变色素2R水溶液显示神经髓鞘的新方法

本文应用变色素 2R(Chromotrope 2R)显示神经髓鞘的新方法,将神经髓鞘染成红色,形态清晰,颜色鲜艳,操作简便,易于掌握,是显示神经髓鞘较为优良的方法,为神经组织的病理诊断和研究提供了新的技术方法.标本来源:尸检脑组织、脊髓和周围神经组织,经10%甲醛固定,石蜡包埋,切片5μm.试剂的配制:①变色素2R染液:变色素2R(北京化工厂)0.5g,磷钨酸0.6g,冰醋酸1.0g,蒸馏水加至100ml.放置4℃冰箱长期保存,用前回温.②0.2%冰醋酸水溶液:冰醋酸0.2ml,蒸馏水加到100ml.染色步骤:     

以龙胆紫染硫酸酯多醣类的组织化学意义

甲、方法:1)固定于任何固定液皆可,但以酒精为最合适。石蜡切片,厚3微来。切片脱蜡,降酒精,至蒸馏水。2)以龙胆紫(gentian violet)水溶液1∶250,000或1∶1,280,000染色24小时(即0.25毫升0.1%龙胆紫贮存液加入100毫升蒸馏水内;或以0.1毫升0.1%龙胆紫液加入128毫升蒸馏水内)。3)滤纸吸干切片,然后在亚尼林二甲苯(anilinc-xylene)1∶1或1∶2液内脱色及脱水约5分钟(或稍长),直至紫色不再从切片上脱下为止。以二甲苯洗2—3次,用树胶封片。若染透明质酸(hyaluronic anid)可以甘油封片。     

去氧核醣核酸,多醣类,蛋白质的三色染色

甲)材料及固定:哺乳类、两栖组织,包括甲状腺、肾、小肠、胃、睾丸;昆虫的精巢,肌组织;及数种植物组知,固定于 Carnoy 氏液,福尔马林液,Helly 氏液,或 Smith 氏液皆可。乙)试剂试剂 T:天青 A-schiff 液——溶0.5克天青 A(azureA)于100毫升漂白液内(见下)可保持数周,用前加100%偏亚硫酸氢钾(K-me(?)abisulfite)数滴。试剂Ⅱ:漂白液——1N盐酸5毫升;10%偏亚硫酸氢钾或钠5毫升;蒸馏水90毫升;新鲜制备。试剂Ⅲ:高碘酸液(periodic acid solu)——高碘酸0.8克;蒸馏水90毫升;0.2M醋酸钠10毫升;新鲜配制。试剂Ⅳ:硷性复红 schiff 液——根据 Stowell 氏法(1945)配制,溶液置冰箱内可保持数月。     

显示环氧树脂厚切片中多糖,蛋白质和脂类的细胞化学方法

用花生(Arachis hypogaea L.)种子的子叶组织作为模式材料,Epon 812包埋的组织进行厚切片后,按下列三步染色。第一步,PAS 反应:(1)在0.5%高碘酸(0.3%硝酸配制)中10分钟;(2)自来水洗1—2分钟,蒸馏水经过;(3)锡夫试剂中30分钟;(4)偏亚硫酸氢钠溶液三次洗涤,每次2分钟;(5)自来水洗5分钟,蒸馏水经过。第二步,苏丹黑 B 液染色:(1)70%酒精中1—2分钟;(2)新鲜配制的0.3%苏丹黑 B 液(70%酒精配制)中染色,40—60℃,30分钟至1小时;(3)70%酒精中分色1分钟;(4)自来水冼,蒸馏水经过。第三步,考马斯蓝染色:(1)7%醋酸中1—2分钟;(2)1%考马斯蓝(7%醋酸配制)中染色,60℃,20分钟;(3)0.1%醋酸液中分色1分钟;(4)自来水冼5分钟,蒸馏水经过;(5)自然干燥或在40℃电热温箱中烘干。干燥后的切片用甘油胶封固。经这三步染色的切片,细胞内的多糖、脂类和蛋白体同时被显示:淀粉粒及纤维素的细胞壁为樱红色,油滴为黑色,蛋白体为蓝色。制片能长期保存。     

病理组织PAS染色影响因素分析

目的分析病理组织过碘酸雪夫氏(periodic acid Schiff, PAS)染色的影响因素,以期提高其染色效果。方法选取已知含有PAS阳性物质的胃粘膜组织,分别制作成蜡块,通过对比试验,比较高碘酸水溶液不同染色时长、雪夫氏(Schiff)试剂不同配制方法、Schiff试剂不同保存时间对PAS染色质量的影响。结果胃粘膜组织在使用高碘酸水溶液染色11～15min优于其他时长,Schiff试剂热配法优于冷配法,试剂保存2个月内的染色效果优于试剂保存大于2个月者。结论胃粘膜组织使用高碘酸水溶液染色11～15min、热配法配制的Schiff试剂、保存在2个月内的Schiff试剂进行染色效果最佳。     

