灵芝子实体和孢子粉三萜含量的测定及体外抗肿瘤活性的评价

目的测定灵芝子实体和破壁灵芝孢子粉中的三萜含量,并评价其醇提物的体外抗肿瘤活性。方法采用高氯酸显色法测定灵芝子实体和破壁灵芝孢子粉中的三萜含量,采用磺酰罗丹明B蛋白染色法(sulforhodamine B,SRB)评价灵芝子实体和破壁灵芝孢子粉醇提物对宫颈癌He La细胞、结肠癌HCT-116细胞和乳腺癌MCF-7-ADM细胞的体外抗肿瘤活性。结果研究的灵芝子实体中三萜质量分数为0.92%,破壁灵芝孢子粉供试品中三萜质量分数实测值为2.95%,但是灵芝孢子粉中脂肪油对高氯酸显色法有极大的干扰,因此破壁灵芝孢子粉三萜的实测值可能远高于实际值。活性评价结果显示,灵芝子实体的醇提物在100μg/m L时,其对人宫颈癌He La细胞和乳腺癌MCF-7-ADM细胞表现出了较强的抑制作用,抑制率分别为94.54%和71.30%;对结肠癌HCT-116细胞表现出较弱的抑制作用,抑制率为20.68%。破壁灵芝孢子粉的醇提物在100μg/m L和10μg/m L时,其对宫颈癌He La细胞表现出了弱的抑制作用,对另外2种细胞系仅在100μg/m L时表现出较弱的抑制作用。结论灵芝子实体的醇提物含有三萜并具有较好的抗肿瘤活性,可以将其开发为辅助治疗癌症的药物或保健品。含有脂肪油的灵芝孢子粉直接采用高氯酸比色法测定会高估其三萜的含量,需要进一步开发准确、可行的测定方法。     

稻曲病菌厚垣孢子不同破壁方法的比较

为了探究稻曲病菌[Ustiloginoidea virens(Cooke)Takahashi]厚垣孢子的最佳破壁方法,研究采用4种破壁法对该病菌黄色和黑色厚垣孢子进行破壁,血球计数板计算破壁效果,并用考马斯亮蓝法测定不同破壁方法中厚垣孢子壁内可溶性蛋白含量。结果表明,在普通光学显微镜下观察,破壁后厚垣孢子多数为碎片,少数为孢壁内空圆球。4种破壁方法中液氮研磨-超声破碎法破壁效果最好,黄色和黑色厚垣孢子的破壁率均可达98%以上,用该法破壁测得的黄色和黑色厚垣孢子壁内可溶性蛋白质含量也最高。由此可见,液氮研磨-超声波破碎法是一种稻曲病菌厚垣孢子破壁的有效、简便、适宜在实验室应用的方法。     

适用于双向电泳的米曲霉孢子破壁方法研究

为探究米曲霉(Aspergillus oryzae)孢子适用于双向电泳的最佳破壁方法,采用5种不同的破壁方法对米曲霉孢子进行破壁,用血球计数板进行破壁率计算,Bradford方法测定释出的可溶性蛋白含量,并进行双向电泳可行性验证。结果表明,在普通光学显微镜下,破壁后的米曲霉孢子多为碎片,极少数为孢壁内空圆球。5种破壁方法中石英砂研磨+超声、液氮研磨、MP·Fast-prep均质器法在孢子浓度较低(107个/m L)时破壁效果较佳,但是随着孢子浓度的不断提升(109个/m L),只有均质器法能保证较高的破壁率,破壁率高达90%,且适用于双向电泳的蛋白质提取。     

