微核形成与细胞周期关系的初步研究Ⅰ.人体全血辐射处理后不同放置和培养时间对微核率的影响

本报告应用γ-射线诱发微核、放射性自显影等技术分析细胞周期,研究淋巴细胞微核形成与细胞周期间的定量关系。主要结果如下:(1)经400rad照射的静脉血,在室温下放置1.5小时,或在37℃下放置5小时,此时淋巴细胞属G_0期。和照射前相比,两组微核率均显著增加(P<0.01)。(2)照射静脉血经pHA刺激培养23—24小时收获细胞,此时转化淋巴细胞应属G_1期,分别计数转化和未转化(G_0期)淋巴细胞微核,与照射前未培养淋巴细胞相比有显著增加(P<0.01)。(3)400rad照射静脉血培养72小时后,淋巴细胞微核较培养前增加14.5倍。根据放射性自显影等细胞周期分析结果表明,微核在细胞周期各阶段均可形成。     

表观基因组学研究方法进展与评价

表观遗传学是指基于非基因序列改变所致基因表达水平的变化, 如DNA甲基化和组蛋白修饰等; 表观基因组学则是在基因组水平上对表观遗传学改变的研究。DNA甲基化已经成为表观遗传学和表观基因组学的重要研究内容, 人类表观基因组计划的最终目标是绘制出人类基因组中甲基化可变位点图谱。随着研究的不断深入, 各种研究方法被开发出来以满足不同类型研究的需要。文章主要介绍目前已有的表观基因组学研究方法, 并对其进行简要分析和总结。     

人体末稍血微核方法的建立

作为染色体损伤快速检测的微核方法,近 年来获得广泛的应用：评价各种理化因子的致 癌致突变能力、监测环境污染等。常用实验材 料是某些植物组织、啮齿动物的骨髓细胞和人 体静脉血淋巴细胞等。显然。要评价理化因子 对人类的危害程度,以人类细胞为实验材料较 为合宜。以往人体静脉血淋巴细胞检测主要有 两种方法：(1) rli}4脉血经短期培养后制片;(2) 静脉血分离淋巴细胞直接制片。根据我们的实 践,前一方法手续繁复,且需要一定的实验条 件;后一方法需血量约1-2m1,对一个病员作 系统观察常难以接受。因此,我们实验室建立 了末梢血微核检测法,仅需指尖刺血0.06m1,同 时简化了一些实验过程,使此法更简易可行。 用皮刺血检测微核,国内外尚未见报道,现将过 程简述如下：     

Alu序列甲基化水平与两种乳腺癌细胞系转移能力高度相关

目的探讨Alu序列甲基化与乳腺癌转移潜能的关系。方法用亚硫酸氢盐修饰联合限制性内切酶分析法（combined bisulfite restriction analysis,COBRA）、亚硫酸氢盐修饰结合直接测序法（bisulfite sequencing,BSP）检测两株转移能力不同的乳腺癌细胞系MCF7和MDA—MB-435S中Alu甲基化状态,每个样品挑取10个克隆测序。结果MCF7和MDA—MB-435S中Alu甲基化水平均明显低于报道的正常人体细胞Alu甲基化水平,但MCF7中Alu的甲基化水平明显高于MDA-MB-435S。同时,Alu甲基化位点在基因组中分布不均匀。结论乳腺癌的转移潜能可能与Alu序列的去甲基化以及去甲基化位点的分布相关,值得进一步探讨。     

筛选MDA-MB-231乳腺癌耐药细胞株两种方法的比较

目的 比较间歇刺激法和浓度梯度递增法对雌激素受体（estrogen receptor,ER）阴性的乳腺癌耐药细胞株的建立,为进一步探讨ER阴性乳腺癌可能的耐药机制.方法 采用间歇刺激法和浓度梯度递增法,用紫杉醇诱导6个月,分别建立了耐药细胞系231 TIM10和231 TAX8,并用倒置相差显微镜、MTT法、Western印迹、流式细胞术比较了两株耐药细胞的形态学变化、耐药表型、ER-α蛋白表达及紫杉醇诱导细胞G2/M期阻滞效应的改变等生物学特性.结果 间歇刺激法比浓度梯度递增法更容易诱导ER阴性的乳腺癌细胞获得耐药表型,231 TIM10耐药指数为11.9,231 TAX8耐药指数为2.3.用紫杉醇处理后,231 TIM10细胞能够抵抗100 nmol/L紫杉醇引起的G2/M期阻滞效应,231 TAX8细胞仅能够抵抗10 nmol/L紫杉醇引起的G2/M期阻滞效应.231 TIM10细胞在诱导过程中形成了两个细胞亚群,体积增大明显,细胞之间黏连更加明显.MDA-MB-231敏感细胞和两株耐药细胞均无ER-α蛋白的表达.结论 间歇刺激法更合理地模拟了临床上ER阴性乳腺癌的耐药过程,建立了可靠的细胞耐药模型,为耐药机制研究建立了基础.     