血涂片制作的几点体会

制作方法：血涂片Wright’s染色法。①采血、制血膜、水平放置血膜片晾干。②血膜片固定于甲醇2-3min,取出晾干。③用蜡笔在血膜片两端划一染色区,避免染色时染液外溢。④往血膜片滴加瑞氏染液（瑞氏染料0．1g＋甲醇60ml）,数十秒钟后,再加一倍于染液的蒸馏水,染色5-8min。     

小肠腺三色染色法

我们采用三色染色的方法对小肠肠腺细胞进行染色,杯状细胞、潘氏细胞、胞质和肠腺基膜呈现三种不同的颜色。细胞形态清晰,对比鲜艳,收到了理想效果。材料和方法1·材料人小肠为手术切除新鲜标本。10%甲醛固定24-48h,常规脱水,石蜡包埋。2·方法石蜡切片厚4-6μm,切片脱蜡,蒸馏水洗2m in,复合染液染3-5m in,70%乙醇分色,蒸馏水洗1m in,阿利新蓝染5m in,蒸馏水轻洗;0·2%光绿复染胞质、肠腺基膜20s;70%盐酸乙醇分色;梯度乙醇脱水;二甲苯透明;中性树胶封固。3·染液配制(1)复合染液:1%伊红(1g伊红,70%乙醇100m l)40m l,2%偶氮桃红(2g偶氮桃红甲…     

神经纤维染色及应用体会

在神经组织的疾病诊断和科研中 ,应用常规HE染色可以观察到神经元及神经纤维的全貌 ,但是它们的细微结构和某些特殊成分需要特殊的染色方法来显示。在工作实践中 ,对神经纤维的染色 ,我们在应用 Bielschowsky染色法的基础上 ,添加以微波辐射技术 ,取得了良好的染色效果 ,经过认真的观察 ,反复实验对比 ,总结了几点应用体会 ,现介绍如下 :1 .染色方法( 1 )载玻片涂胶 ,石蜡切片厚 8～ 1 0μm,放入70℃烤箱中过夜。( 2 )脱蜡至水洗 ,蒸馏水洗 3次。( 3)放入 2 0 %硝酸银水溶液中浸染 ,微波 5档、4分钟 ,保温 5分钟。( 4 )蒸馏水洗 2次。( 5 …     

内耳整块染色石蜡包埋制片法

内耳制片常用的是火棉胶——石蜡双重包埋H-E片染法。此法制片步骤较多,不易掌握。我采用Bouin氏固定液固定,H-E整块染色、石蜡包埋法制片,操作简便,易于成功,内耳的基本结构(前庭膜、盖膜、毛细胞都完好无损,如取材适当,可在同一切片同时显示壶腹嵴。染色液的配制: 1.苏木精染液的配制: 苏木精 25毫克硫酸铝钾 1.25克碘酸钠5毫克蒸馏水 75毫升由于以上药品称量很小,故需称的较准确。配出来的液体若呈现混浊,则是因为以上药品(主要是碘酸钠)称得不准造成的,这种混浊染色液不能用。 2.复制伊红染色液的配制: 将伊红(Y或B均可)0.5克溶于3毫升蒸馏水中,溶解后将冰醋酸—滴—滴加于其中,边滴边搅动,     

微波辐射取代氧化剂配制苏木素法

传统配制苏木素染液均以火加热,用有剧毒的氧化汞作为氧化剂。常常使液体外溢,氧化程度难以控制,有效使用时间缩短。我们经过多次实验,采用微波辐射代替氧化汞促进氧化苏木素取得了满意的结果,现介绍如下: 染液的配制:甲液:苏木素0.5g,无水酒精5ml;乙液:铵明矾10g,蒸馏水100ml。取乙液经医用微波仪(浙江临安电子器材产品,TWY781型)2档辐射2min,甲液微波5档辐射2min,然后将甲液、乙液混合,4档辐射10～15min,迅速放入冷水中冷却,最后加入2％冰醋酸即可使用。     