超微粉碎后超临界CO2萃取灵芝孢子挥发油组分的GC-MS分析

采用扫描电子显微镜观察比较原木灵芝孢子超微粉碎后的破壁形态,应用超临界CO2流体萃取技术从破壁孢子粉中提取分离孢子挥发油。气相色谱-质谱联用分析其组分,结果表明超微粉碎后超临界萃取得到的灵芝孢子挥发油化学成分较为丰富。分离得到29个峰,共鉴定出4类25种成分,脂肪类17种,萜类3种,芳香类2种,杂环类3种;有些成分如α-愈创烯(倍半萜)、τ-杜松烯(单萜)等均首次发现于灵芝孢子;此外,1,3,5-环庚三烯(、1α,2β,4α,5β)-四氢-3-氧杂三环辛烷及2-氯-乙基岩芹酸酯等稀有脂肪类化合物也是首次从灵芝孢子中检出。     

破壁灵芝孢子粉的质量探讨

研究和探讨破壁灵芝孢子粉的质量标准,利用性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别和主要成分含量测定的方法,初步掌握破壁孢子粉质量特性。薄层色谱鉴别可见清晰荧光斑点,其醇溶液加入硫酸后可见棕色环。总灰分测定显示:采自岫岩灵芝孢子粉和山东一等孢子粉灰分较低,山东三等孢子粉灰分含量较高。不同来源的样品总三萜类含量各不相同,高者达2.24%,低者1.26%。综合各项检测结果,初步确定了破壁灵芝孢子粉质量评价指标,方法稳定,可操作性强。     

纳米级灵芝子实体粉末和破壁灵芝孢子粉体外抗肿瘤活性研究

对纳米级灵芝子实体粉末及破壁灵芝孢子粉石油醚提取物(PE)、氯仿提取物(CE)、丙酮(AE)、甲醇提取物(ME)、水提取物(WE)与灵芝子实体及灵芝孢子提取量进行对比,利用GC-MS联用仪对石油醚提取物进行了成分分析鉴定,对水提物中总糖进行了含量测定,并利用宫颈癌细胞Hela和晶体上皮细胞SRA01/04进行了体外增殖作用和剂量效应关系研究,为灵芝资源的保护及进一步开发利用提供理论基础。结果表明,纳米化灵芝子实体及破壁灵芝孢子不同溶剂提取量显著增加,纳米级灵芝子实体粉末水提取物具有抑制宫颈癌细胞Hela和晶体上皮细胞SRA01/04增殖的作用。破壁灵芝孢子各溶剂提取物对宫颈癌细胞Hela和晶体上皮细胞SRA01/04没有明显的增殖抑制作用。     

花粉破壁法对花粉蜂蜜酒中氨基酸含量的影响

以蜂蜜为主料,加入花粉,经过调配、发酵、过滤、陈酿后获得氨基酸含量丰富的酒精饮料。花粉破壁分别采用超声破碎法、酶法和温差破壁法这几种不同方式处理,并添加于蜂蜜发酵液中,经酒精发酵,制得富含活性成分的花粉蜂蜜酒。最后利用毛细管电泳法来测定成品酒中的氨基酸,通过分析优化出最佳的花粉破壁方法。研究结果表明花粉经过温差破壁法处理后加入发酵液中,其成品的氨基酸含量最高。该产品不仅营养价值高,风味独特,而且还具有良好的保健作用。     

3种破壁方法提取念珠菌总RNA效果的比较

念珠菌是最主要的致病性真菌之一。随着医学分子生物学的发展,有关对念珠菌的致病基因及其表达的研究越来越广泛,进行这些研究的一个关键步骤就是RNA的提取。主要由几丁质组成的真菌的细胞壁厚且坚韧,因此破壁是提取念珠菌RNA的关键。常用破壁方法包括:热酸性酚裂解法破壁酶、液氮破壁、酸洗玻璃珠破壁、微波破壁等[1,2]。酶与细胞的孵育会影响RNA的质量[3],热酸性酚裂解法RNA提取效率不高[4],超声波破壁对实验室设备要求较高。本实验我们设计了国内外常用的液氮研磨、酸洗玻璃珠破壁法来提取RNA。另外,考虑到温度对RNA的影响,还加…     