小鼠尾血淋巴细胞微核制片法

小鼠骨髓细胞微核测试法建立以来,获得了广泛的应用,可评价各种理化因子的致癌、致突变效应,并可了解对生殖细胞的遗传效应。制备小鼠骨髓细胞微核片,程序较复杂,且需处死动物,所以实验必须采用组间设计,显然没有采用自身对照、系统观察为合理和节约实验动物。我们采用肝素抗凝,甲基纤维素(下简称甲纤)促红细胞凝集,建立了仅需     

人体末梢血微核测试法的研究

微核测试法(micronucleus test)是常用的遗传毒理学方法之一。近年来,被广泛用来评价各种理化因子的致癌、致突变效应、监察环境污染等,而且比较迅速而敏感(Wild,1978:Adler,1980;Tate et al.,1980;Heddle,1973;Schmid,1977)。以往常用的实验材料是某些动植物的组织(Heddle,1973;Schmid,1977;山东海洋学院遗传教研组,1981)。较近,有作者报导了人体静脉血和骨髓细胞微核法(Jensen,1977;Countryman,1976;云南省动物研究所二室辐射细胞组、上海市工业卫生研究所三室血液组,1978),我们首先简报了1滴人手指血的微核测试法(薛开先等,1982)。     

食管癌患者放射敏感性与微核指标的研究

应用末梢血微核测试法,采用自身对照,系统地观察了100例食管癌病人在放疗过程中微核率的动态变化,分析了个体放射敏感性,并结合临床疗效进行预测的探讨,获得如下结果:(1)在放疗过程中,随着照射累积剂量的增加,全组平均微核率呈正比例增加,配得直线方程为(?)=0.6390+0.3772D;(2)本组病员对放射线的反应各不相同,大致可分为四种类型,它们的放射敏感性顺序是弱型((?)=0.1838+0.1285D)<一般型((?)=0.3908+0.3413D)<抛物线型((?)=0.8997+0.8408D-0.0846D)<敏感型((?)=10~(-0.0332+0.1730D))。男性病员较女性对射线作用更敏感;(3)放疗效果与微核率的改变无明显相关。     

DNA甲基化异常与肿瘤耐药

肿瘤耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因, 其产生机制复杂多样, 是多种因素共同作用的结果。近年来, 表观遗传改变在肿瘤耐药中的作用日益受到关注。DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰, 在调节基因表达和维持基因组稳定性中扮演着重要角色。原发性或获得性耐药的肿瘤细胞大多伴随DNA异常甲基化, 越来越多的证据显示, DNA甲基化异常是肿瘤细胞耐药表型产生的重要机制。文章就DNA甲基化异常与肿瘤细胞耐药的关系及相关作用机制进行了综述。     

微核形成与细胞周期关系的初步研究Ⅱ.微核形成的放射性自显影和显微形态学研究

本报告应用γ-射线处理、PHA刺激,放射性自显影等方法研究了微核在人淋巴细胞各周期阶段形成的形态学证据。结果表明,经体外照射的人体外周血,在其间期淋巴细胞各阶段:G_0、G_1、S和G_2期,均可有微核形成,并观察到微核形成的中间过程,核变形,核物质膨出并延伸,中间连丝断裂或在细胞质中消失,与主核完全脱离后微核形成。在有丝分裂中,后期细胞也观察到无着丝点染色体断片和落后染色体,它们有可能形成微核。这样看来,细胞周期各阶段均可能形成微核。作者还观察到胞外微核的形成,并认为它的增多可能是一种病理现象。