改进的Bielschowsky氏法对神经末梢的显示

在研究神经组织的形态方面 ,尤其是显示各种神经末梢则以 Gross- Schultze氏改良 Bielschowsky氏法较为理想 ,最大特点是在镜下可控制其反应程度或效果。神经组织的浸染 ,最细的末梢也能清晰显示出 ,而结缔组织着色很淡。本方法经多年实验、探讨并在原法基础上 ,根据药品及现有条件进行部分改进 ,效果较好。制作方法 :1 .组织固定于 1 2 %福尔马林溶液 ,1 0天以上。2 .取出已固定好的组织块经流水冲洗 1小时 ,蒸馏水浸洗 2～ 4小时。3.冰冻切片 (2 0～ 2 5μ)进入蒸馏水。4.入 2 0 %硝酸银水溶液浸染 1小时 (温度2 5℃ )。5.入 5%福尔马林…     

观察"胞间连丝"实验的改进

观察“胞间连丝”是生物学专业及中学生物学演示不可缺少的实验。实验材料一般选用柿核胚乳 ,作徒手切片及染色来观察。本人在多年实验教学过程中 ,曾在前人介绍处理染色基础上进行改进 ,切片用 1%龙胆紫 - 1%次甲基兰(或甲基兰 ) - 1%酸性品红复染法进行观察 ,可当堂完成 ,方法简易 ,效果较好 (《徽州师专学报》自然版 ,1990 .1.)。近两年来 ,又在此基础上对染色方法进一步改进 ,切片改用 0 .2 %龙胆紫溶液染色 10 min左右 ,然后水洗观察 ,可见柿核胚乳细胞壁被染色浅紫色 ,而胞间连丝被染成紫色 (或深紫色 )。此染色方法更简便单一 ,效果…     

介绍一种改良的油红O脂肪染色法

在日常病理诊断和科研工作中,显示组织内的脂肪常采用油红O进行染色。应用过程中发现,配制该染液所用的丙酮和异丙醇容易挥发,致使染液产生沉淀,染色时易在组织切片上留下红色的结晶,给染色结果的准确判断带来很大影响。为此,我们对染液配方进行了改进,收到较好效果。材料和方法1·标本人或动物的肝组织等,甲醛—钙液固定,冰冻切片,厚10μm。2·改良的油红O染色液油红O 0.5g,50%乙醇100m l。将油红O溶于乙醇内,且不断搅拌至完全溶解即可。配制好的染液置磨口瓶内保存备用。3·染色步骤①切片干燥后入50%乙醇稍洗;②油红O乙醇染液作用8m in…     

最近台湾举行有关农、医学术研讨会

1.农学RFLP技术研讨会 1990年6月18日至22日在台湾大学由台大农艺系和国科会生命科学研究推进中心主办。头1天的内容:①RFLP在作物育种上的应用(齐延三博士);②PCR未来使用潜力(马驭空博士);③国科会农学RFLP群体研究计划简介(黄懿秦等);次日后的内容:①植物细胞核DNA抽取;②细菌的转型及培养;③DNA超高速离心分离技术;④核酸鉴识酶的使用,⑤细菌质体DNA抽取;⑥DNA电泳、探针的制备;⑦PCR在RFLP技术的应用等。     

光波/微波组合-EDTA修复COX-2抗原及其在乳腺癌的表达及意义

目的观察不同抗原修复方法及修复液对COX-2抗原表达的影响及其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法用光波/微波、高压锅结合枸椽酸缓冲液、EDTA作抗原修复处理,分别用即用型和浓缩型COX-2单克隆抗体对70例乳腺癌石蜡切片进行免疫组织化学染色。结果①光波/微波组合-EDTA、CA修复浓缩型COX-2的阳性率均比即用型COX-2的阳性率高(P0.01)。②高压锅抗原修复处理切片的免疫组化染色阳性率略比光波/微波的免疫组化染色阳性率高,但无统计学意义(P0.05);高压锅抗原修复处理的切片组织结构破坏程度和掉片情况均比光波/微波处理的重;③EDTA修复处理切片的免疫组化染色阳性率明显比用CA修复处理切片的免疫组化染色阳性率高(P0.01)。④COX-2表达水平与淋巴结转移有显著关系(χ2=5.24,P0.05);与年龄、肿瘤大小、组织学类型和分级之间无明显关系(P0.05)。结论用光波/微波-EDTA修复COX-2抗原,浓缩型COX-2抗体标记可明显提高免疫组织化学染色的敏感性,具有定位准确、阳性率高、操作简单、安全、组织结构保存好、不易掉片等优点;COX-2的表达与淋巴结转移显著相关,可作为乳腺癌的预后指标。     