利用CTAB法和子囊孢子破壁法提取冬虫夏草菌DNA

通过CTAB法从冬虫夏草菌株和天然冬虫夏草不同部位提取DNA,并用PCR扩增进行验证,证明了CTAB法适合从冬虫夏草子座、菌核和冬虫夏草菌培养物中提取DNA。首次报道1种将子囊孢子破壁直接进行PCR扩增的方法,并比较了该方法和CTAB法在提取冬虫夏草DNA方面的差异。2种方法获得的DNA用于PCR扩增均能得到较好的结果。     

高温湿热酸法破壁提取法夫酵母胞内虾青素

法夫酵母是一种能积累虾青素的红酵母, 对其进行破壁是当前虾青素工业化提取生产的瓶颈工艺。研究在高温湿热条件下,低浓度盐酸对法夫酵母破壁而提取其胞内虾青素的工艺。探讨了不同破壁温度、盐酸浓度、液料比与破壁处理时间等因素对法夫酵母破壁后虾青素及类胡萝卜素提取率的影响, 确定了高温湿热酸法破壁提取虾青素的最佳条件为: 饱和蒸汽压力 0.1 MPa (121°C), 盐酸浓度0.5 mol/L, 液料比 (V/W)30 mL/g, 破壁时间2 min。在最佳条件下进行中试放大实验, 可得到虾青素与类胡萝卜素的提取率分别为: (84.8±3.2)%, (93.3±2)%。经优化后的新破壁工艺安全高效, 不会有毒性残留, 具有良好的工业应用前景。     

灵孢多糖辅助治疗抑郁症的作用及机制

目的:建立大鼠抑郁模型,研究和探讨灵孢多糖注射液辅助治疗抑郁症的作用及机制。方法:将48只SD大鼠随机分为正常组、抑郁组、生理盐水组及灵孢多糖(低剂量、中剂量、高剂量)治疗组各8只。应用慢性应激刺激的方法诱导抑郁组、生理盐水组、灵孢多糖治疗组大鼠抑郁,通过行为学指标评估建模是否成功。建模成功后,在生理盐水组中注射生理盐水;在灵孢多糖治疗组中分别注射低、中、高剂量灵孢多糖注射液,比较各组间的疗效差异。采用免疫组化的方法测定大鼠脑内多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺、酪氨酸羟化酶等单胺类神经递质含量的表达情况。结果:成功的建立了大鼠抑郁模型,抑郁组中大鼠各项行为学指标与正常组相比均明显减少,差异有统计学意义(P0.05);灵孢多糖治疗组大鼠脑内的多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺、酪氨酸羟化酶与抑郁组、生理盐水组大鼠脑内的含量均明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:灵孢多糖注射液对改善抑郁症状有良好的疗效,具有辅助治疗抑郁症的作用。     

灵孢多糖辅助治疗抑郁症的作用及机制

目的：建立大鼠抑郁模型,研究和探讨灵孢多糖注射液辅助治疗抑郁症的作用及机制。方法：将48只SD大鼠随机分为正常组、抑郁组、生理盐水组及灵孢多糖（低剂量、中剂量、高剂量）治疗组各8只。应用慢性应激刺激的方法诱导抑郁组、生理盐水组、灵孢多糖治疗组大鼠抑郁,通过行为学指标评估建模是否成功。建模成功后,在生理盐水组中注射生理盐水;在灵孢多糖治疗组中分别注射低、中、高剂量灵孢多糖注射液,比较各组间的疗效差异。采用免疫组化的方法测定大鼠脑内多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺、酪氨酸羟化酶等单胺类神经递质含量的表达情况。结果：成功的建立了大鼠抑郁模型,抑郁组中大鼠各项行为学指标与正常组相比均明显减少,差异有统计学意义（P〈0．05）;灵孢多糖治疗组大鼠脑内的多巴胺、去甲肾上腺素、5一羟色胺、酪氨酸羟化酶与抑郁组、生理盐水组大鼠脑内的含量均明显升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：灵孢多糖注射液对改善抑郁症状有良好的疗效,具有辅助治疗抑郁症的作用。     

