赖氨酸含量略高于羊乳基奶粉,其他相应氨基酸含量不存在显著性差异。结论：该方法准确快速、重现性好,适用于奶粉中氨基酸含量分析的检测要求。     

高压酶解卵清蛋白的工艺优化及其在BHK-21细胞培养中的初步应用

采用高压技术水解卵清蛋白,以水解度为指标,对6种酶的水解效果进行比较,筛选出最佳水解用酶;在单因素实验的基础上,采用正交实验的方法对高压酶解卵清蛋白的工艺进行优化,并对酶解产物在BHK-21细胞培养中的应用进行了初步探讨。结果表明:6种酶中胰酶的水解效果最好,水解最佳工艺为:压力120 MPa、温度50℃、p H值7.0和酶/底物(E/S)=1∶2.5(质量比),水解度达到45.13%;用酶解产物培养BHK-21细胞,细胞生长形态良好,在培养168 h后,试验组细胞最大密度达到6.69×105cells/m L,是对照组的1.56倍,细胞数量增大了33.45倍,说明卵清蛋白酶解产物有明显的促细胞生长效果,为其在细胞培养中的应用提供了理论依据。     

用猪肝进行DNA的粗提取

人民教育出版社生物自然室编著的全日制普通高级中学教科书(试验修订本·必修)<生物>第二册中要求学生做"DNA的粗提取与鉴定"实验,实验材料是鸡血细胞液1.由于用鸡血细胞液为材料,实验成本高,且实验步骤繁多、操作时间长,有些学生当堂实验课不能完成,影响实验效果.