PAS反应在显示真菌中的应用和体会

ＰＡＳ反应 (Ｐｅｒｏｄｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｃｈｉｆｆｒｅａｅｔｉｏｎ)属于糖类的组织化学反应 ,它不仅在对糖原、粘蛋白、粘多糖及含碳水化合物的物质有特异性 ,而且对真菌的显示亦十分理想。现将ＰＡＳ显示真菌的体会予以介绍 :1、材料和方法1.ｌ材料选取外检中食道、胃、鼻腔、上颌窦、肺、皮肤、指 (趾 )甲等组织ＨＥ染色切片中疑有真菌感染者5 0例。重新切片。1.2　改良Ｓｃｈｉｆｆ试剂的配制 ,碱性品红 0 5ｇ加1ｍｏｌ/Ｌ盐酸 15ｍｌ,振荡使之溶解 ,再加 0 6 %偏重亚硫酸钠 85ｍｌ。紧盖瓶塞 ,振荡后在室温下放置 2 4ｈ ,溶液呈草…     

毛细管内均相辣根过氧化物酶(HRP)与核酸杂交偶联HRP 催化化学 发光比较研究

目的:了解毛细管内核酸偶联和游离辣根过氧化物酶(HRP)催化化学发光差异。方法:不同浓度HRP和经核酸杂交固定于毛细管内壁HRP催化化学发光反应。结果:①游离HRP催化化学发光线性检测范围窄(2.7×10-5-1.3×10-6mg/ml,R2>0.96),下限为1.0×10-7mg/ml;②2.0×1014-2.0×106copies/ml的5μl单链DNA杂交后,1.0-10min时DNA浓度M对数(lgM)与化学发光I值线性相关(R2>0.99),且大于阴性I值平均数+3倍标准偏差(s.d);③5.0×1011-5.0×106copies/ml的5μl PCR产物杂交后,10min内PCR产物对数lgM与I值线性相关(R2>0.97),且大于阴性I值平均数+3倍标准偏差(s.d)。4.0-7.0min内lgM与I值的R2>0.99,3次平行检测标准偏差<5.0%。结论:毛细管内核酸杂交的HRP催化化学发光检测线性范围宽、灵敏度高、底物用量少,有望用于临床核酸分子杂交检测。     

观察"胞间连丝"染色方法的改进

在大部分的高校观察“胞间连丝”都是观察现成的永久装片 ,而在一般的专科院校及中学 ,由于条件的限制 ,缺乏现成的装片 ,大都选用柿核的胚乳作实验材料 ,进行徒手切片和染色来观察。笔者对染色的方法作了一些改进 ,介绍如下 :1　水装片的制作取新鲜的柿核 ,除去种皮 ,取一窄条用刀片作连续的徒手切片 ,取较薄的切片制成水装片 ,用显微镜检查。2　染色方法和观察结果1 )装片用质量分数 0 .1 %龙胆紫溶液染色 5～ 1 0min ,水洗、吸干 ,再用质量分数 0 .1 %酸性品红复染 5～1 0min ,水洗、镜检 ,可见柿核胚乳细胞壁染成了浅红色(或带浅紫色 ) …     

微波在蛋白质电泳染色和脱色中的应用

经过实验摸索和实践 ,我们发现一种利用微波处理在10ｍｉｎ内可使聚丙烯酰胺凝胶染色及脱色完成的方法 .ａ 将电泳后的凝胶 (厚度 0 75ｍｍ)取出 ,置于培养皿中用蒸馏水冲去残留缓冲液 .ｂ 加入染色液将凝胶完全浸泡其中 ,放入微波炉内高火档照射 2 0ｓ,停留 1ｍｉｎ ,再照射 10ｓ.ｃ 取出染色液 (回收还可再用 2次 ) ,用蒸馏水冲去凝胶上残留染色液 .ｄ 加入脱色液 ,高火档照射 2 0ｓ ,取出脱色液 ,然后加入新鲜脱色液再照射 2 0ｓ,重复5～ 6次 ,直至背景清晰透明 .实践中我们认为应注意以下几点 :ａ 盛试剂的培养皿上面应盖一稍大的培养…     

光合细菌最佳生长条件筛选

目的:优化光合细菌的最佳培养条件。方法:通过绘制不同的生长曲线研究不同培养基及不同培养条件等理化因素对2株光合细菌(类球红细菌1.2174、沼泽红假单胞菌1.2180)生长的影响。结果:①1.2174最佳条件:培养基(蒸馏水配制的液体富集培养基和固体ATYP);温度(35℃);pH值(8.0和9.0);接种量(培养基/种子液5:1和4:1)。②1.2180最佳条件:培养基(海水配制的ATYP和蒸馏水配制的液体富集培养基);温度(25℃和35℃);pH值(7.0和8.0);接种量(培养基/种子液2∶1和4∶1)③两株菌的光照、氧需求程度、菌群协同和振荡条件相同。结论:通过筛选,蒸馏水配制的液体富集培养基和固体ATYP培养基、35℃、1000lx、pH值8.0、培养基/种子液4∶1、微氧、有菌群协同、振荡可作为二者的通用培养条件。