灵芝漆酶催化直接耐晒翠蓝GL脱色条件的优化

采用灵芝菌株发酵所得的漆酶, 对酞菁类染料直接耐晒翠蓝GL进行了催化脱色实验, 确定了脱色反应的最适条件。结果表明: 单独使用灵芝漆酶粗酶液对直接耐晒翠蓝GL具有很好的脱色效果。其最适脱色pH为3.0, 最适脱色温度为40°C, 最适漆酶用量是40 U/mL, 最适染料浓度为60 mg/L。以上述最适脱色条件对直接耐晒翠蓝GL进行脱色实验, 反应70 min, 脱色率可达94.3%。研究结果显示, 所试灵芝漆酶在印染废水治理方面具有良好的应用前景。     

11个灵芝菌株的分子ID构建

[目的]收集11株灵芝菌种为材料,在分子水平上对其进行分类鉴定,并构建分子ID.[方法]采用ITS和SSR分子标记技术,对11株灵芝进行分子鉴定分析.[结果]通过内转录间隔区(ITS)序列测定分析表明,与GenBank上登录的灵芝(Ganoderma lucidum)菌株ITS序列相似度达到99％,在种的水平上证明实验所采用的供试菌株均属灵芝种(Ganoderma lucidum).利用SSR分子标记技术对菌株进行引物扩增,综合多态性条带,用NTSYS软件进行聚类分析,相似度在0.62水平上,1 1个灵芝菌种被分成4个类群,其中GL-2与GL-4各自聚为一类.用ID Analysis 1.0软件进行数据分析表明,用5对SSR引物可将11株灵芝供试菌种完全区分开,并构建其分子身份证.[结论]基于SSR分子标记构建灵芝菌属的分子ID是可行的.     

响应面设计法优化蕨渣基质的灵芝培养条件

探索灵芝在以蕨渣为主要成分的固态基质中的培养条件,可为蕨渣的开发利用提供理论依据。以蕨渣为主要原料,采用响应面法对灵芝培养条件（基质蕨渣比例、基质含水量和培养温度）进行优化。结果表明,基质蕨渣比例、基质含水量和培养温度对灵芝菌丝日平均生长速率均有极显著的影响（p<0.01）,且基质含水量与培养温度之间、基质蕨渣比例与基质含水量之间存在交互作用。优化出灵芝培养条件为蕨渣比例85%,基质含水量62.5%,培养温度27℃,在此条件下,灵芝菌丝日平均生长速率为3.48mm/d。多元回归分析结果显示,基质蕨渣比例、基质含水量、培养温度与菌丝日平均生长速率之间回归模型高度显著,可用于实际生产预测。首次报道了利用蕨渣培养灵芝,为蕨渣进一步的开发研究奠定基础。     

灵芝孢子油微胶囊制备技术

灵芝孢子油是从灵芝孢子粉中提取的具有一定药理活性的脂质成分。为提高灵芝孢子油稳定性,以大豆分离蛋白和麦芽糊精为壁材,采用喷雾干燥法和冷冻干燥法制备灵芝孢子油微胶囊。通过试验优化了制备工艺条件并比较了两者干燥方式制备微胶囊的理化性质。结果表明：最佳工艺为大豆分离蛋白和麦芽糊精质量比1:1、固形物含量20%、均质压力30MPa、壁材芯材质量比4:1。两种干燥方式微胶囊流动性、溶解性均较好,差异不显著。但两种微胶囊形态差异较大,喷雾干燥微胶囊整体呈球状、表面紧密无裂缝有凹陷,包埋率为90.84%;冷冻干燥微胶囊结构疏松呈片状,表面多孔。因此喷雾干燥法更适合包埋灵芝孢子油。     

菌草灵芝与段木灵芝的功效成分的比较研究

测定并比较菌草灵芝和不同产地的段木灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率的差异。结果表明,菌草灵芝和不同产地的段木灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率存在着差异,菌草灵芝中的粗多糖、三萜类物质和孢子油中三萜类物质的含量和孢子油得率都高于段木灵芝。